松胞菌素D在制备抗肿瘤活性药物中的用途制造技术

本发明专利技术提供松胞菌素Ｄ在制备抗肿瘤活性药物中的用途，本发明专利技术是从大型真菌竹生肉球菌（Ｅｎｇｌｅｒｏｍｙｃｅｓ　　ｇｏｅｔｚｉｉ）中提取纯化得一化合物松胞菌素Ｄ，分子式为Ｃ↓［３０］Ｈ↓［３７］ＮＯ↓［７］，分子量为５０８．２６９１［Ｍ＋Ｈ］↑［＋］，属于松胞菌素类，其子实体的乙酸乙酯浸提部分具有广谱抗肿瘤活性，实验证明具有体外直接杀死肿瘤细胞的效应，与药用敷料组合，可在制备抗肿瘤活性药物中应用。经体外抗肿瘤活性检测，对１１种肿瘤株系均有强烈的抑制效应，半数致死率ＩＣ↓［５０］基本在０．０１－０．１ｕｇ／ｍｌ之间，为进一步研制体内治疗恶心肿瘤药物提供了一个良好的先导化合物。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属从天然植物中提取有效成分及其用途，尤其是从箭竹等竹类的竹生肉球菌中提取有效成分，并在制备抗肿瘤活性药物中的用途。
技术介绍
恶性肿瘤是当今威胁人类身心健康最严重的疾病，在发达国家已经占据了居民死亡原因的首位，在发展中国家，肿瘤的发病率仍在继续增多。肿瘤药物治疗是继手术、放疗之后的又一重要治疗措施，自20世纪40年代第一种化疗药物氮芥发现以来，人们一直在寻找高效低毒的抗肿瘤药物，尽管目前已有的抗肿瘤药物能治愈部分肿瘤，对大多数肿瘤也有一定疗效，但仍存在治疗有效率低、选择性差、毒副反应大及瘤细胞耐药等问题，因此，从不同途径寻找高效、低毒、特异的抗肿瘤药物仍是肿瘤药物治疗的当务之急。从植物中寻找抗肿瘤有效成分具有一定的优势，全世界有植物25-50万种，美国通过20余年的抗肿瘤筛选，约试验了其中的10％，我国从20世纪50年代开始抗肿瘤药物的实验筛选，对中草药的筛选特别重视，虽然在天然产物抗肿瘤作用的开发研究中做了大量工作，曾对数千种中药的抗肿瘤作用进行了筛选研究，但所研究的植物数仅为1％，中药抗肿瘤作用筛选仍有广阔的前景。竹生肉球菌，是子囊菌纲、肉座菌科、肉球菌属的一种大型真菌，生于箭竹等竹类中上部茎节间，分布于我国云南、四川、西藏等地，晒干后药用有抗菌消炎作用(卯晓岚，中国大型真菌，河南科学技术出版社，2000年)。松胞菌素(Cytochalasins)是真菌的次生代谢产物，到目前为止已发现二十余种结构近似的化合物，命名为松胞菌素A-Z；它们专一性地影响哺乳动物细胞的微丝系统，产生多种细胞生物学效应(1-3)，抑制细胞质分离(4)；引起细胞收缩(5-6)使细胞脱核(7-9)；它们改变质膜上受体的状态，影响一些物质的跨膜运输，(10-12)；调节质膜与植物凝集素的反应(13)；影响病毒对细胞的感染(14)等。但是，松胞菌素D直接杀死肿瘤细胞的效用却未有报导。
技术实现思路
本专利技术的目的是从竹生肉球菌中提取有效成分在制备抗肿瘤活性药物中的用途。本专利技术是从大型真菌竹生肉球菌(Engleromyces goetzii)中提取纯化得一化合物松胞菌素D，分子式为C30H37NO7，属于松胞菌素类，其子实体的乙酸乙酯浸提部份具有广谱抗肿瘤活性，与药用敷料组合，可在制备治疗恶性肿瘤药物中的应用。本专利技术所制备的松胞菌素D药物，可在制备治疗急性髓系白血病药物、制备治疗红白血病药物、制备治疗肝癌药物、制备治疗乳腺癌药物、制备治疗宫颈癌药物、制备治疗口腔鳞癌药物、制备治疗前列腺癌药物、制备治疗肺腺癌等药物中的应用。本专利技术提供的药物，其制剂形式主要包括液体制剂、颗粒剂、片剂、冲剂、软胶丸、软胶囊、滴丸剂、或注射剂。本专利技术提供的药物，制剂的给药形式主要包括口服给药或注射给药。实验证明本专利技术提供的松胞菌素D，具有体外直接杀死肿瘤细胞的效应，经流式细胞仪检测，对急性髓系白血病NB4、急性髓系白血病单核型U937、急性髓系白血病慢粒型KU812、乳腺癌BCAP37、宫颈癌HeLa、口腔鳞癌SK的半数致死率IC50均为0.01-0.1ug/ml之间；对急性髓系白血病M3型HL-60、红白血病K562的半数致死率IC50略小于0.1ug/ml；对肝癌SMMC7721的半数致死率IC50略大于0.1ug/ml，这些结果为进一步研制体内治疗恶心肿瘤药物提供了一个极好的先导化合物。