一种菌根食用菌菌种的分离培养方法技术

本发明专利技术涉及一种菌根食用菌菌种的分离与培养方法，其特征为：所述的菌根食用菌菌种的分离培养方法包括如下步骤：ａ、将菌根菌的孢子或子实体组织放入琼脂培养基中培养菌丝体；ｂ、将以上培养好的菌丝转入琼脂培养基中培养或将琼脂菌丝体接入液体培养基中培养；ｃ、将上述液体培养的菌丝体经匀质器匀质并再次接入液体培养基中培养，直到菌丝体的菌丝球直径达到０．２－１．５ｃｍ为止；ｄ、将以上培养好的菌丝体放在合适的培养条件下培养出菇。本发明专利技术的方法经多种菌根食用菌菌种的分离培养实验表明，是一种操作简单有效，效率高的方法，是一个很好的培养基，很适宜于在大量外生菌根菌菌种的分离培养中推广应用，具有显著的经济效益。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及真菌的
，具体地说是一种用于生产菌根食用菌子实体为目的 的菌种的分离和培养的方法。
技术介绍
目前菌根菌的大多数可食用子实体都是著名的食用菌，其价格极其昂贵。如松 □蘑(Tricholoma matsutake)、黑孢块菌(Tubermelanosporum Vitt.)、意大禾丨J 白块菌 (Tuber magnatum)、松乳 (Lactarius deliciosus)、红汁乳 (L. hatsudake)、美味牛 月干lif (Boletus edulis)lif (Amatanita caesarea) > φ^pi^M (Tuber sinense K. Tao et Liu)、印度块菌(Tuber indicum Cooke etMassee)、鸡油菌(Cantharellus cibarius Fr.) > zF Ei lif (The 1 ephoraganbajun Zang) > Χ 1 1 |if (Clavulinopsis miyabeana(Ito. )Ito.)、褐环乳牛肝菌(Suillus luteus (L. :Fr.) Gray)、厚环乳牛肝 菌(Suillus greviller(KL.) sing.)> 变绿红 (Russulavirescens(schaeff.)Fr.) > 澄盖鹅膏(Amanita caesarea (Scop :Fr. ) Pers. ex schw.)、玉蕈离裙伞(Lyophyllum shimeji (kawam.)Hongo)、烟色离裙伞(Lyophyllum fumosum(Pers. :Fr.) Orton)等，还有 灰花纹鹅膏(Amanita fuliginea Hongo)、亚稀裙11 (Russula subnigricans Hongo)等 极具经济价值的毒菌。但是对其菌种的分离培养一直是一个难题，因其独具的特性，在现有的技术条件 下，不能象广泛栽培的腐生食用菌(如香菇、木耳等)那样进行分离培养，培养基在其中扮 演了十分重要的角色。目前在外生菌根菌分离和培养的过程中，主要使用的是MMN培养基， 此培养基在培养一些林业上常用的比较容易培养的菌根菌时，比较适用，但还是有很多经 济价值较高的菌根食用菌在这个培养基上较难以生长，或生长很慢；另外一个培养基就是 腐生菌及其它一些微生物培养中经常用到的PDA培养基，但大多数菌根菌在此培养基上难 以生长；后来人们又将这两种培养基按一定比例配制，用于菌根菌的培养，使许多菌根菌的 分离与培养的成活率和生长速度得到提高，但菌丝较在MMN上要老化快得多。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种用于菌根食用菌菌种分离和培养的培养基及方法，它 可丰富现有外生菌根菌菌种分离培养的培养基和方法。为了实现上述目的，本专利技术的技术方案是一种外生菌根菌菌种分离和培养方法， 其特征在于所述的菌根菌菌种的分离和培养方法包括如下步骤a、将菌根菌的孢子或子 实体组织放入琼脂培养基中培养菌丝体，培养室的温度为15-25°C，根据菌丝的生长速度培 养25-35天，直到菌丝体长满培养基表70-80%，放入1_15°C的冰箱中保存备用；b、将以上 培养好的菌丝体转入琼脂培养基中继续培养或将菌丝体接入液体培养基中培养，培养条件 为150 180r/min，温度为20_28°C，湿度65%，培养7_14天，直到培养基颜色透明，并略带 淡黄色时为止；c、将上述液体培养的菌丝体经勻质器勻质并再次接入液体培养基中培养，直到菌丝体的菌丝球直径达到0. 2-1. 5cm为止；d、将以上培养好的菌丝体放在合适的培养 条件下培养出菇，其出菇培养条件为温度为20-28°C、光照100-600LUX的培养室内静置培养。我们对菌根菌生长条件的分析，在培养基中加入一些天然的物质，用于菌根菌的 培养，使其分离成活率及转管成活率得到大的提高，并成功培育出子实体。