一种非程序细胞冻存液制造技术

本发明专利技术公开了一种非程序细胞冻存液，含有细胞膜保护剂１．０～２８ｗ／ｖ％、渗透性细胞膜内保护剂１．０～１８ｗ／ｖ％、细胞沉降稳定剂３．０～２８％，余量为溶剂。本发明专利技术的细胞冻存液，对细胞保护效果好，添加冻存液后，可直接将细胞放入－８０℃冰箱冻存，无需复杂的程序冻存，大大缩短的细胞冻存时间，提高了冻存效率，极为适用于大量细胞的冻存。冻存后的细胞复苏率高，复苏后细胞的生长和分化正常；细胞冻存液成分稳定，保质期长；使用前无需另行配制或稀释，批次间稳定性好。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种细胞冻存液，特别涉及一种非程序细胞冻存液。
技术介绍
细胞，特别是干细胞等高价值的细胞，具有潜在的医用价值等其他价值，细胞保存 技术是实现这些价值的基础。常用的细胞保存方法有培养保存和冻存。培养保存，耗时耗力，程序繁琐，在培养 的过程中，特别是长期继代培养时，细胞容易发生变异，细胞特性丧失，失去保存价值。因 此，培养保存一般应用于易于培养，不易发生变异的细胞中，如部分瘤细胞。细胞冻存即将细胞置于低温环境下保存，以使细胞暂时脱离生长状态，保存其细 胞特性。这样保存的成本较低，可以在需要时将细胞复苏培养。与些同时，也避免了培养保 存中因细胞污染而导致的细胞品种损失。现有的细胞冻存液，主要由DMS0、血清以及细胞培养液组成，细胞培养液一般作为 溶剂。这种冻存液一般为即用型冻存液，需要现配现用，批次差异大，保持期短，保存效果不稳定。此外，现有冻存液的冻存程序复杂，需要使用昂贵的专用冻存仪器进行程序性降 温，整个冻存过程耗时长达3 4小时，以保证冻存细胞的复苏率。这种冻存操作复杂、处 理量小，冻存成本较高，不能满足大规模细胞快速冻存的需要。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种新型的细胞冻存液。本专利技术所采取的技术方案是一种非程序细胞冻存液，含有细胞膜保护剂1. 0 28w/v%、渗透性细胞膜内保护 剂1. 0 18w/v%、细胞沉降稳定剂3. 0 28%，余量为溶剂。优选的，冻存液中还添加有0. 1 0. 7w/v%的抗氧化剂。优选的，冻存液中还添加有0. 2 1. 07w/v%的细胞营养剂。本专利技术的细胞冻存液，对细胞保护效果好，添加冻存液后，可直接将细胞放 入-80°C冰箱冻存，无需复杂的程序冻存，大大缩短的细胞冻存时间，提高了冻存效率，极为 适用于大量细胞的冻存。冻存后的细胞复苏率高，复苏后细胞的生长和分化正常。本专利技术的细胞冻存液，成分稳定，保质期长。本专利技术的细胞冻存液，无需另行配制或稀释，批次间稳定性好。附图说明图1是SD大鼠间充质干细胞MSCs复苏后的生长曲线图；图2是未诱导的SD大鼠MSCs细胞图；图3是本专利技术细胞冻存液冻存的SD大鼠MSCs复苏后，成骨诱导28d的细胞图4是常规细胞冻存液程序冻存的SD大鼠MSCs复苏后，成骨诱导28d的细胞图；图5是常规细胞冻存液非程序冻存的SD大鼠MSCs复苏后，成骨诱导28d的细胞 图；图6是本专利技术细胞冻存液冻存的SD大鼠MSCs复苏后，成脂诱导20d的细胞图；图7是常规细胞冻存液程序冻存的SD大鼠MSCs复苏后，成脂诱导20d的细胞图；图8是常规细胞冻存液非程序冻存的SD大鼠MSCs复苏后，成脂诱导20d的细胞 图。具体实施例方式本专利技术中使用的细胞膜保护剂、渗透性细胞膜内保护剂、细胞沉降稳定剂，既可以 单独使用，也有可以根据需要混合使用。本专利技术细胞冻存液中使用的溶剂，可为各种适用于细胞培养的溶剂，一般为血清， 特别是新生牛血清。本专利技术细胞冻存液中使用的渗透性细胞膜内保护剂，包括二甲基亚砜(DMSO)、丙二醇、丙三醇等。本专利技术细胞冻存液中使用的细胞沉降稳定剂，包括甲基纤维素、羟乙基淀粉、糊 精、可溶性淀粉，用以防止或延缓细胞在冻存过程中的沉降，防止细胞互相挤压，影响细胞 冻存效果。本专利技术细胞冻存液中使用的抗氧化剂，为常规的抗氧化剂，包括维生素C、谷胱甘 肽等，抗氧化剂既可以单独使用，也可以混用。本领域的技术人员可以根据需要选择其他的 抗氧化剂。本专利技术细胞冻存液中使用的细胞营养剂，为常规的细胞营养剂，包括谷氨酰胺、丙 酮酸钠等，用以补充细胞代谢时消耗的部分能量。