用于治疗IL-6产生所致疾病的药物组合物制造技术

用于预防或治疗因ＩＬ－６产生所致疾病的药物组合物，该组合物中含有白介素－６受体抗体（ＩＬ－６Ｒ抗体）。ＩＬ－６Ｒ抗体可采用除人类以外其它动物的抗体如小鼠，大鼠等抗体，也可采用介于这些抗体和人类抗体之间的嵌合抗体，还可采用重建的人类抗体等。药物组合物可用来预防或治疗因白介素－６产生所致的疾病，例如浆细胞增多症，抗ＩｇＧ１血症，贫血及肾炎等。（*该技术在2015年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
本申请是1995年10月20日提交的申请号为95196357.0、专利技术名称为“用于治疗IL-6产生所致疾病的药物组合物”的专利技术专利申请的分案申请。本专利技术涉及用于预防或治疗因白介素-6(IL-6)产生所致疾病的药物组合物，该组合物包括对抗白介素-6受体(IL-6R)的抗体(抗-IL-6R抗体)。
技术介绍
IL-6为一种多功能细胞因子，目前认为在免疫，血液及急性期反应的各个阶段都有该因子参与(Taga，T.et al.，Critical Reviews inImmunol.11265-280，1992)，该因子在许多疾病的发病中也起着重要的作用，例如件随浆细胞增多的疾病如类风湿(Hirano，T.et al.，Eur.J.Immunology 181797-1801，1988；Houssiau，F.A.et al.，Arth Rheum.31784-788，1988)，Castleman氏病(Yoshizaki，K.et al.，Blood 741360-1367，1989；Brant，S.J.et al.，J.Clin.Invest.86592-599，1990)，肾小球膜细胞增殖性肾炎(Ohta，K.et al.，Clin.Nephrol.(Germany)38185-189，1992；Fukatsu，A.et al.，Lab.Invest，6561-66，1991；Horri，Y.et al.，J.Immunol.1433949-3955，1989)，伴随肿瘤生长的恶病质(Strassmann，G.et al.，J.Clin.Invest.891681-1684，1992)等，另外还可做为生长因子引起多发性骨髓瘤。在H-2LdhIL-6转基因小鼠(IL-6 Tgm)中，由于其通过基因工程的方法使人类IL-6(hIL-6)表达过多，已经观察到IgG浆细胞增多，肾小球膜细胞增殖性肾炎，贫血，血小板减少，出现自身抗体等现象或疾病(Miyai，T，et al.，a presentation at the 21st Meeting ofJapan Immunology Society“Hematological changes in H-2LdhIL-6transgenic mice with age，”1991)，上述这些表明IL-6与多种疾病的发生有关。然而现在还不知道抗白介素-6受体的抗体对白介素产生而引起的疾病是否有效。本专利技术披露依照本专利技术，本专利技术提供了用来预防或治疗由IL-6所致疾病的药物组合物。为了解决上述的问题，本专利技术提供一种用来预防或治疗由IL-6产生所致疾病的药物组合物，该组合物含有抗白介素-6受体抗体。附图的简要说明附图说明图1所示为每组动物体重增加的变化。图2所示为每组尿蛋白阳性率的变化。除组1和组3，其它组尿蛋白阳性率为零。图3所示为每组血红蛋白浓度的变化。图4所示为每组血红细胞数的变化。图5所示为每组血小板的变化。图6所示为每组白细胞的变化。图7所示为每组血清中IgG1浓度的变化。图8所示为组1到组5人IL-6浓度的变化。图9为在组1和组2通过荧光抗体技术使用对照抗体IgG和Gr-1抗体对细胞进行分类的结果。图10为在组6和组7通过荧光抗体技术使用对照抗体IgG和Gr-1抗体对细胞进行分类的结果。图11为每组动物在实验结束时脾脏的重量。图12为每组动物体重的变化。图13为在实验的第11天，小鼠血中甘油三酯的浓度。图14为在实验的第15天，小鼠的血糖浓度。图15为在实验的第11天，小鼠血中钙离子的浓度。