本专利技术提供的松胞菌素D，经核磁共振及高分辨质谱分析结果与前人从绿僵菌(Metarhizium anisopliae)(15)及梅森接柄孢(zygosporium masonii)(16-17)中得到的松胞菌素D(cytochalasin D)结构一致。附图说明图1为不同浓度松胞菌素D杀伤急性髓系白血病NB4的显微照片图(10×10)。图2为流式细胞仪检测松胞菌素D对急性髓系白血病NB4的杀伤效果。图3为松胞菌素D抗急性髓系白血病NB4的IC50图。图4为不同浓度松胞菌素D杀伤急性髓系白血病M3型HL-60的显微照片。图5为流式细胞仪检测松胞菌素D对急性髓系白血病M3型HL-60的杀伤效果。图6为松胞菌素D抗急性髓系白血病M3型HL-60的IC50图。图7为不同浓度松胞菌素D杀伤红白血病K562的显微照片图。图8为流式细胞仪检测松胞菌素D对红白血病K562的杀伤效果。图9为松胞菌素D抗红白血病K562的IC50图。图10为不同浓度松胞菌素D杀伤肝癌SMMC7721的显微照片图。图11为流式细胞仪检测松胞菌素D对肝癌SMMC7721的杀伤效果。图12为松胞菌素D抗肝癌SMMC7721的IC50图。图13为不同浓度松胞菌素D杀伤急性髓系白血病单核型U937的显微照片。图14为流式细胞仪检测松胞菌素D对急性髓系白血病单核型U937的杀伤效果。图15为松胞菌素D抗急性髓系白血病单核型U937的IC50图。图16为不同浓度松胞菌素D杀伤急性髓系白血病慢粒型KU812的显微照片图。图17为流式细胞仪检测松胞菌素D对急性髓系白血病慢粒型KU812的杀伤效果。图18为松胞菌素D抗急性髓系白血病慢粒型KU812的IC50图。图19为不同浓度松胞菌素D杀伤乳腺癌BCAP37的显微照片图。图20为流式细胞仪检测松胞菌素D对乳腺癌BCAP37的杀伤效果。图21为松胞菌素D抗乳腺癌BCAP37的IC50图。图22为不同浓度松胞菌素D杀伤宫颈癌HeLa的显微照片图。图23为流式细胞仪检测松胞菌素D对宫颈癌HeLa的杀伤效果。图24为松胞菌素D抗宫颈癌HeLa的IC50图。图25为不同浓度松胞菌素D杀伤口腔鳞癌SK的显微照片图。图26为流式细胞仪检测松胞菌素D对口腔鳞癌SK的杀伤效果。图27为松胞菌素D抗口腔鳞癌SK的IC50图。具体实施例方式下面将通过实施例对本专利技术作进一步的说明。实施例一从大型真菌竹生肉球菌(Engleromyces goetzii)中分离提取纯化化合物的结构鉴定实验方法1.提取和纯化竹生肉球菌60g，先用200ml石油醚索氏回流抽提除去脂肪，烷烃等非极性化合物，接着用200ml乙酸乙酯索氏抽提10-24小时，乙酸乙酯旋转蒸发浓缩后得清亮淡黄色浸膏0.975g，取该浸膏0.549g进一步用反相制备柱(20*250mm)分离纯化，流动相为10％-85％的乙腈或甲醇剃度洗脱，收集38％-43％乙腈洗脱组分，浓缩后得白色针状晶体34.2mg。2.结构鉴定高分辨质谱仪(Bruker Daltonics APEXII49e)核磁共振仪(INOVA-400)3.结果松胞菌素D，无色针晶.分子式为C30H37NO7.HR-MSm/z508.2691+，ESI-MSm/z530.3+，546.2+.1H-NMR(CDCl3)7.32(m，H-3′，5′)；7.25(m，H-4′)；7.13(m，H-2′，6′)；6.11(dd，J＝15.6，2.8Hz，H-19)；5.68(dd，J＝15.6，9.6Hz，H-13)；5.63(m，H-21)；5.58(bs，2-NH)；5.35(m，H-14)；5.29(s，H-12eq.)；5.13(dd，J＝16，2.4Hz，H-20)；5.08(s，H-12ax.)；4.66(bs，18-OH)；3.80(d，J＝10.8Hz，H-7)本文档来自技高网...

【技术保护点】
松胞菌素Ｄ在制备抗肿瘤活性药物中的用途，松胞菌素Ｄ的分子式为Ｃ↓［３０］Ｈ↓［３７］ＮＯ↓［７］，分子量为５０８．２６９１［Ｍ＋Ｈ］↑［＋］，属于松胞菌素类，其特征是：化合物松胞菌素Ｄ与药用辅料组合，可在制备治疗恶性肿瘤药物中的应用。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：吴平，刘非燕，胡汛，刘美星，潘锵荣，陈云龙，曹姣仙，邵建中，潘杰，傅承新，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]