本发明专利技术公开了一种肿瘤抗原，该肿瘤抗原主要由热休克蛋白70和聚合肽组成，所述聚合肽是由隐性表位异形肽TERT572Y或TERT988Y、MAGE-A248V9、HER-2/neu402Y依次组成的TERT572Y-MAGE-A248V9-HER-2/neu402Y或TERT988Y-MAGE-A248V9-HER-2/neu402Y聚合肽。本发明专利技术还公开了用上述肿瘤抗原致敏树突状细胞而制得的DC肿瘤疫苗及其制备方法。本发明专利技术的DC肿瘤疫苗能高效、安全、特异性治疗多种肿瘤，对肿瘤临床治疗具有重要意义。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及肿瘤生物治疗领域，尤其涉及一种肿瘤抗原、用该抗原致敏树突状细胞而获得的DC肿瘤疫苗以及该疫苗的制备方法。
技术介绍
肿瘤仍然是严重危害人类健康的主要杀手，是工业化国家第二大常见的死亡因素，受到政府、非赢利组织和制药公司的关注。全球范围内每年受癌症影响的人数超过1000 万，根据世界卫生组织的《世界癌症报告》预计到2020年将不断增长，每年发病达1500万人，死亡1000万人。国内肿瘤的死亡率在城市已上升为第一位，在农村为第二位。这意味着肿瘤治疗面临的形势十分严峻。目前临床上对于癌症的治疗仍是以手术为主，化疗和放疗为辅，但治疗的特异性不足，常常对正常组织和器官造成损伤，并且手术治疗仍存在术后高度复发及易转移的问题。肿瘤疫苗的免疫治疗可以产生针对肿瘤的特异性反应，甚至能清除残余的肿瘤病灶，并产生免疫记忆，成为继手术、化疗和放疗之后的第四种肿瘤治疗模式，且与三大常规疗法有明显的互补性。肿瘤疫苗主要是治疗性疫苗，是免疫治疗的一种方式。其中肿瘤细胞疫苗是利用患者自身的肿瘤细胞、肿瘤特异性抗原及其它免疫调节细胞来治疗和预防肿瘤，随着肿瘤细胞疫苗对肿瘤治疗的防治效果逐渐显现，方法与手段的不断成熟，它开辟了一条安全有效治疗肿瘤的现代途径。抗肿瘤免疫反应是先由抗原提呈细胞(APC)摄取肿瘤抗原，再由 APC将肿瘤抗原处理提呈给T细胞而激发的。树突状细胞(Dendritic Cell, DC)作为人体内功能最强大的专职APC，能高效地摄取、处理和提呈抗原，启动T细胞介导的免疫反应，因而成为抗肿瘤免疫反应的中心环节。应用负载肿瘤抗原的DC，能够激发机体内肿瘤特异性 T细胞，从而能有效杀伤肿瘤细胞，并且能够建立起持久的抗肿瘤特异性免疫应答。近年来利用DC疫苗治疗肿瘤已成为一种新的肿瘤生物治疗方式，是目前国内外疗效最佳的肿瘤生物疗法之一，因而备受关注。近年来，国内外学者以体外肿瘤抗原冲击自体DC使其致敏制备DC疫苗，可有效抵制同种肿瘤生长，如B淋巴细胞瘤、多发性骨髓瘤、前列腺瘤、黑色素瘤等，并在临床治疗中已取得一定的效果。尽管前期DC肿瘤疫苗开发在临床治疗研究中已取得长足的进步，并有效的延长了患者的生命，但仍存在着一定的局限性，至今没有获得非常特异的肿瘤相关抗原表位，免疫原性不高、免疫耐受性等而导致肿瘤患者术后存在高度复发及易转移等问题都亟待解决。
技术实现思路
本专利技术要解决由于缺乏特异性肿瘤相关抗原而使DC肿瘤疫苗免疫原性不高、免疫耐受性等技术问题，提供一种肿瘤抗原，其特异性强，可用于致敏DC。此外，还提供一种DC肿瘤疫苗及其制备方法，该DC肿瘤疫苗能安全、高效的特异性治疗多种肿瘤。为了解决上述技术问题，本专利技术通过如下技术方案实现在本专利技术的一个方面，提供了一种肿瘤抗原，所述肿瘤抗原主要由热休克蛋白70 (Hsp70)和聚合肽组成，所述聚合肽是由隐性表位异形肽TERT572y或TERT988Y、MAGE-A248v9、 HER-2/neu402Y 依次组成的 TERT572Y-MAGE-AM8V9-HER-2/neu4(12Y 或 TERT988Y-MAGE_AM8V9-HER-2/ neu402Y聚合肽，该聚合肽的氨基酸序列为YLFFYRKSV-YLEYRQVPV-YLEEITGYL或 YLQVNSLQTV-YLEYRQVPV-YLEEITGYL。在本专利技术的另一方面，还提供了一种DC肿瘤疫苗，该疫苗是用上述肿瘤抗原致敏 DC而制得。优选的，所述DC来源于肿瘤患者自身。所述DC肿瘤疫苗为治疗性疫苗，用于治疗多种肿瘤，包括肺癌、前列腺癌、肝癌、 肾癌、胃癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、子宫癌、食道癌等。