灭活支气管博德特氏菌培养物的方法，由此制得的细菌组合物及含有它的疫苗及其用途技术

本发明专利技术涉及通过加入福尔马林、接着加入戊二醛灭活支气管炎博德特氏菌培养物的方法，以及该方法制得的支气管炎博德特氏菌组合物，含有它的疫苗，该疫苗在例如制备药物中的用途等。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及灭活支气管炎博德特氏菌培养物的方法，以及该方法制得的支气管炎博德特氏菌组合物，含有它的疫苗，该疫苗在例如制药中的用途等。
技术介绍
对感染性生物产生免疫是疾病控制中的有力工具。诱导对感染免疫的那些抗原被称为免疫原。它们诱导的保护性抗体可与其它天然防御系统合作抑制感染过程，或它们可以中和感染生物的有害产物，如毒素。增强抗体反应的有效方法是使用佐剂。因此，佐剂被包括在疫苗中作为添加剂或赋形剂以增强对抗原的反应。佐剂可以以不同的机理起作用，包括(1)捕获体内抗原以导致缓慢释放，(2)吸引免疫系统的细胞至注射部位，(3)刺激免疫系统的细胞增殖和活化，和(4)促进受者身体中抗原的分散。许多具有不同化学特性的试剂已被用作佐剂，包括油包水和水包油乳液、无机盐、多核苷酸和天然物质。以商标AMPHIGENTM为人所知的佐剂描述在美国专利号5,084,269中。AMPHIGENTM佐剂由溶解在油(通常是轻液体石蜡)中的去油卵磷脂组成。在疫苗制剂中，AMPHIGENTM分散在水溶液中或作为水包油乳液的免疫抗原的悬浮液中。当使用根据上面美国专利号5,084,269的AMPHIGENTM佐剂时观察到一些问题。例如，AMPHIGENTM中的卵磷脂不足以产生稳定的油乳液，因此导致在注射组织中油的聚集和储存。矿物油不能被动物代谢或除去。结果，油成为严重的慢性炎症和瘢痕的来源。将AMPHIGENTM直接乳化在抗原制剂中有损坏抗原的危险。而且，如果所需的乳液没有形成，则有价值的抗原必须被弃去。因此，可用于动物，包括人的疫苗的有效的且能解决上述问题的佐剂是极其需要的。专利技术概述本专利技术涉及可用于增强动物对抗原的免疫反应的佐剂。尤其是，本专利技术涉及能在疫苗组合物中形成水包油乳液的佐剂。本专利技术还涉及当用于疫苗制剂中时，在接种部位导致最小的炎症和瘢痕的佐剂。本专利技术进一步涉及含有本专利技术佐剂的疫苗制剂。最后，本专利技术涉及在接种中使用本专利技术佐剂的方法。在一个具体实施方案中，本专利技术的佐剂含有卵磷脂、油和能乳化佐剂的两亲性表面活性剂，例如Tween或Span表面活性剂。在另一个优选的方面，表面活性剂为Tween80、Span80或Span85。在另一个具体实施方案中，本专利技术的佐剂包含卵磷脂、油和两种能乳化佐剂或乳化包含佐剂的疫苗组合物的两种两亲性表面活性剂。在一个优选的方面，两种表面活性剂中的一种主要在水相中，例如Tween80，另一种表面活性剂主要在油相中，例如Span80。卵磷脂为一种磷脂。卵磷脂的粗的制品可包含甘油三酯。为了本专利技术的目的，“卵磷脂”包括纯化和粗制品。在一个优选的方面，卵磷脂为去油的。适宜的油包括矿物油，例如DRAKEOLNTM轻矿物油。在另一个具体实施方案中，本专利技术的佐剂包含水性载体溶液，例如生理可接受的缓冲液、水或盐水溶液。在一个优选的具体实施方案中，本专利技术的佐剂包含卵磷脂、矿物油、两种两亲性表面活性剂和一种水性载体溶液(例如盐水)。在本专利技术另一个具体实施方案中，描述了使用福尔马林和戊二醛灭活支气管炎博德特氏菌(B.bronchiseptica)培养物的方法。在另一个方面，提供使用福尔马林和戊二醛灭活的支气管炎博德特氏菌培养物。在另一个方面，提供来自使用福尔马林和戊二醛灭活的支气管炎博德特氏菌培养物的抗原组合物。另一个方面，提供包含来自使用福尔马林和戊二醛灭活的支气管炎博德特氏菌培养物的抗原组合物的疫苗组合物。附图的简要说明附图说明图1显示描绘如下所述制备的乳液的液滴大小分布图。线(a)和(b)显示约94％的液滴具有1微米或更小的直径。专利技术的详细描述本专利技术涉及可用于增强对抗原的免疫反应的佐剂。尤其是，本专利技术涉及能乳化疫苗制剂的油性佐剂。