本发明专利技术是一种芦笋组织培养的方法，其特征在于：田间选择健康的芦笋植株，剪下带茎尖的长分枝；消毒处理后接种到芦笋增殖培养基中；先避光培养，然后光照培养、扩繁；将扩繁得到的芦笋单株壮苗转入生根培养基Ⅰ中进行培养，生根后，将根剪去，再转入生根培养基Ⅱ中进行培养；最后将根在含有胶质芽孢杆菌和细黄链霉北京亚种菌溶液中蘸根，移入装有沙壤土的盆中，于自然光照条件下培养20-30天，得成活芦笋苗。本发明专利技术采用二步生根法，并通过适当浓度的活性炭的添加来提高芦笋生根率；在移苗过程中，通过用胶质芽孢杆菌和细黄链霉北京亚种菌溶液中蘸根的使用来提高移苗成活率。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种植物的培养方法，特别是一种芦笋组织培养方法。
技术介绍
芦笋又名石刁柏、龙须菜，是国际公认的“蔬菜之王”，因芦笋含有丰富的营养物质，而且具有很好的保健和医疗作用，喜爱食用芦笋的人逐年增多，在国际市场上芦笋产品的需求数量也日益增加，并形成长期处于供不应求的状况。生产上采用的优良Fl代芦笋种子一直依靠国外进口，价格昂贵。利用组织培养技术进行芦笋的无性快繁生产，既可以解决芦笋的种性退化，又可以培育大量的芦笋优质种苗，满足生产的需要；由于芦笋雄株比雌株产量高20% 30%，实现种苗全雄化，便可在相同栽培条件下获得增收。应用组织培养技术建立优良雄株无性系，不仅可以直接提供生产用苗，而且通过筛选优良种株，可以繁育生产用的一代杂交种子。但是芦笋组培苗生根率低和移栽成活率低的问题普遍存在，极大地限制了组培效果。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种简单易行的、可有效提高芦笋生根率及移栽成活率的芦笋组织培养的方法。本专利技术所要解决的技术问题是通过以下的技术方案来实现的。本专利技术是，其特点是，其步骤如下(1)田间选择健康的植株，用酒精擦拭过的剪刀剪下4-5cm长分枝(带茎尖);取回后在剪口处剪去一段，用体积百分比浓度为75%酒精加质量-体积百分比浓度为0. 5%的十二烷基苯磺酸钠水溶液超声浸泡30秒，再加入质量-体积百分比浓度为0. 1%升汞水溶液摇晃浸泡5分钟(摇晃)，无菌水洗4次，取出放置在消毒好的吸水纸上；(2)在无菌条件下剪下消毒处理后的芦笋茎尖，接种到芦笋增殖培养基中；先避光低温18°C培养3天，然后转移到1500Lx25°C培养5天再将光调到2000Lx其后每20-30天就可扩繁一次；(3)将扩繁得到的芦笋单株壮苗转入生根培养基I中进行培养，培养温度为 20-25 0C ；(4)芦笋生根后，将根剪去，再转入生根培养基II中进行培养，培养温度为20-25°C ；(5)打开培养器皿的封口，再继续培养1-2天后将芦笋苗从培养器皿中取出，洗净根部附着的培养基，用胶质芽孢杆菌和细黄链霉北京亚种菌浓度为IOX 108CFU/ml溶液中蘸根，移入装有沙土的盆中，于自然光照条件下，白天22-25°C、夜间11_15°C的条件下培养 20-30天，得成活芦笋苗；所述的芦笋增殖培养基是由以下重量配比的原料组成单位mg/l， NH4NO31600-1700 ；KNO31800-1900 ；KH2PO3170-180 ；CaCl2 · 2H20 400-450 ；MgSO4 7H20350-380 ；FeSO4 · 7H2026-28 ；Na2-EDTA35-40 ；MnSO4 · 4H2020-25 ；ZnSO4 7H207-10 ；H3BO35-7 ；KI0. 5-1 ；Na2MO4 · 2H200. 2-0. 3 ；CuSO4 5H200. 02-0. 03； CoCl2 · 6H20 0.02-0.03肌醇88-100 ；甘氨酸2-5 ；盐酸硫胺素0. 3-0. 5 ；盐酸吡哆素0. 3-0. 5 ；烟酸0. 3-0. 5 ；6-BA0. 1-0. 5 ；NAA0. 05-0. 