含活性尿激酶原的组合物、其冻干方法及冻干制剂技术

本发明专利技术涉及医药领域，具体涉及一种含有活性尿激酶原的药物组合物、其冻干方法及冻干制剂。

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及医药领域，具体涉及一种含有活性尿激酶原的药物组合物、其冻干方法及冻干制剂。
技术介绍
由血栓引起的心血管系统疾病严重威胁着人类健康，临床上急需一种溶栓效果好、副作用小的药物。尿激酶原(Pro-uk)可专一地激活血栓表面的纤溶酶原，进而特异性地溶解血栓，与此同时不会破坏纤溶系统，全身出血的副作用小；经过临床前的动物实验和临床试验验证，Pro-uk还具有使用剂量小、使用安全、溶栓效果好、再栓率低、无过敏反应等优点，是一种安全无毒的、理想的生物类溶栓制剂，具有广阔的市场前景。由于天然材料中Pro-uk含量甚微，难以大量制备，人们从二十世纪八十年代开始就开始采用基因工程技术来生产重组Pro-uk，目前，已经在大肠杆菌(Homes WE，et al.Cloning and expression of the gene forpro-urokinase in Escherichia coli.Biotechnology，1985；3923；Winkler ME，et al.Purification and characterization of recombinant single-chain urokinaseproduced in Escherichea coli.Biochemistry，1986；254041)、哺乳动物细胞如小鼠IC9细胞、CHO细胞、Namalwa细胞(Nolli ML，et al.Production andcharaterisation of human recombinant single chain urokinase-typeplasminogen activator from mouse cells.Fibnrinolysis，19893101；Nelles L，et al.Characterization of recombinant human single chain urokinase-typeplasminogen activator mutants produced by site-specific mutagenesis ofLysine.J Biol Chem，1987；2625682；李风知等.人尿激酶原全长cDNA在中国仓鼠卵巢细胞中的稳定表达.生物工程学报，1991；7114；Satoh M，et al.Stable production of recombinant pro-urokinase by humanlymphoblastoid Namalwa KJM-1 cellsHost-cell dependency of theespressed-protein stability.Cytotechnology，1993；1379；Satoh M，et al.Efficient expression of pro-urokinase by human lymphoblastoid NamalwaKJM-1 cells using Moloney retroviral promoter.Cytotechnology，1996；18167)和昆虫细胞(徐杨等.人尿激酶原cDNA在昆虫杆状病毒真核表达系统中的高效表达.生物化学杂志，1993；6709)、骨髓瘤细胞(WeaverWD，et al.New recombinant glycosylated prourokinase for treatment ofpatients with acute myocardial infarction.J Am Coll Cardiol，1994；241242)等中都获得了很高的表达并进行了纯化。Pro-uk制剂极不稳定，容易被多种蛋白酶切割成尿激酶(UK)，同时，在液体状态下，即使低温保存也会自动分解(于芳等，重组尿激酶原半成品的稳定性观察，军事医学科学院院刊，2000，24(1)70)；另外，由于实验室测定、临床使用以及日常运输和贮存的需要，通常需要采用干燥的方法稳定其活性防止降解。