进一步，本专利技术涉及当用于疫苗制剂中时能基本上避免含矿物油疫苗典型的注射部位炎症或瘢痕的佐剂。本专利技术的佐剂含有卵磷脂、油和能够乳化佐剂或含佐剂疫苗组合物的两亲性表面活性剂。本专利技术部分基于如下发现，即在包含如美国专利号5,084,269中描述的佐剂的疫苗中加入约1.5％v/v(即通过例如将98.5体积的包含佐剂的疫苗与1.5体积的两亲性表面活性剂混合获得的1.5％体积/体积浓度)至3.5％v/v的两亲性表面活性剂能有效地充分乳化用该佐剂配制的疫苗并且使接种动物的注射部位的刺激最小化。在一个具体实施方案中，本专利技术的佐剂包含卵磷脂和油以及两亲性表面活性剂。在一个具体实施方案中，本专利技术的佐剂包含卵磷脂和油以及能乳化用本专利技术佐剂配制的疫苗组合物的两亲性表面活性剂。在另一个优选的具体实施方案中，两种两亲性表面活性剂被用于本专利技术的佐剂中，例如Tween和Span表面活性剂。优选的佐剂，这里称为“1号佐剂”，包含约2％v/v卵磷脂、约18％v/v矿物油和约8％v/v表面活性剂(例如约5.6％v/v Tween和约2.4％v/vSpan80)，剩余的体积为盐水。在一个优选的方面，疫苗组合物被配制成包含浓度为疫苗组合物的约75％的抗原和浓度为疫苗组合物的25％v/v的佐剂，优选1号佐剂。除非另有说明，本文以百分数提供的所有浓度以体积/体积表示。可用于本专利技术佐剂中的表面活性剂可用于本专利技术佐剂中的表面活性剂为两亲性的并可为兽医或医学应用所接受。具体的表面活性剂是否为医学或兽医应用所接受可由本领域普通技术人员来确定。如果表面活性剂分子的一部分为疏水性，另一部分为亲水性的，则表面活性剂为两亲性的。参见美国专利号5,690,942；5,376,369；4,933,179和4,606,918，它们描述了可用于本专利技术佐剂中的表面活性剂。可用于本专利技术佐剂中的表面活性剂的实例包括，但不局限于，Tween表面活性剂和Span表面活性剂。Tween和Span表面活性剂包括，但不局限于，单月桂酸酯(Tween20，Tween21，Span20)、单棕榈酸酯(Tween40、Span40)、单硬脂酸酯(Tween60、Tween61、Span60)、三硬脂酸酯(Tween65、Span65)、单油酸酯(Tween80、Tween81、Span80)和三油酸酯(Tween85、Span85)。在一个优选的具体实施方案中，使用Tween80、Tween85、Span80或Span85。优选可用于本专利技术佐剂中的表面活性剂为两亲性并具有优选为至少佐剂的所有其它成分的HLB值之和一半的亲水亲酯平衡(“HLB”)值。更优选，表面活性剂具有从约佐剂所有其它成分的HLB值之和一半至两倍的HLB值。更优选地，表面活性剂具有约与佐剂的所有其它成分的HLB值相等的HLB值。可容易地获得表面活性剂、卵磷脂、油和载体溶液的HLB值，或如果需要，可通过常规的实验确定。例如，参见美国专利号4,504,275和4,261,925和本文提供的参考文献。可用于本专利技术佐剂中的两亲性表面活性剂具有从约2至约20，优选从约3至17的HLB值。本领域已知确定具体表面活性剂的HLB值的方法。参见美国专利号5,603,951；4,933,179和4,606,918，它们描述了具有特定HLB值的表面活性剂。用本专利技术佐剂配制的疫苗组合物中的表面活性剂的浓度为约1.5％-3.5％v/v，更优选约1.5％-约3％v/v，更优选约1.5％-约2.5％，最优选约2％v/v。当使用一种本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抗原组合物，其包含通过加入福尔马林接着加入戊二醛灭活的支气管炎博德特氏菌培养物。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：DA迪尔威斯特，DS罗伯斯，LA斯威令金，
申请(专利权)人：辉瑞产品公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]