石斛属培养物的离体保存方法技术

石斛属培养物的离体保存方法，取石斛属培养物即３个不同发育阶段的培养材料也就是由石斛属种子萌发后产生的胚性组织即原球茎或茎尖和茎基部形成的拟原球茎，由原球茎或拟原球茎分化产生的丛芽，由丛芽分化产生的具根和４－５片叶的试管苗，在培养基为１／２ＭＳ＋ＮＡＡ１ｍｇ．Ｌ↑［－１］＋Ｓ２％，温度为１５－２０℃中进行离体保存。

【技术实现步骤摘要】
石斛属培养物的离体保存方法石斛属培养物的离体保存方法所属领域本专利技术涉及生物
，具体地，涉及石斛属培养 物的离体保存技术。
技术介绍
云南省是商品石斛主要产地之一，种类多，资源丰富(全国76种，云南58种，占全国种类的76.3%。石斛药材原植物包 含石斛属植物39种，金石斛属植物2种和石仙桃属植物4种。石斛 类植物是常见名贵中药材(具有滋阴清热，生津益胃。润肺止咳。明 目强身等功效)。人们长期无限制，掠夺性和毁灭性的采挖和近年来 大量深层次的研究开发(发现石斛属许多种还具有抗肿瘤、抗衰老、. 增强机体免疫力、扩张血管及抗血小板凝集等作用)。再加上石斛属 物种在自然界结实率低，种子因无胚乳，萌发率5%以下。远不能满 足目前国内外需求。我国和国际组织(IUCN)都明文规定，石斛属为 禁止贸易的物种加以保护。现有技术中未见有云南药用石斛离体保存 技术的报道。
技术实现思路
石斛属植物大多分布在热带和亚热带，本专利技术的目的 在于提供一种在15-2(TC下保存培养物，延缓石斛生长速度，延长继 代周期的云南药物石斛离体保存方法。为了实现本专利技术的上述目的，本专利技术提供了如下技术方案 石斛属培养物的离体保存方法，取石斛属培养物在培养基为 1/2MS+NAAlmg丄+S20/0.，温度为15-20。C中进行离体保存。上述方法中，石斛属培养物为不同发育阶段的培养材料即由石斛 属种子萌发后产生的胚性组织即原球茎或茎尖和茎基部形成的拟原 球茎，由原球茎或拟原球茎分化产生的丛芽，由丛芽分化产生的具根和4-5片叶的试管苗3个发育阶段的材料。本专利技术的方法可概括为取石斛属培养物即3个不同发育阶段的培养材料也就是由石斛属种子萌发后产生的胚性组织即原球茎或茎 尖和茎基部形成的拟原球茎，由原球茎或拟原球茎分化产生的丛芽，由丛芽分化产生的具根和4-5片叶的试管苗，在培养基为 1/2MS+NAAlmg丄+S2。/。，温度为15-2CTC中进行离体保存。 具体实施例方式下面用本专利技术的实施例来进一步说明本专利技术的实质性内容，但并 不以此来限定本专利技术。实施例1:本专利技术的方法可概括为取石斛属培养物即3个不同发育阶段的培养材料也就是由石斛属种子萌发后产生的胚性组织即原球茎或茎 尖和茎基部形成的拟原球茎，由原球茎或拟原球茎分化产生的丛芽，由丛芽分化产生的具根和4-5片叶的试管苗，在培养基为 1/2MS+NAAlmg丄+S2。/。，温度为15-20。C中进行离体保存。 具体步骤和方法如下一、石斛经快速繁殖得石斛培养物1材料与方法 1.1供试材料[l]长苏石斛Dendrobium brymerianum西双版纳 [2]球花石斛D.chysiflorum (2个居群)景洪、昆明[3]鼓槌石斛D.chrysotoxume (4个居群)勐海、保山、思茅、景洪 [4]铁皮石斛D.candidum (9个居群)广南、思茅、文山(3个居群)浙江、盈江、安宁、小哨 [5]金钗石斛杂种选系D.phalaenosis xD.nobile [6]短棒石斛D.capillipes (2个居群)西双版纳、鲁甸 [7]兜唇石斛D.aphyllum (2个居群)腾冲、景洪 [8]束花石斛D.chrysanthum (3个居群)丽江、思茅、景洪 [9〗玫瑰石斛D.crepidatum文山[IO]叠鞘石斛D.aurantiacumvar.deuneanum (2个居群)昆明、勐海. [ll]密花石斛D.densiflorum[12]流苏石斛D.fimbriatum (9个居群)缅甸、越南、高黎贡山、西双 版纳等[13]棒节石斛D.findlayanum (2个居群)景洪、思茅 [14]美花石斛D.loddigesii[15]金钗石斛D.aobile (8个居群)石屏、景洪(2个居群)、勐腊、保山、兰坪、勐海、昆明 [16]长距石斛D.longicorum [17〗报春石角4 D.primulinum[18]大苞鞘石斛D.wardianum (2个居群)昆明、景洪 [19]霍山石斛D.huoshanense[20]齿瓣石斛D.devonianum (2个居群)屏边、景洪 [21]矮石斛D.bellatulum (2个居群)文山、景洪 [22串珠石斛D.falooneri [23]疏花石斛D.henryi[24]细茎石斛D.moniliforme (2个居群)高黎贡山、丽江 [25]黑毛石斛D.williamsonii [26]喉红石斛D.christyanum昆明 [27]晶帽石斛D.crystallimun (2个居群)腾冲、景洪 [28]杯鞘石斛D.gratiotissimum (3个居群)鲁甸、景洪、思茅 [29]小黄花石斛Djenkinsii (2个居群)文山、景洪 [30]苏唇石斛D.harveyanum景洪 [31 ]梳唇石角斗D. s加ngylanthum[32]尖刀唇石斛D.heterocarpum (3个居群)昆明、景洪、思茅 [33]喇叭唇石斛D.lieniflorum (2个居群)腾冲、镇康 [34]翅梗石斛D.trigonopus[35]草石斛D.compactum (2个居群)思茅、腾冲 [36]秋石斛D.phalaenosis (2个居群)泰国、安宁 [37]石斛属一种Dendrobium邻.麻栗坡 [38]叉唇石斛D.stuposum [39]勐海石斛D.minutiflorum [40]肿节石斛D.pendulum 1.2方法培养室温度25士2C,保存室温度15-2CTC ，光照强度为 1500-2000Lx，光照12h/d。培养基随培养目的和不同发育阶段有所不 同。培养基PH为5。外植体来源于石斛属各种的果实内种子或茎尖，果在纯乙醇中沾 一下，然后在酒精灯火焰上烧后用于接种。茎尖或幼茎在70%乙醇中 浸一下，投入0.2e/。升汞8min左右，无菌水冲洗干净后接种。2结果2.1组织培养和快速繁殖技术为了保持遗传性稳定和规模化生产目的，对40种石斛采用种子无 菌培养和茎尖、茎节分生组织培养两种方式。 2丄1种子无菌培养种子来源于野外采集和自己杂交授粉所结的果实。野外采集的开 裂果，收集种子用尼龙布包裹，在0.2y。Hgcl2中消毒7min，无菌水冲 洗干净后播种在花宝1号(N:P:K-7:6:19)3g丄的琼脂培养基上。完整 的果实在酒精灯燃烧灭菌后即可将果皮打开将种子播种在上述培养 基上。未成熟的果内种子可播种在花宝1号3 g丄+NAAlmg丄—1 (单 位下同)的琼脂培养基上。石斛属种子大多呈黄色，培养约10天左 右即可转绿，增大，继而长成顶端有叶尖或冒出的芽，基部有丝状毛 的原球茎，显示种子萌发且萌发率较高(达95%以上)。 2丄2分生组织培养将野外采集到的石斛属茎尖或带腋芽的幼茎切段灭菌后接种在 1/2MS+NAAlmg丄+土豆泥3%+香蕉泥15%的琼脂培养基上，培养 30天左右，胚芽处可抽生新枝，新枝可切割重复培养，茎尖抽生新枝 短呈丛芽状。在此培养基上，它们可长成完整试管苗，供移栽。如果把茎尖和幼茎接种在1/2MS或1/2MS+BA0.5+NAA0.2的琼脂 培养基上，外植体基部可分化出大量拟原球茎。拟原球茎在 1/2MS+NAAl+土豆泥3%+香本文档来自技高网...

【技术保护点】
石斛属培养物的离体保存方法，其特征在于取石斛属培养物在培养基为１／２ＭＳ＋ＮＡＡ１ｍｇ．Ｌ↑［－１］＋Ｓ２％．，温度为１５－２０℃中进行离体保存。

【技术特征摘要】
1、石斛属培养物的离体保存方法，其特征在于取石斛属培养物在培养基为1/2MS+NAA1mg.L-1+S2％.，温度为15-20℃中进行离体保存。2、 如权利要求1所述的方法，其特征在于石斛属培养物为不同发 育阶段的培养材料即由石斛属种子萌发后产生的胚性组织即原球茎 或茎尖和茎基部形成的拟原球茎，由原球茎或拟原球茎分化产生的丛 芽，由丛芽分化产生的具根和4-5...

【专利技术属性】
技术研发人员：龙春林，程治英，罗吉凤，
申请(专利权)人：中国科学院昆明植物研究所，
类型：发明
国别省市：53[中国|云南]