荔枝核黄酮类多酚类化合物在防治流感病毒感染性疾病上的应用制造技术

荔枝核黄酮类多酚类化合物在防治流感病毒感染性疾病上的应用，是将荔枝核黄酮类、多酚类化合物制成药剂学上的任何剂型，荔枝核黄酮类多酚类化合物对ＭＤＣＫ细胞的半数毒性浓度ＴＣ↓［５０］为３４７．３μｇ／ｍｌ，对照为３５１．３μｇ／ｍｌ，对流感病毒的半数有效浓度１Ｃ↓［５０］为６３．２μｇ．／ｍｌ，对照为６２．７μｇ／ｍｌ，治疗指数Ｔ１为５．５，对照为５．６，药物浓度在１６０μｇ／ｍｌ以上时，对流感病毒引起的细胞病变的抑制率可达５０％以上，且存在明显的量效关系，随药物浓度增加而抑制率升高。本发明专利技术的药物与病毒唑相比治疗效果无明显差异，而对人体的毒副作用小，又是废弃的荔枝核提取物，原料易得，加工提取工艺成熟简单，可以制成针剂、片剂、胶囊等抗流感病毒的新药物，应用前景广阔。

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及荔枝核黄酮类、多酚类化合物的应用，具体地说是荔枝核黄酮类多酚类化合物在防治流感病毒感染性疾病上的应用。
技术介绍
流感是由流感病毒引起的一种急性病毒性呼吸道传染病，以发病率高、流行广泛、传播迅速为主要特点。目前临床使用的抗流感病毒药物不少，但多数毒性较大，易损害宿主细胞和易导致耐药毒株出现。当前以病毒唑的治疗效果最佳，但也有一定的副作用，少数病人口服或静注时有口干，软便或稀便，白细胞减少等症状，动物实验有致癌作用，故妊娠初期三月内禁用。
技术实现思路
本专利技术的目的是要公开毒副作用低的荔枝核提取物——荔枝核黄酮类多酚类化合物在防治流感病毒感染性疾病上的应用。本专利技术是将荔枝核黄酮类、多酚类化合物应用于防治流感病毒感染性疾病。所述的荔枝核黄酮类多酚类化合物在防治流感病毒感染性疾病上的应用，是将荔枝核黄酮类、多酚类化合物制成药剂学上的任何剂型应用于防治流感病毒感染性疾病。将荔枝核黄酮类、多酚类化合物制成荔枝核注射液，荔枝核黄酮类多酚类总含量为100mg/ml，每支2.0ml，临床用于防治流感病毒引起的疾病，用法每次2.0ml、肌肉注射、静脉注射或静脉点滴，每天2次，5天一个疗程。也可将荔枝核黄酮类、多酚类化合物制成荔枝核片片剂，荔枝核黄酮类多酚类总含量100mg/0.3g/片，临床用于防治流感病毒引起的疾病。用法每次2-4片，口服，每天2-3次，7天为一疗程。本专利技术用荔枝核黄酮类、多酚类化合物抗流感病毒是用不同浓度的荔枝核黄酮类、多酚类化合物分别作用于MDCK细胞和接种在MDCK细胞上的流感病毒，以病毒唑为对照药，观察荔枝核黄酮类、多酚类化合物对MDCK细胞的毒性作用和对流感病毒抑制作用的情况，其药物抗MDCK细胞的半数毒性浓度TC50为347.3μg/ml，对照为351.3μg/ml，抗流感病毒的半数有效浓度IC50为63.2μg/ml，对照为62.7μg/ml，治疗指数为5.5，对照为5.6。应用结果证实荔枝核黄酮类、多酚类化合物对流感病毒有明显的抑制作用，且存在明显的量效关系，随药物浓度增加，其抗病毒活性增强，抑制率升高，经直线回归分析，P＜0.05，与病毒唑无明显差异，荔枝核黄酮类、多酚类化合物浓度在160μg/ml以上时，对流感病毒引起的细胞病变的抑制率可达50％以上。专利技术应用的具体步骤是1、所用的药物为荔枝核黄酮类(Flavonoids)、多酚类化合物(Polyphenol)，病毒为流感病毒鼠适应株，细胞为MDCK细胞；2、用细胞培养技术培养MDCK细胞，用胰酶将生长良好的MDCK细胞分散成单个细胞悬液，按1×105/ml浓度分种于40孔板，每孔0.1ml。置37℃，5％CO2培养箱中培养24h。待细胞长成单层后备用；3、观察药物对MDCK细胞的毒性作用根据Mosmnna建立的四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测药物对MDCK细胞的毒性作用。在培养好长成单层的细胞孔板上，换含不同浓度的含大黄蒽醌类化合物药液，每种浓度重复4孔，并设正常细胞对照。