用于免疫受损人群的糖结合物疫苗制造技术

本文公开了用于在免疫受损个体中预防或治疗细菌感染的葡萄球菌和肠球菌糖结合物疫苗。这种疫苗含有一个免疫载体以及一种来自临床致病细菌株的多糖或糖肽表面抗原的结合物。该疫苗可以用于在具有发生即刻细菌感染风险的环境中，例如在插管或者手术过程中对免疫受损个体进行主动保护。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】本专利技术主要涉及使用葡萄球菌和肠球菌糖结合物疫苗来预防或者治疗免疫受损个体的细菌感染。B.
技术介绍
在健康个体中，葡萄球菌和肠球菌很少导致全身感染，因此被视为机会性致病原。通过各种机制，具有完善免疫系统的正常成人和动物对这些细菌感染可以获得天然的抵抗力。除了可能的免疫学机制外，还包括粘膜和皮肤屏障。由于损伤，比如烧伤、外伤或留置医疗器械的手术等，会对这些天然屏障造成破坏，从而增加葡萄球菌和肠球菌感染的风险。此外，免疫反应受损的个体，比如接受化疗和放疗的癌症患者、糖尿病人、AIDS患者、酗酒者、滥用药物者、器官移植术后的患者以及婴儿发生葡萄球菌和肠球菌感染的风险也会增加。葡萄球菌是人体前鼻孔、皮肤和胃肠道的共生菌。据估计，葡萄球菌感染占全部医院获得性感染的50％以上。仅金黄色葡萄球菌就占了医院获得性感染的15-25％，仅次于表皮葡萄球菌，其占此类感染的35％。葡萄球菌感染，尤其是金黄色葡萄球菌造成的感染具有高发病率和高死亡率。葡萄球菌和肠球菌是医院和社区获得性感染，包括菌血症、转移性脓肿、脓毒性关节炎、心包炎、骨髓炎和伤口感染等的主要病因。例如，与菌血症相关的金黄色葡萄球菌总死亡率为25％。在1995年对于住院患者进行的一项研究发现，与金黄色葡萄球菌相关的住院死亡率、住院时间以及医疗费用是其他住院的二倍。在血液透析患者中，金黄色葡萄球菌菌血症是主要的致死、致病原因，其每年发生率为3～4％。对于甲氧苯青霉素的单独耐药百分率越来越高，以及早期报告的对万古霉素耐药会加重金黄色葡萄球菌感染的严重程度。因此，非常有必要对金黄色葡萄球菌进行免疫预防。金黄色葡萄球菌的荚膜多糖(CPS)是这种机会性致病原造成全身感染的毒性因子。与其他的荚膜性细菌，例如肺炎链球菌类似，金黄色葡萄球菌的荚膜多糖通过抑制多形核嗜中性细胞(PMN)的噬菌细胞调理素杀灭作用来协助侵入。这使得细菌在血液中持续存在，它们在那里产生多种不同的病毒因子，包括毒素和细胞外酶。在已知的11种金黄色葡萄球菌中，5型和8型占全部临床分离菌的85％。剩余的分离菌中大多数携带一种最近鉴别出的抗原，称作336型。在体外，5型、8型和336型荚膜多糖的抗体会诱导人多形核嗜中性细胞的种类特异性噬菌细胞调理素杀灭作用，并在动物感染模型中起到保护作用。在人体内，葡萄球菌已经发展出非常复杂的致病机制，包括细胞内和细胞外因子。例如，金黄色葡萄球菌具有其他表面抗原，通过帮助细菌逃避宿主白细胞的噬菌细胞杀灭作用以利于其在血流中的存活。这些表面抗原包括细胞壁成分，例如磷壁酸质、蛋白质A和荚膜多糖(CPS)。正是部分由于这些细菌的易变性及其产生细胞外产物以提高其感染性和致病性的能力，使得葡萄球菌菌血症及其并发症，例如心内膜炎、脓毒性关节炎、以及骨髓炎仍然严重，并在医院感染中频频见到。抗生素，例如盘尼西林已经在人体中成功的用于对抗葡萄球菌和肠球菌，但是最近这些抗生素的效果都被细菌产生耐药性的能力所减弱了。例如，在引入甲氧苯青霉素，一种更新的合成性抗生素后不久，就分离出了耐甲氧苯青霉素的金黄色葡萄球菌株。从医院感染中分离出的葡萄球菌的抗生素耐药性频率持续增加，并且尽管已经发展出预防程序并对细菌流行病学和抗生素开发进行了深入研究，耐药性金黄色葡萄球菌株仍然继续导致院内传染。