本发明专利技术涉及Ｍ．Ｗ．范围为１，０００到１０，０００的可溶性葡聚糖低聚物，该低聚物通过用商业可得的β－葡聚糖水解酶处理由分离出的酵母变异ＩＳ２细胞壁得到的不溶性β－葡聚糖来制备。该可溶性葡聚糖低聚物在促进免疫活性和抑制癌细胞生长方面显示强大效力，因此可用作治疗或保健食品来治疗和预防免疫缺陷和癌症疾病。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】本专利技术涉及包含从酿酒酵母IS2中分离得到的可溶性葡聚糖低聚物的组合物及其制备方法，该组合物可用于免疫活性或者防治癌症。
技术介绍
β-葡聚糖可以从各种来源如酵母菌、微生物、蘑菇、谷物和藻类中分离得到。到目前为止，已对β-葡聚糖进行了研究并以各种形式的产品加以应用。特别是对从酵母菌细胞壁得到的β-葡聚糖进行了研究，具有很深的了解。酵母菌是一种微生物，FDA将其分类为GRAS(食品安全规范)，该菌用于包括食品领域在内的各种领域，其内层细胞膜包括作为主要成份的1，3-和1，6-葡聚糖，还有少量的甲壳质和甘露蛋白质；然而其外层细胞膜包括连接甘露聚糖的甘露蛋白质。β-葡聚糖是酵母菌细胞壁的主要成份。据报道，β-葡聚糖能够通过激活和激增巨噬细胞来增加Ag-特异性免疫反应，能提高对病原体如真菌、细菌、病毒等的抵抗力，能抑制外伤中出现的免疫消弱和能增加宿主对癌症和癌症转移的抵抗力。(Abel，G.and Czop，J.K.，INT.J.Immunophamacol.，14，pp1363-1373，1992；Babineau，et al.，220(5)，pp601-609，1994；Benach J.L.，et al.，Infection and Immunity，35(3)，pp947-951，1982；Di Renzo，L.，et al.，Eur.J.Immunol.，21，pp1755-1758，1991；Fukase，S.，et al.，Cancer Res.，47，pp4842-4847，1987；Janusz，M.J.，etal.，J.Immun.，142，pp959-965，1989；Olsen，E，J.，et al.，J.Immun.，64，pp3548-3554，1996，Sakurai，T.，et al.，Int.J.Immunopharmacol.，14，pp821-830，1992；Czop，J.K.，et al.，Prog.Clin.Biol.Res.，297，pp287-296，1989)。因为酵母菌的β-葡聚糖是水不溶性多糖，所以到目前为止，已经发展出许多制备高溶解性β-葡聚糖的方法，如下所述。美国专利No.5,576,015公开了细微粒形式的β-葡聚糖的制备方法以提高其吸收率；美国专利No.4,877,777公开了向葡聚糖上引入化学式以提高其溶解性的方法；美国专利No.5,037,972和美国专利No.6,143,883公开了制备可溶性葡聚糖颗粒的方法，该方法包括用有机溶剂提取葡聚糖，然后用β-葡聚糖酶或者纤维素酶处理该葡聚糖，这些酶能降解葡聚糖的基本结构β-1，3-D-葡萄糖链。然而，上述引用文献中并未报道或公开从酵母变异菌株IS2(KCTC0959BP)分离得到的特定可溶性葡聚糖低聚物及该葡聚糖低聚物对癌症疾病的治疗效果，这些公开在此并入作为参考。本专利技术的专利技术人致力于研究从特定的酵母变异菌株中找到具有药学活性的β-葡聚糖并最终完成本专利技术，确认通过提取酵母菌突变体IS2细胞壁所得到的M.W.小于50,000D的可溶性葡聚糖低聚物显示了强大的对免疫系统刺激活性和对癌细胞增殖的抑制活性。对本专利技术公开的以下详细描述会使本专利技术的上述目的和其它目的显而易见。
技术实现思路
根据本专利技术的一个方面，本专利技术提供了源自酵母菌变异菌株IS2的可溶性葡聚糖低聚物及其制备方法。另外，本专利技术提供了用于提高免疫力和抗癌活性的包含利用本专利技术方法制备的可溶性葡聚糖低聚物的药物组合物。相应地，本专利技术的目的是提供具有免疫提高活性和癌细胞增殖抑制活性的可溶性葡聚糖低聚物，该可溶性葡聚糖低聚物源自酵母菌变异菌株(KCTC 0959BP)细胞壁，通过用酶处理不溶性β-葡聚糖得到。本专利技术的另一个目的是提供制备可溶性葡聚糖低聚物的方法，该方法包括以下步骤(a)在培养基中培养酵母菌(酿酒酵母)变异IS2用于接种；(b)将上述酵母菌培养溶液接种到培养基中，培养并离心得到酵母菌；(c)向其中加入NaOH以从酵母菌细胞壁中提取β-葡聚糖；(d)将提取的β-葡聚糖与水解酶反应，然后经过滤得到可溶性葡聚糖低聚物；和(e)最后冷冻干燥以得到本专利技术的可溶性葡聚糖低聚物。上述酵母变异IS2的特征是具有提高免疫力活性。