图16所示为肿瘤对照组小鼠的生存率。图17为实验开始后的第10天和12天小鼠的体重。图18为实验开始后的第10天和第12天，小鼠血中的钙离子浓度。详细的说明白介素-6产生所致疾病包括有浆细胞增多性疾病如类风温病及Castleman氏病；高免疫球蛋白血；贫血；肾炎如小球系膜增殖性肾炎；恶病质等。用于本专利技术中的白介素-6受体抗体，只要能阻止IL-6的信号传导并抑制IL-6的生物活性就可以是任何一种来源或类型的抗体(单克隆，多克隆)。但最好是由哺乳类动物产生的单克隆抗体。抗体通过抑制IL-6与IL-6R的结合，阻断IL-6的信号传导并抑制其生物活性。产生单克隆细胞的动物种类可为哺乳类动物的任何一种，可以是人类抗体或者是除人以外的一种动物的抗体。从容易制备这个角度考虑，除人以外的单克隆抗体，还是以兔或鼠类产生的单克隆抗体较好。鼠类产生的单克隆抗体较好，包括小鼠，大鼠，豚鼠等，但不局限于此。这样的白介素-6受体抗体包括例如MR16-1抗体(Tamura，T.et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.9011924-11928)，PM-1抗体(Hirata，Y.et al.，J.Immunol.1432900-2906，1989)等。单克隆抗体的制备基本上可通过下述的本领域已知方法来进行。采用常规的方法免疫动物，即使用IL-6R做为免疫抗原，然后通过常规的细胞融合方法将所得的免疫细胞与已知的母细胞融合，通过常规的筛选方法筛选产生抗体的细胞。更具体地讲，单克隆抗体是通过下述的方法来制备的。如免疫抗原可通过欧洲专利申请EP325474中所述的采用人IL-6R基因序列来得到。先将人IL-6R基因序列插入一个已知的表达载体内，以转化适合的宿主细胞，之后纯化宿主细胞或培养液上清产生的所要的IL-6R蛋白质，用该纯化的IL-6R蛋白质做为免疫抗原。另外，也可采用与上述人IL-6R基因序列相同的方法，使用日本未审查专利公开3(1991)-155795中所述的小鼠IL-6R基因序列来得到上述的来源于小鼠的免疫抗原。做为IL-6R，除了细胞膜上表达的外，还可有从细胞膜解吸的IL-6R(sIL-6R)也可做为抗原。sIL-6R主要是由与细胞膜结合的IL-6R的细胞外部分组成，其与和细胞膜结合的IL-6R不同之处sIL-6R缺乏贯穿膜的区或者贯穿膜的区及细胞内区都缺乏。免疫抗原免疫的哺乳类动物种类没有特别限制，但是如考虑到其与用做细胞融合的母细胞的相容性，优选使用小鼠，大鼠，豚鼠及兔等哺乳类动物。可根据本领域技术人员已知的方法用免疫抗原免疫动物。例如，常用的方法是经腹腔或皮下给哺乳类动物注射免疫抗原。更具体地讲，将免疫抗原用PBS(磷酸缓冲盐溶液)，生理盐水稀释或混悬至一定的体积，然后如需要再与适量的佐剂如弗氏完全估剂混合并乳化，此后优选每4-21天给哺乳类动物注射该乳剂几次。此外，在用免疫抗原免疫动物时可使用适当的载体。在如上所述免疫动物且测定血清中抗体浓度已达到所希望的浓度后，从哺乳类动物取出免疫细胞并进行融合。具体提到的取出的免疫细胞以脾细胞较好。本专利技术中，用于与免疫细胞融合的配对母细胞优选骨髓瘤细胞，其包括许多种已知的细胞系，如P3(p3x63Ag8.653)(J.Immunol 1231548，1978)，p3-U1(Current Topicsi Micro-biology and Immunology811-7，1978)，NS-1(Eur.J.Immunol.6511-519，1976)，MPC-11(Cell 8405-415，1976)，SP2/0(Nature本文档来自技高网...

【技术保护点】
白介素－６受体抗体在制备用于预防或治疗白介素－６产生所致疾病的药物中的用途。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：岸本忠三，胜目朝夫，齐藤浩之，
申请(专利权)人：岸本忠三，中外制药株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]