使用时，本专利技术 的方法经多种菌根食用菌菌种的分离和几个牛肝菌菌种的培养实验表明，是一种操作简单 有效，效率高的方法，很适宜于在外生菌根菌菌种的分离、生理生化及子实体出菇试验研 究过程中推广应用，具有较高的应用价值，其分离成活率由用现有技术的20-30%提高到 90% -100%以上，部分菌根菌还可形成子实体。附图说明图1为分离培养的美味牛肝菌菌丝体效果2为本专利技术培育出的美味牛肝菌子实体效果图具体实施例方式下面结合实施例对本专利技术作进一步的描述。本专利技术一种外生菌根菌菌种的分离和培养方法，其特征在于所述的外生菌根菌 菌种的分离和培养方法包括如下步骤a、将菌根菌的孢子或子实体组织放入琼脂培养基中 培养菌丝体，其中琼脂培养基组成如下=MgSo4 · 7Η20，0· 13 0. 2g ；KH2Po4,0. 4 0. 65g ； Cacl2,0. 03 0. 07g ；酒石酸铵，0. 51 1. Og ；维生素B1,80 200 μ g ；Fecl3 ·6Η20，0· 012 0. 036g ；葡萄糖，10 30g ；杉木根煮汁，300 380mL ；马铃薯煮汁，200 450mL ；琼脂 条，15 20g ；补蒸馏水至lOOOmL，pH5. 1 5. 8 ；b、将以上培养好的菌丝转入琼脂培养基 中培养或将菌丝体接入液体培养基中培养，其中液体培养基组成如下柠檬酸，0. 5 2g ； KH2PO4,0. 5 2g ；MgSO4 · 7Η20，0· 5 2g ；CaCl2, 30 80mg ；FeCl3 · 6H20, 30 80mg ；矿物 质混合液，5 15mL ；维生素混合液，5 15mL，蒸馏水，IOOOmL ；pH 5 6。其中矿物质混 合液组成ZnSO4 · 7H20, 300mg ；NiSO4 · 6H20, 200mg ；CuSO4 · 5H20, IOOmg ；MnS04 · 5H20, 50mg ； CoS04 WH2OJOmg ；蒸馏水，IOOOmL ；维生素混合液组成维生素Bl，300mg ；烟酸，5mg ；叶酸， 3mg ；生物素，5mg ；盐酸吡哆醇，0. 5mg ；硫酸腺嘌呤，3mg ；氯化胆碱，3mg ；蒸馏水IOOOmL ；C、 将上述培养的菌丝体经勻质器勻质并再次接入液体培养基中培养，直到菌丝体的菌丝球 直径达到0. 2-1. 5cm为止；d、将以上培养好的菌丝体放在培养室培养出菇，a步骤中，将 菌根菌的孢子或子实体组织放在琼脂培养基上，放入培养室中培养，直到长出菌丝球直径 达到0. 2-1. 5cm的菌丝体，培养室的温度为15-25°C，菌丝的生长速度为25-35天，然后放 入1-15°C的冰箱中保存备用。b步骤中，具体为将配制好的琼脂培养基20 50mL、液体培 养基约IOOmL分别装入容量为250mL的三角瓶中，用一层透气性封瓶膜，外加2层报纸封 口，并用橡皮筋扎紧，1 X IO5Pa灭菌30min，将前述培养好的菌根菌菌丝体用手术刀切割成 5mmX 5mm的菌丝块，将2个接种块分别接入装有以上琼脂培养基的三角瓶中，接种好菌种 的琼脂培养基放入培养室中培养；每个液体培养基三角瓶本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种菌根食用菌菌种的分离培养方法，其特征在于：所述的菌根食用菌菌种的分离培养方法包括如下步骤：ａ、将目的菌根菌的孢子或子实体组织放入琼脂培养基中培养菌丝体；ｂ、将以上培养好的菌丝转入培养基中培养或将琼脂菌丝体接入液体培养基中培养；ｃ、将上述液体培养的菌丝体经匀质器匀质并再次接入液体培养基中培养，直到菌丝体的菌丝球直径达到０．２－１．５ｃｍ为止；ｄ、将以上培养好的菌丝体放在合适的培养条件下培养出菇。

【技术特征摘要】
1.一种菌根食用菌菌种的分离培养方法，其特征在于所述的菌根食用菌菌种的分离 培养方法包括如下步骤a、将目的菌根菌的孢子或子实体组织放入琼脂培养基中培养菌丝 体；b、将以上培养好的菌丝转入培养基中培养或将琼脂菌丝体接入液体培养基中培养；C、 将上述液体培养的菌丝体经勻质器勻质并再次接入液体培养基中培养，直到菌丝体的菌丝 球直径达到0. 2-1. 5cm为止；d、将以上培养好的菌丝体放在合适的培养条件下培养出菇。2.根据权利要求1所述的一种菌根食用菌菌种的分离培养方法，其特征在于所述 步骤a中的琼脂培养基组成如下=MgSo4 · 7Η20，0· 13 0. 2g ；KH2Po4,0. 4 0. 65g ；Cacl2, 0. 03 0. 07g ；酒...

【专利技术属性】
技术研发人员：付绍春，谭琦，尚晓冬，张美彦，
申请(专利权)人：上海市农业科学院，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]