2 ；蔗糖30000 ；琼脂8000-12000 ；其余为水；PH为5. 6-5. 8 ；芦笋生根培养基I是由以下重量配比的原料组成单位mg/l，NH4NO3800-850 ；KNO3900-950 ；KH2PO385-90 ；CaCl2 · 2H20200-225 MgSO4 ·7H20175-190 ；FeSO4 · 7H2026-28 ；Na2-EDTA35-40 ；MnSO4 · 4H2020-25 ；ZnSO4 ·7H207-10 ；H3BO35-7 ；KI0. 5-1 ；Na2MO4 · 2H200. 2-0. 3 ；CuSO4 ·5H200. 02-0. 03； CoCl2 · 6H200. 02-0.03肌醇88-100 ；甘氨酸2-5 ；盐酸硫胺素0. 3-0. 5 ；盐酸吡哆素0. 3-0.5 ；烟酸0. 3-0. 5 ；IBA0. 1-0.5 ；NAA0. 1-1. 0 ；IAA0. 1-1. 0 ；6-糠氨基嘌呤0. 05-0. 2； 蔗糖30000 ；琼脂8000-12000 ；其余为纯净水； pH 5.6-5.8所述的芦笋生根培养基II除含有芦笋生根培养基I中所述的重量配比的全部原料外， 还含有0. 1%-0· 3%的活性炭(水溶液)；其pH为5. 6-5. 8。本专利技术采用二步生根法，并通过适当浓度的活性炭的添加来提高芦笋生根率；在移苗过程中，通过用胶质芽孢杆菌和细黄链霉北京亚种菌浓度为10X108CFU/ml溶液中蘸根的使用来提高移苗成活率。组培苗根系有避光生长的特性，使用活性碳后，可提供暗环境，降低光照为培养基中光敏性生长素的积累提供合适的环境；另外，活性炭是一种较强的吸附剂，可以吸附培养物分泌到培养基中的酚、醌等有害物质，从而有效地减轻褐变；同时AC也是促使胚状细胞发生生长的诱致剂，可以诱发胚状细胞发生有利于提高组培效率。AC与激素配比对提高生根率有很大的影响。细黄链霉菌北京亚种(5406)，拉丁学名Sti^ptomyces microflavus，链霉菌属 (Str印tomyces)，是最高等的放线菌，其经济用途有产生纺锤菌素；产生螺旋霉素，对革兰氏阳性及阴性细菌、酵母菌、丝状真菌都有抑制作用。常用于农业上防病保苗；同时可作菌肥，能转化土壤中氮磷元素，提高土壤肥力，并具有产生类吲哚乙酸和赤霉素物质，促进根的生长和细胞伸长作用，在作物生长上面有刺激作物生长现象的表观作用。胶质芽孢杆菌,拉丁学名Bacillus mucilaginosus Krassilnikov ,细菌,其经济用途有提高土壤有效磷钾的转化和分泌类激素物质促进根部发育和产生氨基多糖类物质，这类物质具有抑制有害微生物过度生长作用，有利于减少移栽的烂苗和提高组培苗快速复壮。本试验利用复合微生物菌剂有效活菌数>80亿/克、水分< 12%、粉剂细度3mm左右，用量为1000克/IOL水形成均浆然后蘸根，形成人工感染促进进一步形成菌根，达到控制根部微生态环境使得根系生长，抑制土传病害。具体实施例方式以下进一步描述本专利技术的具体技术方案，以便于本领域的技术人员进一步地理解本专利技术，而不构成对其权利的限制。实施例1。，其步骤如下(1)田间选择健康的植株，用酒精擦拭过的剪刀剪下4cm长分枝(带茎尖);取回后在剪口处剪去一段，用体积百分比浓度为75%酒精加质量-体积百分比浓度为0. 5%的十二烷基苯磺酸钠水溶液超声浸泡30秒，再加入质量-体积百分比浓度为0. 1%升汞水溶液摇晃浸泡5分钟(摇晃)，无菌水洗4次，取出放置在消毒好的吸水纸上；(2)在无菌条件下剪下消毒处理后的芦笋茎尖，接种到芦笋增殖培养基中；先避光低温18°C培养3天，然后转移到1500Lx25°C培养5天再将光调到2000Lx其后每20天就可扩繁一次；(3)将扩繁得到的芦笋单株壮苗转入生根培养基I中进行培养，培养温度为20°C ；(4)芦笋生根后，将根剪去，再转入生根培养基II中进行培养，培养温度为20°C ；(5)打开培养器皿的封口，本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种芦笋组织培养的方法，其特征在于，其步骤如下：（１）田间选择健康的芦笋植株，用消毒过的剪刀剪下４－５ｃｍ带茎尖的长分枝；取回后在剪口处剪去一段，用体积百分比浓度为７５％酒精加质量－体积百分比浓度为０．