目前肠球菌对于万古霉素出现了耐药，并且在某些中心中已经鉴定出对万古霉素中间耐药的耐甲氧苯青霉素金黄色葡萄球菌生物体。耐药性的交叉转移最终会导致产生广泛传播且更加难以清除的生物体。抗生素治疗和治愈葡萄球菌感染的初始效果使得治疗这些感染的免疫学方法被忽略了。尽管已经出现了多重抗生素耐药的金黄色葡萄球菌菌株，却未能发展其他策略，例如疫苗。另外，已经对将被动免疫用于免疫受损个体，例如有较高细菌感染风险的新生儿进行了测试。在建议对这类人群使用被动免疫方面，资料未能支持一个有根据的结论，Baker等人，New Engl.J.Med.35213-219(1992)；Fanaroff等人，New Engl.J.Med.3301107-1113(1994)。使用主动接种疫苗作为保护免疫受损人群的一种有效方法目前尚未实现使用任何已批准的疫苗。在免疫受损患者中常常发现在健康被免疫者体内具有免疫原性的疫苗产生免疫性的能力减弱或者不具有免疫原性，因此所提供的保护程度不足。例如，血液透析患者对于乙型肝炎疫苗的免疫反应显示被降低至健康被免疫者中所观察到结果的50-80％。类似的，老年患者对于这种疫苗的免疫反应降至46％。Pirofski和Casadevall，Clin.Microbiol.Rev.111-26(1998)。细菌荚膜多糖的免疫原性通常很差。已知它们在人体内的免疫原性与它们的分子大小和被免疫者的年龄相关。小于2岁的婴儿、老人以及其他免疫受损患者是典型的荚膜多糖疫苗低反应者。尽管对于在正常个体中导致急性疾病的某些主要细菌致病原，即肺炎链球菌、奈瑟氏脑膜炎球菌和嗜血性流感菌已经发展出多糖疫苗，但没有一种被描述能够特异的用于治疗机会性细菌。此外，当在免疫受损个体中对这些疫苗进行测试时，观察到免疫反应迅速衰减，导致缺乏有效的保护。对于肺炎链球菌，所测试的疫苗包括多种菌株，其在免疫健全成人中有效，但在免疫反应差的免疫受损个体，例如老年人和艾滋病患者中无效。对于金黄色葡萄球菌5型结合物疫苗而言，血液透析患者所产生的最大抗体水平低于健康被免疫者。并且，抗体水平在透析患者体内的衰减比在健康被免疫者体内快得多。6个月后，透析患者体内的抗体水平降低了39％，而健康个体中只降低了14％。Welch等人，J.Am.Soc.Neph.7247-253(1996)。活疫苗的免疫原性通常更高，但是在对免疫受损患者进行免疫时提出了一个问题。尽管用于此类疫苗的病毒和细菌菌株经过了减毒，某些菌株仍能回复并导致疾病。对于免疫受损患者，例如化疗患者、血液透析患者、婴儿、休克性外伤患者、手术病人以及其他抵抗力差或免疫系统部分受损患者尤其首选采用细菌成分进行免疫。正常情况下，多糖抗原产生T细胞依赖性免疫反应，并且它们会导致体液抗体，再次注射时观察不到免疫反应的增强。为了产生完全的免疫反应，将多糖与蛋白载体结合可以改变细菌荚膜多糖抗原，使其成为T细胞依赖性免疫原，从而提高它们的免疫原性并促进它们在婴儿和免疫受损患者中的使用。免疫受损个体发生细菌感染的风险常常较高，例如插管等操作。由于免疫反应差，暴露于感染性细菌株往往会导致严重的感染。许多细菌株已经对多种或者目前所有的抗生素都产生耐药的事实增加了免疫受损个体发生细菌感染时产生不良后果的可能性。因此，非常需要对免疫受损患者进行疫苗接种，以抵抗常见的临床致病细菌株。但是，已知细菌抗原，例如葡萄球菌和肠球菌多糖抗原的免疫原性很差。可以通过结合至蛋白载体来提高它们的免疫原性，但是目前所能获得的结合疫苗均未能显示在免疫受损患者体内有效，并且这些疫苗在免疫受损群体中不能产生有效免疫反应的观点已经广为接受。
技术实现思路