在本专利技术的另一方面，还提供了一种DC肿瘤疫苗的制备方法，包括以下步骤(1)体外合成肿瘤抗原，该肿瘤抗原主要由Hsp70和聚合肽组成，所述聚合肽是由隐性表位异形肽 TERT572y 或 TERT988Y、MAGE-A248v9、HER-2/neu402Y 依次组成的 TERT572y-MAGE -A2侧-HER-2/neu備或TERT988Y-MAGE_A248V9-HER-2/neu備聚合肽，该聚合肽的氨基酸序列为 YLFFYRKSV-YLEYRQVPV-YLEEITGYL 或 YLQVNSLQTV-YLEYRQVPV-YLEEITGYL ；(2)抽取患者外周血，并采用淋巴细胞分离液分离获得外周血单个核细胞；(3)用无血清细胞培养液重悬，调整细胞浓度为2 4 106/mL，接种于孔板中，并置于培养箱中培养；(4)培养2 3小时后，用无血清细胞培养液洗板1 2次，加入用含500 1000U/mL GM-CSF、500 1000U/mL IL_4、10%自体血清或人AB血清、1%抗生素的细胞培养液继续培养；第3天补加DC培养液；(5)第5天加入肿瘤抗原，配以佐剂，继续培养，共同冲击致敏未成熟的DC；(6)12 16小时后加入500U/mL TNF-α诱导DC成熟；(7)第7 8天收集DC肿瘤疫苗。所述步骤(5)中加入的肿瘤抗原的终浓度为5 15mM。所述肿瘤抗原是由Hsp70与聚合肽体外结合而成，或是通过基因工程方法重组表达而制得。本专利技术的肿瘤抗原，特异性强，由其致敏自体DC制备的DC肿瘤疫苗，与现有的肿瘤疫苗相比，具有以下优点(a)有效降低耐受性、提高了免疫原性，针对多种肿瘤均可产生特异性免疫反应；(b)成份明确、安全性高；(c)配以合适佐剂，可有效增强免疫应答。因此，本专利技术的DC肿瘤疫苗对于临床治疗多种肿瘤具有重要的意义。具体实施例方式下面结合具体实施方式对本专利技术作进一步详细的说明。为了更进一步提高肿瘤疫苗免疫原性、安全性以及有效降低耐受性，寻找特异性肿瘤相关抗原并用其制备DC肿瘤疫苗对于肿瘤的临床治疗具有重要意义。MHC-I类分子限制性特异CTL识别的肿瘤抗原主要有MAGE-3、HER-2/neu等； MHC-II类分子限制性特异CTL识别的肿瘤抗原主要有TERT等；这些MHC分子限制性CTL 识别的抗原与肿瘤类型、转移及预后有一定的关系，而临床上治疗肿瘤最有效的疫苗应该同时激活⑶4+、⑶8+ T细胞及B细胞免疫应答。本专利技术的肿瘤抗原，主要由Hsp70和聚合肽组成，所述聚合肽是由隐性表位异形肽TERT572y或TERT988Y、MAGE-A248v9、HER-2/ neu402Y 依次组成的 TERT572Y-MAGE-AM8V9-HER-2/neu4Q2Y 或 TERT988Y-MAGE_AM8V9-HER-2/ neu402Y聚合肽，该聚合肽的氨基酸序列为YLFFYRKSV-YLEYRQVPV-YLEEITGYL或 YLQVNSLQTV-YLEYRQVPV-YLEEITGYL 本专利技术的肿瘤抗原将MHC-I类与MHC-II类分子限制性肿瘤抗原联合使用，能更有效地激活⑶4+、⑶8+ T细胞及B细胞免疫应答，且其中的Hsp70 使免疫效果更佳。利用本专利技术的肿瘤抗原配以佐剂共同冲击致敏自体树突状细胞(DC)，制备所得的 DC肿瘤疫苗，能高效激活细胞毒性T淋巴细胞(CTL)，特异性地杀伤肿瘤细胞，对多种肿瘤的临床治疗具有明显的改善作用，有效抑制肿瘤的发展和转移。本专利技术的DC肿瘤疫苗的制备方法，包括以下步骤(1)体外本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种肿瘤抗原，其特征在于，所述肿瘤抗原主要由热休克蛋白７０和聚合肽组成，所述聚合肽是由隐性表位异形肽ＴＥＲＴ５７２Ｙ或ＴＥＲＴ９８８Ｙ、ＭＡＧＥ－Ａ２４８Ｖ９ 、ＨＥＲ－２／ｎｅｕ４０２Ｙ依次组成的ＴＥＲＴ５７２Ｙ－ＭＡＧＥ－Ａ２４８Ｖ９－ＨＥＲ－２／ｎｅｕ４０２Ｙ或ＴＥＲＴ９８８Ｙ－ＭＡＧＥ－Ａ２４８Ｖ９－ＨＥＲ－２／ｎｅｕ４０２Ｙ聚合肽，该聚合肽的氨基酸序列为ＹＬＦＦＹＲＫＳＶ－ＹＬＥＹＲＱＶＰＶ－ＹＬＥＥＩＴＧＹＬ或ＹＬＱＶＮＳＬＱＴＶ－ＹＬＥＹＲＱＶＰＶ－ＹＬＥＥＩＴＧＹＬ。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：许凤华，吴国祥，杨涛，张绪敏，
申请(专利权)人：上海科医联创生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：31
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。