细胞营养剂既可以单独使用，也可以混 用。本领域的技术人员可以根据需要选择其他的细胞营养剂。一种非程序细胞冻存液，含有细胞膜保护剂1. 0 28w/v%、渗透性细胞膜内保护 剂1. 0 18w/v%、细胞沉降稳定剂3. 0 28%，余量为溶剂。优选的，冻存液中还添加有0. 1 0. 7w/v%的抗氧化剂。优选的，冻存液中还添加有0. 2 1. 0 八％的细胞营养剂。细胞膜保护剂包括非还原性双糖、多糖、糖酐。其中，非还原性双糖包括海藻糖、 蔗糖；多糖包括棉子糖、木糖、潘糖；糖酐包括低分子糖酐-40、中分子糖酐-70、高分子糖 酐-500。细胞沉降稳定剂包括甲基纤维素、羟乙基淀粉、糊精、可溶性淀粉渗透性细胞膜内保护剂包括DMS0、丙二醇、丙三醇抗氧化剂包括维生素C、谷胱甘肽。下面结合实施例，进一步说明本专利技术。以下实施例中，如无特别说明，百分比均指。实施例1细胞冻存液的组成如下细胞膜保护剂1%，由0. 4%的棉子糖、0. 6%的中分子糖酐-70组成，4渗透性细胞膜内保护剂5 %，由DMSO组成，细胞沉降稳定剂15%，由甲基纤维素500CP组成，抗氧化剂0. 2%，由0. 03%的维生素C、0. 17%的谷胱甘肽组成，细胞营养剂0. 3%，由0. 2%的谷氨酰胺、0. 的丙酮酸钠组成，新生牛血清，余量。实施例2细胞冻存液的组成如下细胞膜保护剂7%，由海藻糖组成，渗透性细胞膜内保护剂9%，由6%的丙二醇、3%的丙三醇组成，细胞沉降稳定剂28%，由20%的甲基纤维素400CP、8%的糊精组成，抗氧化剂0.4%，由维生素C组成，细胞营养剂1. 0%，由0. 7%的谷氨酰胺、0. 3%的丙酮酸钠组成，新生牛血清，余量。实施例3细胞冻存液的组成如下细胞膜保护剂28%，由10%的蔗糖、14%的潘糖、4%的低分子糖酐-40组成，渗透性细胞膜内保护剂1%，由丙二醇组成，细胞沉降稳定剂9%，由羟乙基淀粉组成，抗氧化剂0. 1 %，由谷胱甘肽组成，细胞营养剂0. 2%，由丙酮酸钠组成，新生牛血清，余量。实施例4细胞冻存液的组成如下细胞膜保护剂21%，由17%的木糖、4%的高分子糖酐-500组成，渗透性细胞膜内保护剂12%，由丙二醇、丙三醇各半组成，细胞沉降稳定剂14%，由5%的甲基纤维素1500CP、9%的可溶性淀粉组成，抗氧化剂0. 7%，由0. 2%的维生素C、0. 5%的谷胱甘肽组成，细胞营养剂0. 8%，由谷氨酰胺、丙酮酸钠各半组成，新生牛血清，余量。实施例5细胞冻存液的组成如下细胞膜保护剂11%，由7%的海藻糖、4%的棉子糖组成，渗透性细胞膜内保护剂18%，由2%的DMS0、16%的丙二醇组成，细胞沉降稳定剂14%，由8%的羟乙基淀粉、6%的糊精组成，抗氧化剂0.7%，由维生素C组成，细胞营养剂0.5%，由0.4%的谷氨酰胺、0. 的丙酮酸钠组成，新生牛血清，余量。实施例6细胞冻存液的组成如下细胞膜保护剂17%，由5%的棉子糖、12%的木糖组成，渗透性细胞膜内保护剂15%，由DMS0、丙二醇、丙三醇各5%组成，细胞沉降稳定剂18%，由12%的甲基纤维素、6%的可溶性淀粉组成，抗氧化剂0.5%，由维生素C组成，细胞营养剂0. 7%，由丙酮酸钠组成，新生牛血清，余量。实施例7细胞冻存液的组成如下细胞膜保护剂23%，由7%海藻糖、12%的低分子糖酐_40、5%的木糖组成，渗透性细胞膜内保护剂11 %，由DMSO组成，细胞沉降稳定剂3%，由甲基纤维素4000CP组成，抗氧化剂0. 5%，由谷胱甘肽组成，细胞营养剂0.5%，由0. 谷氨酰胺、0.4%丙酮酸钠组成，新生牛血清，余量。使用不同配比细胞膜保护剂的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种非程序细胞冻存液，含有细胞膜保护剂１．０～２８ｗ／ｖ％、渗透性细胞膜内保护剂１．０～１８ｗ／ｖ％、细胞沉降稳定剂３．０～２８ｗ／ｖ％，余量为溶剂。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：郑敦武，莫筱萦，魏宝丽，陈嘉慧，罗晴燕，
申请(专利权)人：赛业广州生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：81[中国|广州]