５％的十二烷基苯磺酸钠水溶液超声浸泡３０秒，再加入质量－体积百分比浓度为０．１％升汞水溶液摇晃浸泡５分钟，无菌水洗４次，取出放置在消毒好的吸水纸上；（２）在无菌条件下剪下消毒处理后的芦笋茎尖，接种到芦笋增殖培养基中；先避光低温１８℃培养３天，然后转移到１５００Ｌｘ２５℃培养５天再将光调到２０００Ｌｘ其后每２０－３０天就可扩繁一次；（３）将扩繁得到的芦笋单株壮苗转入生根培养基Ⅰ中进行培养，培养温度为２０－２５℃；（４）芦笋生根后，将根剪去，再转入生根培养基Ⅱ中进行培养，培养温度为２０－２５℃；（５）打开培养器皿的封口，再继续培养２－３天后将芦笋苗从培养器皿中取出，洗净根部附着的培养基，将根在含有胶质芽孢杆菌和细黄链霉北京亚种菌浓度为１０×１０８ＣＦＵ／ｍｌ溶液中蘸根，移入装有沙壤土的盆中，于自然光照条件下，白天２２－２５℃、夜间１１－１５℃的条件下培养２０－３０天，得成活芦笋苗；所述的芦笋增殖培养基是由以下重量配比的原料组成：单位：ｍｇ／ｌ，ＮＨ４ＮＯ３ １６００－１７００； ＫＮＯ３ １８００－１９００；ＫＨ２ＰＯ３ １７０－１８０； ＣａＣｌ２·２Ｈ２Ｏ ４００－４５０；ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ ３５０－３８０； ＦｅＳＯ４·７Ｈ２Ｏ ２６－２８；Ｎａ２－ＥＤＴＡ ３５－４０； ＭｎＳＯ４·４Ｈ２Ｏ ２０－２５；ＺｎＳＯ４·７Ｈ２Ｏ ７－１０； Ｈ３ＢＯ３ ５－７；ＫＩ ０．５－１； Ｎａ２ＭＯ４·２Ｈ２Ｏ ０．２－０．３；ＣｕＳＯ４·５Ｈ２Ｏ ０．０２－０．０３； ＣｏＣｌ２·６Ｈ２Ｏ ０．０２－０．０３；肌醇 ８８－１００； 甘氨酸 ２－５；盐酸硫胺素 ０．３－０．５； 盐酸吡哆素 ０．３－０．５；烟酸 ０．３－０．５； ６－ＢＡ ０．１－０．５；ＮＡＡ ０．０５－０．２； 蔗糖３００００；琼脂 ８０００－１２０００； 其余为水； ｐＨ为 ５．６－５．８；芦笋生根培养基Ⅰ是由以下重量配比的原料组成：单位：ｍｇ／ｌ，ＮＨ４ＮＯ３ ８００－８５０； ＫＮＯ３９００－９５０；ＫＨ２ＰＯ３ ８５－９０； ＣａＣｌ２·２Ｈ２Ｏ ２００－２２５；ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ １７５－１９０； ＦｅＳＯ４·７Ｈ２Ｏ ２６－２８；Ｎａ２－ＥＤＴＡ ３５－４０； ＭｎＳＯ４·４Ｈ２Ｏ ２０－２５；ＺｎＳＯ４·７Ｈ２Ｏ ７－１０； Ｈ３ＢＯ３ ５－７；ＫＩ ０．５－１； Ｎａ２ＭＯ４·２Ｈ２Ｏ ０．２－０．３；ＣｕＳＯ４·５Ｈ２Ｏ ０．０２－０．０３； ＣｏＣｌ２·６Ｈ２Ｏ ０．０２－０．０３；肌醇 ８８－１００； 甘氨酸 ２－５；盐酸硫胺素 ０．３－０．５； 盐酸吡哆素 ０．３－０．５；烟酸 ０．３－０．５； ＩＢＡ ０．１－０．５；ＮＡＡ ０．１－１．０；ＩＡＡ ０．１－１．０；６－糠氨基嘌呤 ０．０５－０．２； 蔗糖 ３００００；琼脂 ８０００－１２０００； 其余为纯净水； ｐＨ ５．６－５．８；所述的芦笋生根培养基Ⅱ除含有芦笋生根培养基Ｉ中所述的重量配比的全部原料外，还含有质量－体积百分比为０．１－０．３％的活性炭；其ｐＨ为５．６－５．８。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：陈振泰，潘美红，缪美华，薛萍，杨海峰，孙桂乐，周翔，
申请(专利权)人：连云港市农业科学院，
类型：发明
国别省市：32
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