SARS酵母杂交疫苗及其制备方法技术

本发明专利技术属于基因工程生产疫苗技术领域，一种“ＳＡＲＳ”酵母杂交疫苗及其制备方法，该杂交疫苗由基因重组杂交酵母组成。应用酵母杂交疫苗载体系统，构建“ＳＡＲＳ”抗原表位基因质粒和表达细胞生长因子的质粒，分别转化酵母后进行杂交，在营养缺陷培养基上进行双杂交筛选。由此产生的重组杂交酵母，本身是一种无致病性的基因治疗载体，该载体本身具有免疫增强活力，即免疫佐剂作用。将上述“ＳＡＲＳ”杂交酵母菌原液、经洗涤，采用真空冷冻干燥，即制成冷冻“ＳＡＲＳ”酵母杂交疫苗。该疫苗具有较强的免疫原性，可诱导“ＳＡＲＳ”特异性免疫应答，对提高人体抗“ＳＡＲＳ”病毒感染能力具有明显效果，能有效地预防“ＳＡＲＳ”病毒引起的非典型性肺炎，具有治疗“ＳＡＲＳ”病毒引起的非典型性肺炎的作用。（*该技术在2024年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种治疗和/或预防“SARS”病毒的高效疫苗及其制备方法，该专利技术由至少两个基因表达单位经杂交形成一个基因表达载体；其中一个基因表达单位表达细胞生长因子和/或淋巴因子，另一个基因表达单位表达单个、融合和/或多个“SARS-Cov”抗原基因；该专利技术主要制备用来治疗和预防“SARS”的基因表达杂交疫苗。
技术介绍
SARS病毒是在去年我国乃至世界范围内肆虐的SARS病的元凶。他的传播严重的影响了人们的正常生活秩序。“SARS”病毒是一种崭新的冠状病毒，是已知冠状病毒的近期变种。冠状病毒是一种RNA病毒。2003年以来，国内外相继报道了引起SARS冠状病毒的基因序列，该病毒含有完整的5’末端序列、编码序列和3’末端序列，全基因组长度为29727个核甘酸，基因编码区的组成结构于其他冠状病毒类似，包括多个开放阅读框架(ORFS)，分别编码病毒的多聚酶蛋白(Polymerase la，lb)和结构蛋白。在疾病防治历史上，疫苗一直是最有效、价廉和实用的方法。没有任何一种措施包括抗生素在内曾经如此有效地降低人口的死亡率，疫苗对人类健康的影响之大是难以用语言做评价的。疫苗曾在世界上许多国家成功地控制了以下九种疾病天花、百喉、破伤风、猩红热、百日咳、脊髓灰质炎、麻疹、腮腺炎和风疹。天花是在世界范围内得到最有效控制的疾病。一个疫苗的有效性是取决于它能诱导机体产生保护性免疫反应的能力。脊椎动物尤其是鸟类和哺乳动物战胜微生物感染的机制是一个复杂的过程。病原体侵入宿主后会激活机体多系统多种保护性反应，如果病原体或其毒素成功地攻破机体的外层防线而进入血循环，淋巴器官如脾、肝和骨髓将会分解和清除进入血循环中的病原体或其毒素。淋巴组织是由一系列相互交织的细胞和纤维组成，这些细胞包括白细胞即淋巴细胞和处于不同分化阶段的其它细胞，如浆细胞、淋巴纤维细胞、单核-巨噬细胞、嗜酸细胞和肥大细胞。淋巴细胞主要分为T和B淋巴细胞，它们在机体的抗原特异性免疫反应中起不同作用但又互补。免疫系统通过识别外源性病原体而成为保持机体内环境稳定的重要防线。机体对外源性病原体的初步反应称为“先天性免疫”，先天性免疫的特征是自然杀伤细胞、巨噬细胞、中性粒细胞和其它白细胞首先对病原体产生应答，这些细胞通过吞噬、消化、裂解或分秘淋巴因子在短时间内消灭病原体。先天性免疫是抗原非特异性的，它是机体产生“获得性免疫”应答之前的第一道抵御病原体的防线。T和B淋巴细胞是参于获得性免疫反应的主要细胞，获得性免疫反应的特征是B细胞识别抗原后被激活从而分秘抗原特异性抗体、T细胞的激活和抗原提呈。B细胞识别抗原是指抗原与B细胞表面的免疫球蛋白受体结合，这些抗原包括细菌细胞壁、细菌毒素或病毒表面糖蛋白，该结合促使信号传导到B细胞内，此过程称为“第一信号”，在某些情况下，仅需要一个信号就能激活B细胞，这些无需辅助性T细胞就能激活B细胞的抗原称为“不依赖T细胞抗原”(或不依赖胸腺抗原)；某些情况下，B细胞的激活需要“第二信号”，第二信号通常由辅助性T细胞提供，这类细胞抗原称为“T细胞依赖性抗原”(或胸腺依赖性抗原)；结合到B细胞表面的抗原通过内吞进入B细胞并被消化为小片段，这些片段又与B细胞表面的MHC II分子结合形成“抗原多肽-MHCII分子复合物”，该复合物提供T细胞依赖性抗原激活B细胞所需的第二信号。激活B细胞的另一种方式是B细胞与淋巴结和脾脏生发中心的树突状细胞(Dentritic Cells，DC)结合。获得性免疫的一个重要机制是T细胞的激活，激活T细胞需要抗原提呈细胞如巨噬细胞和DC细胞与T细胞结合，巨噬细胞表面有多个识别病原体抗原的受体，如甘露糖和清道夫受体，巨噬细胞吞噬这些病原体后在内体和溶酶体的作用下将其消化裂解为多肽片段，这些多肽片段与巨噬细胞表面的MHC II分子结合形成“抗原多肽-MHC II分子复合物”，当T细胞与该复合物结合后被激活。DC细胞是既能形成“抗原多肽-MHC II分子复合物”又能形成“抗原多肽-MHC I分子复合物”的抗原提呈细胞。