继续培养48h后，弃培养液上清，每孔加含5mg/mlMTT的不含血清的MEM培养基50μl，置CO2培养箱中继续培养2～3h后，弃MTT上清，PBS洗3次，每孔加溶解液(DMSO∶乙醇体积比为1∶1)100μl，振荡5～10分钟，待结晶完全溶解，置96孔酶标测定仪上，测定570nm波长处的光密度OD值，并根据下式计算细胞存活率，找出药物对细胞的最大无毒浓度范围。细胞存活率(％)＝(实验孔OD值/对照孔OD值)×100％药物对MDCK细胞的毒性作用表现为细胞粘连、皱缩、脱落并且吸光值明显下降，吸光度OD值在0.10以下。将不同浓度的药物作用于细胞，结果见表1表1荔枝核黄酮类(Flavonoids)多酚类(Polyphenol)化合物对MDCK细胞的毒性作用 4、观察药物对流感病毒增殖的抑制作用于已长成单层MDCK细胞的40孔板上，每孔接种50μl 100TCID50的流感病毒液，于35℃吸附90min，弃病毒上清。根据细胞毒性实验的结果，在药物无毒浓度范围内，加入不同浓度的含药维持液每孔0.2ml，然后将流感病毒培养板置35℃、5％CO2培养，每日观察CPE。隔天换新鲜含药维持液。实验同时设正常细胞对照组、病毒对照组、阳性药物病毒唑组和中药样品组。CPE记录方法为一为无CPE，+为25％细胞出现CPE；++为50％细胞出现CPE；+++为75％细胞出现CPE++++为100％细胞出现CPE。约在病毒对照+++～++++时弃培养液上清，每孔加入含5mg/ml MTT的培养液50μl，继续培养2～3h后洗去MTT上清，加DMSO溶解液每孔100μl，混匀，5～10分钟后，用酶标仪测570nm波长处的光密度OD值。并按下述公式计算药物对流感病毒抑制率(Inhibitiverate)。 流感病毒对MDCK细胞CPE表现为细胞皱缩，变园、壁厚、脱落、拆光性增强，在无毒浓度范围内，将药物以不同的浓度进行抑制流感病毒实验，其病毒抑制率见表2。表2荔枝核黄类(Flavonoids)多酚类(Polyphenol)化合物的抗流感病毒作用 5、结合细胞毒性实验结果，用统计软件SPSS10.0的probit回归法计算药物对MDCK细胞的半数毒性浓度TC50为347.3μg/ml，对照为351.3μg/ml，抗流感病毒的半数有效浓度IC50为63.2μg/ml，对照为62.7μg/ml，药物的治疗指数TI为5.5，对照为5.6，证明荔枝核黄酮类、多酚类化合物在MDCK细胞中对流感病毒有抑制作用。荔枝核黄酮类、多酚类化合物是从荔枝核中提取分离得到的，荔枝核本属废弃物，为废物再利用，来源广，加工提取工艺成熟，荔枝核黄酮类、多酚类抗流感病毒作用强，与病毒唑无明显差异，而对人体的毒副作用小，可以制成针剂，片剂等多种剂型，应用到流感病感染性疾病的防治上，应用前景非常广阔。(四)具体实施例实施例1将荔枝核黄酮类、多酚类化合物制成针剂荔枝核注射液，荔枝核黄酮类多酚类总含量100mg/ml，每支2.0ml，临床用于防治流感病毒引起的疾病，用法每次2.0ml、肌肉注射、静脉注射或静脉点滴，每天2次，5天一个疗程。实施例2将荔枝核黄酮类、多酚类化合物制成荔枝核片片剂，荔枝核黄酮类多酚类总含量100mg/0.3g/片，临床用于防治流感病毒引起的疾病。用法每次2-4片，口服，每天2-3次，7天为一疗程。本文档来自技高网...

【技术保护点】
荔枝核黄酮类多酚类化合物在防治流感病毒感染性疾病上的应用，其特征是：将荔枝核黄酮类、多酚类化合物应用于防治流感病毒感染性疾病。

【技术特征摘要】
1.荔枝核黄酮类多酚类化合物在防治流感病毒感染性疾病上的应用，其特征是将荔枝核黄酮类、多酚类化合物应用于防治流感病毒感染性疾病。2.根据权利要求1所述的荔枝核黄酮类多酚类化合物在防治流感病毒感染性疾病的应用，其特征是将荔枝核黄酮类、多酚类化合物制成药剂学上的任何剂型。3.根据权利要求1或2所述的荔枝核黄酮类多酚类化合物在防治流感病毒感染性疾病上的应用，其特征是将荔枝核黄酮类、多酚类化合物制成荔枝核注射液，荔枝核黄酮类多酚...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐庆，罗伟生，张奉学，苏小建，龚受基，梁荣感，李丽亚，韦京辰，
申请(专利权)人：桂林医学院，
类型：发明
国别省市：45[中国|广西]