本发明专利技术提供了一种含有血小板的组合物，该组合物是藉由制备一反应剂与血小板接触以保存血小板。该反应剂包含抗凝血剂、冷凝沉淀物以及凝血酶。本发明专利技术还提供一种长期保存血小板的方法，其步骤包括：（ａ）将抗凝血剂、冷凝沉淀物以及凝血酶加入生理食盐水中形成溶液；（ｂ）将含有血小板的介质加入步骤（ａ）的溶液并且静置形成含有血小板的溶液；以及（ｃ）冻干步骤（ｂ）所形成的含有血小板的溶液。更进一步，本发明专利技术提供了一种反应剂以保存无核细胞。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及以粉末状态长期保存血小板、红血球和其它无核细胞的新颖方法与反应剂。本专利技术还提供了一种含有血小板的组合物，是藉由血小板与所述反应剂接触所制得。
技术介绍
血小板为人体血液循环中最小的细胞，除了在血管渗漏时扮演封阻伤口的角色外，还具有释放许多生长因子(growth factors)以调控细胞生长与促进组织修复和再生的能力。从1960年代开始，科学家便致力于研发体外保存血小板的方法，目前，血小板的体外保存皆是在22℃下置放于含柠檬酸盐的稳定酸碱值(pH 6.8-7.2)血桨内，保存5天。进一步的试管外研究发现可在室温下将血小板浓厚液(platelet concentrates；PCs)保存于聚烯烃(polyolefin)材质容器内达5-7天。但这段时间在室温下保存可能导致细菌繁殖造成污染，美国食品及药物管理局(FDA)规定用于输血用途的血小板保存时间限于五天。然而，基于捐血的诸多规范，严格限制了捐献者的条件，使得捐血者减少，血液的来源也日渐短缺，故红血球(RBC)以及血小板的替代物的研发被视为刻不容缓的事情。许多失血过量的患者特别需要血小板输血，然而由于目前的保存技术易导致血小板功能性的降解，而长期保存具有活性的血小板的有效方式又尚未研发成功，所以血小板短缺的问题一直无法解决。一般而言，于体外保存过程中，首先需确保的是维持血小板功能与构造的完整，即，需要在保存的过程中维持血小板正常形状、避免活化分子释放以及在制备与稳定浓厚血小板血浆时避免血小板聚集。同时，理想的体外保存要件是必须保留血小板细胞膜上特定糖蛋白Ib/IX与IIb/IIIa的完整，以便能分别做为von Willebrand分子及纤维蛋白原(fibrinogen)的受器。更进一步来看，维持完整代谢路径，例如配体与受器结合后，释放α颗粒等讯息物质及生理反应的过程，也是必需的。其次，为了达成其还原后(reconstitution)仍保有正常凝血功能的目标，也必须维持正常完整的细胞膜、具功能性酶的活性以及聚集、释放和吞噬作用等反应。冻干血小板技术是一种可以满足上述要求的替代性保存方式。被冻干的血小板可以储存于室温达相当长的时间，且当需要使用时可以复水还原回原来的形式。故冻干技术不但可以延长血小板的储存时间，同时可以改善物流运送方式。此外，对于低温状态下血小板细胞膜行为的了解，也可以应用于延展血小板于冰箱温度的保存期限。利用相同的原理，如能于体外保存红血球，就能研究红血球细胞膜的修饰作用，例如ABH糖蛋白酶切割等，这样就可以进一步了解红血球的特性。有鉴于目前保存技术的缺点，确实需要一种有效且新颖的方法与反应剂，可以延展血小板、红血球与其它无核细胞保存的品质与时间。
技术实现思路
本专利技术的主要目的在于解决上述已知血小板保存方法的缺点，提供一种能够延展血小板、红血球与其它无核细胞保存的品质与时间的方法与反应剂。为达上述目的，本专利技术提供了一种含有血小板的组合物，其是将血小板与一反应剂混合接触后而形成。其中所述反应剂包含(a)5％-30％抗凝血剂；(b)0.0001％-3％冷凝沉淀物(cryoprecipitate)；以及(c)0.0001％-5％凝血酶。本专利技术还提供了一种保存血小板的方法，包含(a)将抗凝血剂、冷凝沉淀物以及凝血酶加入一溶剂(例如生理食盐水或其他适当溶剂)中摇晃之后静置形成溶液；(b)将含有血小板的介质加入步骤(a)的溶液并且静置形成含有血小板的溶液；以及(c)冻干所述步骤(b)所形成的含有血小板的溶液。本专利技术还提供了一种反应剂以保存无核细胞，所述反应剂包含(a)5％-30％抗凝血剂；(b)0.0001％-3％冷凝沉淀物；以及(c)0.0001％-5％凝血酶。本专利技术的反应剂中所包含的抗凝血剂、冷凝沉淀物以及凝血酶三者之间的含量关系也可以理解为体积比，即，抗凝血剂冷凝沉淀物凝血酶＝5-30∶0.0001-3∶0.0001-5。当包含溶剂时，各组分以该体积比加入溶剂(例如生理食盐水或是其它适当的溶剂等)中可用于保存无核细胞，以100体积份的溶剂为基准，此时各组分在溶剂中还应满足上述浓度要求，例如，100ml溶剂中添加5-30ml的抗凝血剂、0.0001-3ml的冷凝沉淀物以及0.0001-5ml的凝血酶，即本专利技术中所述的“5％-30％抗凝血剂”、“0.0001％-3％冷凝沉淀物”以及“0.0001％-5％凝血酶”。本专利技术另外还提供了一种医药组合物，包括含有血小板的组合物以及医药可接受的赋型剂。