当B细胞与抗原结合后通过“同型转换”使分泌普通IgM抗体的B细胞转化为分泌特异性的IgG抗体，这些细胞分为两类一类不断分裂称为克隆扩增，这类细胞成熟后每秒钟可释放2000个同样的抗体，约2-3天后死亡；另一类细胞此时不分泌抗体而成为记忆细胞，这些记忆细胞可存活数月到数年，当再次遇到同样抗原时这类记忆细胞会迅速产生大量抗体，这种免疫反应称为次级免疫反应。研发疫苗的目标就是要诱导这种较初级免疫反应更快更强的次级免疫反应。经典的主动疫苗分为亚单位和完整病原体疫苗，亚单位疫苗是完整病原体的一部分，其目的是避免应用有致病性的完整病原体或避免应用完整病原体的有毒组份。B型副流感病毒的脂多糖做为脑膜炎疫苗就是应用抗原组份的一个亚单位疫苗例子；完整病原体疫苗通常是灭活或减毒的病原体，如灭活的百日咳疫苗。由于灭活或减毒过程有时会损害一些诱导免疫反应所必需的抗原决定基，因此这类疫苗常需添加免疫增强剂。传统的预防性疫苗是通过接种疫苗后使机体在再次遇到相同病原体时能产生保护性免疫反应，这种理论适用于病毒或细菌传染性疾病，因病毒或细菌仅有有限数量的抗原；但抗癌疫苗并非如此，抗癌疫苗是必须能够根除已经存在的癌细胞，这样就使我们必须更好地明白肿瘤抗原和宿主免疫的作用机制，当代的疫苗理论是要诱导细胞免疫反应。至今，人们仍缺乏能有效地治疗“SARS”的药物。SARS病毒的复苏或SARS的复发将会严重威胁人类的健康。因此，研发治疗和预防SARS疫苗有重要意义。
技术实现思路
本专利技术是一种应用酵母杂交疫苗载体平台而开发的SARS杂交酵母疫苗，它能诱导与MHC I和II分子偶联的强效、持久的保护性CTL免疫反应，也就是说是能达到理想免疫效果的疫苗。本疫苗的第一个特征是应用特殊的基因载体系统。该载体由两个DNA质粒组成，一个编码协同刺激信号，如由启动子操作的细胞因子；另一个DNA质粒编码由启动子操作的至少一个或多个“SARS”抗原基因。本疫苗的第二个特征是它能很好的诱导细胞毒性T淋巴细胞免疫反应(CTL)来对抗“SARS”病毒的方法。本疫苗的第二个特征是采用了一种基因表达系统，该系统由独立启动子分别表达细胞生长因子如IFN和“SARS”病原体抗原基因。附图说明以下附图说明是对本专利技术以图表示时的一些部分的具体描述，同时也是对本专利技术原理的辅助性解释。图1.本专利技术操作基本原理的图解。图2.本专利技术的其中一个实例图解。具体实施例方式本专利技术的疫苗是一种能诱导强效、持久的CTL免疫反应的疫苗，它通过激活依赖MHC I和II的途径来产生保护性免疫反应。图1是对本专利技术操作原理的图解，图中的酵母质粒α和a分别表达“SARS”抗原基因和一个协同刺激信号，该协同刺激信号通常是促使“SARS”抗原基因刺激最有效免疫反应的相应细胞生长因子，而且很可能若没有同时将此细胞因子导入，其免疫反应将不能达到其最佳状态。这些抗原分子有如下所列但并不限于这些，如全病毒、亚单位、病毒表面抗原、及单个、多个或不同排列组合的抗原。下所列但并不限于这些，如N、M、S、E、X1、X2、X3、X4、X5等基因；细胞因子有如下所列但并不限于这些，IL-2、TNF、IFN、B7-1、GM-CSF、IL-12本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种能预防和治疗“ＳＡＲＳ”的疫苗及其制备方法，该疫苗由一个ＤＮＡ质粒通过启动子控制表达协同刺激信号的细胞因子和第二个ＤＮＡ质粒通过启动子控制表达至少一个ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ的抗原基因组成，这两个质粒都由一个宿主微生物作为载体来携带。

【技术特征摘要】
1.一种能预防和治疗“SARS”的疫苗及其制备方法，该疫苗由一个DNA质粒通过启动子控制表达协同刺激信号的细胞因子和第二个DNA质粒通过启动子控制表达至少一个SARS-Cov的抗原基因组成，这两个质粒都由一个宿主微生物作为载体来携带。2.1中所说的细胞因子包括如下IL-2、TNF、B7-1、GM-CSF、IL-12、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-12、IL-14、IL-18、B7-2、CD28、CD40、TNFR、Lymphotoxin-betaR、NF-KappaB、ICAM-1、LFA-3、M-CSFR、M-CSF、Flt3-L、SCF、TPO、CD80、CD58、GM-CSF和B-7。3.1中所说的病原体抗原是来源于SARS病毒。4.1中所说的机体是脊椎动物，如哺乳动物、人、家畜。5.1中所说的宿主微生物载体是真核和/或原核细胞。6.5中所说的真核细胞是真菌，如酵母。7....

【专利技术属性】
技术研发人员：孙娟，陆家海，
申请(专利权)人：孙娟，陆家海，
类型：发明
国别省市：94[中国|深圳]