技术实现思路
为了解决现有技术中尿激酶原制剂不稳定的问题，本专利技术的专利技术人通过长期研究，获得了一种含有活性尿激酶原的组合物，与现有的尿激酶原制剂相比，本专利技术的组合物可以长期稳定保存。本专利技术另一方面提供了该尿激酶原组合物的制备方法。本专利技术药物组合物含有适量的Pro-uk、赋形剂和缓冲溶液和盐类。其中，赋形剂可为糖类和/或多元醇，可选择蔗糖、海藻糖、甘露醇、乳糖、葡萄糖、山梨醇、麦芽糖等中的一种或多种，其中优选甘露醇，因为甘露醇冻干的产品无论从外观形态还是冻干时间都优于其它赋形剂，而且甘露醇已在临床使用多年，价格也较便宜，因此，选择甘露醇可以缩短产品的冻干时间，提高冻干效率，降低成本。甘露醇含量的优选范围为6％-12％(重量/体积比)，从经济角度考虑，最优选6％(重量/体积比)；缓冲液可以为磷酸盐缓冲液和/或Tris-HCl，其中磷酸盐缓冲液的含量的优选范围为8-25mmol/L，Tris-HCl含量的优选范围为0.005-0.015mol/L；在该组合物中，其中的盐类可以为氯化钠，氯化钠含量的优选范围为0.03-0.20mol/L；Pro-uk可以为任何可能的浓度，但为了冻干和医疗上使用的方便，优选浓度范围为1.5-5.5mg/ml。另外，在上述组合物中，如果添加保护剂则可得到更好的冻干效果，保护剂可为蛋白质，优选白蛋白，白蛋白在组合物中含量的优选范围为1.5-7.5‰(重量/体积比)。需要说明的是上述药物组合物中的Pro-uk可按现有技术的方法制备，但并不限于这些方法；溶液可按一般溶液的配制方法配制，但为防止Pro-uk的降解，最好在低温下配制，配制时动作应温和。本专利技术还提供了含活性Pro-uk的组合物溶液的冷冻干燥方法，该方法包括以下步骤将分装好的Pro-uk产品放入预先降温至-35℃～-45℃的冻干机，预冻2-4h，然后开始抽真空，进行首次升温至-25℃～-30℃，当瓶内水分基本升华后进行第二次升温，使其温度上升至25℃～35℃，稳定后保持0.5h～1.5h，即可结束冻干。生物制品干燥的方法很多，但多数可使蛋白质变性。而冷冻干燥技术利用冷冻的溶液在低温低压条件下，从冻结状态不经过液态直接升华除去水分完成干燥。冷冻干燥技术可以很好地保持药物原有的理化性质和生理活性，且有效成分损失极少。此外，冻干制剂特有的疏松多孔结构，可以使药物易于重新复水而恢复活性，而且冻干制剂含水量低，易于长期保存。因此，冷冻干燥是临床和实验室保存蛋白产品的最佳方法之一。本专利技术的含活性Pro-uk的药物组合物采用以上方法冻干后，获得了活性Pro-uk的冻干制剂。该冻干制剂外观良好，在-20℃和4℃贮存条件下，保存3年活性无变化；通过加速贮存试验对冻干制剂在不同条件下的长期稳定性进行观察，对贮存寿命进行了估算，结果如下Pro-uk活性损失50％的情况下Pro-uk冻干制剂在37℃可存放173d，25℃存放2.78年，4℃存放70.8年，0℃存放118年；活性损失10％时，Pro-uk冻干制剂在37℃可存放20d，25℃存放100d，4℃存放7.6年，0℃存放11年，足以满足Pro-uk实验室和临床本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种尿激酶原组合物，含有适量的尿激酶原、赋形剂、缓冲溶液和盐类。

【技术特征摘要】
1.一种尿激酶原组合物，含有适量的尿激酶原、赋形剂、缓冲溶液和盐类。2.权利要求1所述的组合物，其中还包括保护剂。3.权利要求1或2所述的组合物，其中尿激酶原含量为1.5-5.5mg/ml。4.权利要求2所述的组合物，其中所说的保护剂是浓度为1.5‰-7.5‰(重量/体积比)的白蛋白。5.权利要求1或2所述的组合物，其中的赋形剂是糖类和/或多元醇。6.权利要求6所述的组合物，其中的糖类和/或多元醇选自甘露醇、蔗糖、海藻糖、甘露醇、乳糖、葡萄糖、山梨醇、麦芽糖中的一种或几种。7.权利要求1或2所述的组合物...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜燕，胡铁强，肖成祖，
申请(专利权)人：上海天士力药业有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]