通过上述步骤制备的可溶性葡聚糖低聚物包括分子量小于50,000，优选范围1,000-10,000的葡聚糖低聚物。本专利技术的又一目的是提供可作为有效成份的、以有效剂量治疗或预防免疫缺陷疾病或癌症的药物组合物及其药学可接受载体，该药物组合物包括通过上述步骤获得的源自酵母菌变异菌株(KCTC 0959BP)细胞壁的可溶性葡聚糖低聚物。可根据下述优选的实施方案制备该具有创造性的可溶性葡聚糖低聚物。对于本专利技术，上述可溶性葡聚糖低聚物可通过以下步骤制备；(a)第一步，培养酵母菌IS2(KCTC0959BP)的步骤，包括在含有0.5-10w/v％葡萄糖、0.1-5w/v％酵母菌提取物和0.1-10w/v％蛋白胨(pepton)的液态培养介质中培养酵母菌IS2(KCTC0959BP)；(b)第二步，从酵母菌培养介质中得到酵母菌的步骤，包括将第一步制备的数量范围为0.1-10v/v％的酵母菌培养介质接种到PH范围为5.0-6.0的含0.5-10w/v％葡萄糖、0.1-5w/v％酵母菌提取物、0.01-2w/v％硫酸铵、0.001-1w/v％磷酸钾和0.001-1w/v％的硫酸镁的初级液态培养介质中，在速度范围100-400rpm下培养12-48小时，通气量范围从0.3-3vvm，生长介质的温度范围为20-40℃，然后经离心以得到酵母菌；(c)第三步，从酵母菌细胞壁中提取湿的β-葡聚糖的步骤，包括向酵母菌中加入1-10％的氢氧化钠溶液，分散，在70-100℃温度范围内反应30分钟到5小时，然后经离心就得到干燥的酵母菌细胞群，该过程可重复数次并合并，用强酸如盐酸或硫酸将细胞群的PH滴定到4.0-5.0范围内，重新分散在氢氧化钠溶液中，在75℃下进一步反应1小时，经离心分离氢氧化钠溶液和固体成份；最后，洗涤并纯化该固体成份以得到湿的β-葡聚糖；(d)第四步，得到葡聚糖低聚物液态相的步骤，包括向上述所得物中加入数量等于葡聚糖体积(v/v％)1-10倍的蒸馏水和等于葡聚糖(v/w％)1/20到1/5量的β-葡聚糖水解酶，在30-80℃温度范围内反应6-24小时，淬灭反应后经离心回收上清液，用超滤膜过滤上清液以得到分子量小于50,000的具有专利技术性质的可溶性葡聚糖低聚物 (e)第五步，得到最终可溶性葡聚糖低聚物干燥粉末形式的步骤，包括将第四步所制备的低聚物在低于-70℃下单独放置12-48小时，然后经冷冻干燥以得到本专利技术的可溶性葡聚糖低聚物干燥粉末形式。本专利技术的另一目的是提供制备上述可溶性葡聚糖低聚物的方法。本专利技术的又一目的是提供采用上述方法制备的、源自酵母菌变异菌株IS2(KCTC 0959BP)的可溶性葡聚糖低聚物，另外，本专利技术的目的还包括提供可作为有效成份的、以有效剂量治疗或预防免疫缺陷疾病或癌症的药物组合物及其药学可接受载体，该药物组合物包括通过上述步骤获得的源自酵母菌变异菌株(KCTC 0959BP)细胞壁的可溶性葡聚糖低聚物。本专利技术的组合物可用于加本文档来自技高网...
【技术保护点】
源自酵母菌变异菌株（ＫＣＴＣ０９５９ＢＰ）细胞壁的通过用水解酶处理不溶性β－葡聚糖得到的可溶性葡聚糖低聚物，其具有免疫促进活性和癌细胞增殖抑制活性。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】KR 2003-3-18 10-2003-00166651.源自酵母菌变异菌株(KCTC 0959BP)细胞壁的通过用水解酶处理不溶性β-葡聚糖得到的可溶性葡聚糖低聚物，其具有免疫促进活性和癌细胞增殖抑制活性。2.制备可溶性葡聚糖低聚物的方法，该方法包括以下步骤(a)在培养基中培养酵母菌(酿酒酵母)变异IS2(KCTC 0959BP)以用于接种；(b)将上述酵母菌培养溶液接种到培养基中，分批进料培养并离心得到酵母菌；(c)向其中加入NaOH以从酵母菌细胞壁中提取β-葡聚糖；(d)将提取的β-葡聚糖与水解酶反应，然后经过滤得到可溶性葡聚糖低聚物；和(e)最后冷冻干燥以得到分子量小于50,000的可溶性葡聚糖低聚物。3.一种药物组合物，该药物组合物包括根据权利要求2所述的制备方法得到的源自酵母菌变异菌株(KCTC 0959BP)细胞壁的可溶性葡聚糖低聚物，该组合物作为活性成份用来治疗或预防免疫缺陷疾病。4.一种药物组合物，该药物组合物包括根据权利要求2制备方法得到的源自酵母菌变异菌株(KCTC 0959BP)细胞壁...
【专利技术属性】
技术研发人员：郑凤铉，朴正勋，姜晚植，李广镐，文元国，
申请(专利权)人：碧欧普罗吉有限公司，天然FP公司，
类型：发明
国别省市：KR[韩国]
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