本专利技术者发现将某些葡萄球菌和肠球菌多糖与糖肽细菌表面抗原相结合，这里用“糖结合物”表示，可以有效的保护免疫受损个体抵抗细菌感染。例如，与重组体外蛋白A(rEPA)，一种与大肠杆菌中表达的铜绿假单胞菌外毒素A的无毒变体相结合的含本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种保护免疫受损人员抵抗至少一种葡萄球菌和肠球菌感染的方法，其包括将包括一种多糖或糖肽细菌表面抗原的糖结合物以及免疫载体的疫苗用于免疫受损人员，其中所说的疫苗包括：（ａ）金黄色葡萄球菌５型和８型多糖抗原的糖结合物；（ｂ）一种 带负电的葡萄球菌多糖抗原的糖结合物，其包括β连接的氨基己糖作为主要的碳水化合物成分，并且不包括Ｏ－乙酰基团；（ｃ）一种葡萄球菌糖肽抗原的糖结合物，其包括氨基酸和一个不含Ｏ－乙酰基团且不含己糖的α构像Ｎ－乙酰化氨基己糖；（ｄ） 一种酸性葡萄球菌多糖抗原的糖结合物，其取自将抗血清凝集至ＡＴＣＣ５５２５４的表皮葡萄球菌的分离物；（ｅ）一种粪肠球菌抗原的糖结合物，其包括摩尔比为１∶２的２－乙酰胺－２－脱氧葡萄糖和鼠李糖；（ｆ）一种粪肠球菌抗原的糖结合物， 其包括一个包括６－脱氧糖的三糖重复；（ｇ）一种肠球菌抗原的糖结合物，其包括摩尔比为１∶２的２－乙酰胺－２－脱氧半乳糖和半乳糖；（ｈ）一种肠球菌抗原的糖结合物，其与ＡＴＣＣ２０２０１６的抗体发生反应，或者（ｉ）一种肠球 菌抗原的糖结合物，其与ＡＴＣＣ２０２０１７的抗体发生反应。...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】US 2001-9-19 09/955,5851.一种保护免疫受损人员抵抗至少一种葡萄球菌和肠球菌感染的方法，其包括将包括一种多糖或糖肽细菌表面抗原的糖结合物以及免疫载体的疫苗用于免疫受损人员，其中所说的疫苗包括(a)金黄色葡萄球菌5型和8型多糖抗原的糖结合物；(b)一种带负电的葡萄球菌多糖抗原的糖结合物，其包括β连接的氨基己糖作为主要的碳水化合物成分，并且不包括O-乙酰基团；(c)一种葡萄球菌糖肽抗原的糖结合物，其包括氨基酸和一个不含O-乙酰基团且不含己糖的α构像N-乙酰化氨基己糖；(d)一种酸性葡萄球菌多糖抗原的糖结合物，其取自将抗血清凝集至ATCC55254的表皮葡萄球菌的分离物；(e)一种粪肠球菌抗原的糖结合物，其包括摩尔比为1∶2的2-乙酰胺-2-脱氧葡萄糖和鼠李糖；(f)一种粪肠球菌抗原的糖结合物，其包括一个包括6-脱氧糖的三糖重复；(g)一种肠球菌抗原的糖结合物，其包括摩尔比为1∶2的2-乙酰胺-2-脱氧半乳糖和半乳糖；(h)一种肠球菌抗原的糖结合物，其与ATCC202016的抗体发生反应，或者(i)一种肠球菌抗原的糖结合物，其与ATCC202017的抗体发生反应。2.根据权利要求1所述的方法，其中所说的疫苗包括金黄色葡萄球菌5型和8型多糖抗原中至少一种的结合物。3.根据权利要求1所述的方法，其中所说的疫苗包括金黄色葡萄球菌5型和8型多糖抗原两者的结合物。4.根据权利要求1所述的方法，其中所说的疫苗包括一种多糖抗原，其含有β连接的氨基己糖，不包括O-乙酰基团，并且能够与在ATCC55804下沉积的336型金黄色葡萄球菌抗体相结合。5.根据权利要求4所述的方法，其中所说的疫苗另外还包括金黄色葡萄球菌5型和8型多糖抗原的结合物。6.根据权利要求1所述的方法，其中所说的疫苗包括一...

【专利技术属性】
技术研发人员：AI法托姆，RB纳索，
申请(专利权)人：NABI生物医药公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]