本专利技术利用纤维蛋白原以及凝血酶仿真凝血机制最后一个步骤，产生两阶段溶液，首先产生一种具有保存效果的反应剂，接着创造一种含有血小板组合物溶液，经稳定冷冻干燥后，形成血小板粉末，可以长期保存。本专利技术中，用以保存的“卡式”反应剂(cassette medium)是将血小板包覆于一保护性的胶体薄膜之中，该胶体薄膜是由低浓度的纤维蛋白原与低浓度的凝血酶加入含有抗凝血剂的生理食盐水后所形成的。本专利技术所揭露的方法以及反应剂可以将血小板保存相当长的时间，甚至达两年，仍保有血小板应有的功能与活性。因此本专利技术所提出的无核细胞冻干技术，将是一种临床应用上的有效替代方式，可舒缓血液供给的需求。附图说明图1是显示本专利技术的保存血小板方法的步骤流程图。图2是显示还原以后血小板的扫瞄式电子显微镜照片。图3是显示还原以后血小板的扫瞄式电子显微镜照片，为图2中单一血小板的高倍放大图。具体实施例方式本专利技术提供了一种含有血小板的组合物，是由血小板接触反应剂后所产生，该反应剂包含(a)5％-30％抗凝血剂；(b)0.0001％-3％冷凝沉淀物；以及(c)0.0001％-5％凝血酶。所述抗凝血剂包括，但不限于，抗凝血柠檬酸葡萄糖(anticoagulantcitrate dextrose；ACD-A)。进一步，ACD-A的优选浓度为5％至30％，最优选浓度为10％至12％。所述抗凝血剂包括，但不限于，柠檬酸磷酸右旋葡萄糖(citratephosphate dextrose；CPD)。进一步，CPD的优选浓度范围为5％至30％，最优选为10％至12％。所述冷凝沉淀物的浓度优选为0.001％至3％。所述凝血酶的浓度优选为0.001％-5％。所述组合物可以进一步包含溶剂，例如但不限于常规的生理食盐水。本专利技术的组合物可以利用冻干技术制造成为粉末，或利用熟知本领域的人员所知道的其它方法制造。本专利技术另提供了一种保存血小板的方法。请参见图1所示，该方法包含下列步骤(a)将抗凝血剂、冷凝沉淀物以及凝血酶加入生理食盐水中摇晃之后静置形成溶液；(b)将含有血小板的介质加入步骤(a)的溶液并且静置形成含有血小板的溶液；以及(c)冻干步骤(b)所形成的含有血小板溶液。所述步骤(a)中的抗凝血剂包括，但不限于，抗凝血柠檬酸葡萄糖(anticoagulant citrate dextrose；ACD-A)。进一步，抗凝血柠檬酸葡萄糖的浓度优选为5-30％，最优选为10％-12％。所述步骤(a)中的抗凝血剂包括，但不限于，柠檬酸磷酸右旋葡萄糖(citrate phosphate dextrose；CPD)。进一步，所述柠檬酸磷酸右旋葡萄糖的浓度优选为5-30％，最优选为10％-12％。更进一步，所述步骤(a)中的冷凝沉本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种含有血小板的组合物，其是将血小板与一用以保存血小板的反应剂接触而制备得到，所述反应剂包含：（ａ）５％－３０％抗凝血剂；（ｂ）０．０００１％－３％冷凝沉淀物；以及（ｃ）０．０００１％－５％凝血酶。
【技术特征摘要】
US 2005-6-22 11/157,8381.一种含有血小板的组合物，其是将血小板与一用以保存血小板的反应剂接触而制备得到，所述反应剂包含(a)5％-30％抗凝血剂；(b)0.0001％-3％冷凝沉淀物；以及(c)0.0001％-5％凝血酶。2.如权利要求1所述的组合物，其中所述抗凝血剂为抗凝血柠檬酸葡萄糖。3.如权利要求2所述的组合物，其中所述抗凝血柠檬酸葡萄糖的浓度为10％-12％。4.如权利要求1所述的组合物，其中所述抗凝血剂为柠檬酸磷酸右旋葡萄糖。5.如权利要求4所述的组合物，其中所述柠檬酸磷酸右旋葡萄糖的浓度为10％-12％。6.如权利要求1所述的组合物，其中所述冷凝沉淀物的浓度为0.001％-3％。7.如权利要求1所述的组合物，其中所述凝血酶的浓度为0.001％-5％。8.如权利要求1所述的组合物，该组合物进一步包含溶剂。9.如权利要求8所述的组合物，其中所述溶剂为生理食盐水。10.如权利要求1所述的组合物，该组合物进一步以冻干技术制备。11.一种保存血小板的方法，包含(a)将抗凝血剂、冷凝沉淀物以及凝血酶加入生理食盐水中摇晃之后静置形成溶液；(b)将含有血小板的介质加入步骤(a)的溶液并且静置形成含有血小板的溶液；以及(c)冻干所述步骤(b)所形成的含有血小板的溶液。12.如权利要求11所述的方法，其中所述步骤(a)中的抗凝血剂为抗凝血柠檬酸葡萄糖。13.如权利要求12所述的方法，其中所述抗凝血柠檬酸葡萄糖的浓度为5-30％。14.如权利要求13所述的方法，其中所述抗凝血柠檬酸葡萄糖的浓度为10％-12％。15.如权利要求11所述的方法，其中所述步骤(a)中的抗凝血剂为柠檬酸磷酸右旋葡萄糖。16.如权利要求15所述的方法，其中所述柠檬酸磷酸右旋葡萄糖的浓度为5-30％。...
【专利技术属性】
技术研发人员：苏正尧，林澄治，
申请(专利权)人：苏正尧，林澄治，
类型：发明
国别省市：71[中国|台湾]
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