甘露聚糖－结合型凝集素（ＭＢＬ）在免疫受损个体的治疗中的新意义制造技术

本发明专利技术涉及含有至少一种甘露聚糖结合型凝集素（ＭＢＬ）亚单位，或至少一种甘露聚糖结合型凝集素（ＭＢＬ）寡聚体（其包含至少一种甘露聚糖结合型凝集素（ＭＢＬ）亚单位）的组合物在制备用于预防和／或治疗感染的药物中的应用。尤其本发明专利技术涉及对免疫受损个体；和／或对由于医疗处理所致的免疫受损易感个体中的感染进行预防和／治疗。本发明专利技术尤其适于预防和／或治疗中性粒细胞减少症患者和／或接受或将要接受化疗或类似治疗的患者的感染。所述个体可在不考虑他们的血清ＭＢＬ水平的前提下进行治疗，但已显示，尤其在血清ＭＢＬ水平为５０ｎｇ／ｍｌ－５００ｎｇ／ｍｌ的患者体内进行的预防和／或治疗较有利。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及甘露聚糖结合型凝集素(MBL)的亚单位和寡聚物在免疫受损个体的预防和/或治愈性治疗中的应用。
技术介绍
已知人体中有多组凝集素，即碳水化合物结合蛋白。其中一组是C型凝集素。C型凝集素包含钙依赖性碳水化合物识别结构域(C-型CRD)1。甘露聚糖结合型凝集素(MBL)(甘露糖结合型凝集素的同义词)、甘露聚糖结合蛋白或甘露糖结合蛋白(MBP)属于C型凝集素中称为胶原凝集素(collectin)的亚组，因为这些可溶性蛋白由能提呈附着于胶原性质的茎上的三个CRD的亚单位组成2。MBL与广泛多种微生物所提呈的碳水化合物相互作用，越来越多的证据表明，其在先天性免疫防御中起重要作用3。MBL当与碳水化合物结合后能活化补体系统。补体系统可通过三种不同途径来激活经典途径、旁路途径、以及新描述的第三途径，甘露聚糖结合型凝集素(MBL)途径，该途径因MBL与微生物所提呈的碳水化合物的结合而启动。旁路途径的成分和MBL途径的成分都属于先天性免疫防御，也称为天然或非克隆化免疫防御的一部分，而经典途径则涉及与具有特异性免疫防御作用的抗体的合作4。人MBL蛋白由18条相同的32kDa多肽链组成27，每条多肽链包含一个只有21个氨基酸的N-末端短片段，该片段包括三个半胱氨酸残基，紧接着是胶原蛋白基元Gly-X-Y的7个重复单位，其被一个Gln残基打断，后随另外12个Gly-X-Y重复。一个含有34个残基的“颈部区”将93个氨基酸的C末端钙依赖性凝集素结构域与该分子的胶原部分相连28。三条多肽链的胶原区组合成一个经二硫键稳定地共价连接的亚单位。各个亚单位之间通过二硫键以及通过非共价相互作用而相连27。但这些二硫键的位置尚未完全阐明。MBL的非还原SDS-PAGE显示出表观分子量(m.w.)大于200kDa的带，它们可能是3、4、5和甚至6个亚单位聚集成的大块。天然人MBL蛋白中亚单位的真实数目尚有争论。Lipscombe等(1995)利用超速离心获得的数据提示，25％的人血清MBL由2-3个亚单位组成，仅有很少一部分达到6个亚单位的大小。离子交换层析所得级分经SDS-PAGE分析、Western印迹、然后利用化学发光的鲁米诺进行密度测定而获得相对定量，结果显示，大多数共价连接的MBL亚单位链由三聚体组成，但仅有五聚体或六聚体复合物能激活补体。相反，凝胶渗透层析(GPC)显示，MBL的大小与C1复合物相当。可在允许研究MBL分子的形成中蛋白质-蛋白质弱相互作用的重要性的条件下进行GPC。GPC级分中MBL的含量可通过标准的MBL分析技术测定。MBL由肝细胞在肝脏中合成并分泌至血液。它结合细菌、酵母、寄生性原虫以及病毒表面的碳水化合物结构，可通过活化最终的裂解性补体成分或通过促进吞噬作用(调理作用)而杀死微生物，因此具有抗细菌活性。MBL的sertiform结构与C1q(经典途径中第一个成分的免疫球蛋白结合亚成分)的花束样结构十分相似3。C1q与两种丝氨酸蛋白酶C1r和C1s结合，形成C1复合物。类似地，MBL与两种丝氨酸蛋白酶MASP-15和MASP-26，以及另一种称为Map 19的蛋白7结合。MASP-1和MASP-2具有与C1r和C1s相同的分子结构6。MBL与碳水化合物的结合诱导MASP-1和MASP-2的活化，然后MASP-2裂解C4和C2产生C3转化酶C4b2b。有报道说，MASP-1可直接活化C3。目前对MBL/MASP复合物的化学计量以及活化顺序一无所知。在其它动物如啮齿类、牛(cattle)、小鸡和猴子中也鉴定出了MBL。人血清中的MBL浓度主要通过基因测定，但据报道在急性期反应期间升高最多三倍8。三种导致结构改变的突变以及两种在启动子区域中的突变均与MBL缺陷相关9。MBL缺陷与对各种感染的易感性相关。对五例成人的罕见重症感染的检查显示，其中三例为MBL结构突变的纯合子，两例为杂合子10。由丹麦国家医院(Danish National Hospital)对229例儿童进行的非HIV相关免疫缺陷的调查显示，MBL结构性突变的等位基因中出现纯合子的频率比对照组所见高10倍以上11。伦敦St Mary’s医院的617位相继住院的儿童的异型分析(allotyping)显示，感染儿童群与未感染儿童群相比，突变的同种异型纯合子和杂合子的出现频率显著较高12。有较宽范围的寡糖可与MBL结合。由于目标糖通常并不以高密度暴露于哺乳动物细胞表面，因此MBL通常不识别自身决定簇，但特别适于与提呈重复的糖类决定簇的微生物细胞表面发生相互作用。在体外，酵母(白色念珠菌(Candida albicans)和新形隐球菌(Cryptococcus neoformans))、病毒(HIV-1，HIV-2，HSV-2，及各类甲型流感病毒(influenza A))和多种细菌已显示能被MBL识别。在一些细菌的例子中，与MBL的结合因荚膜的存在而受损13。但是，即使是有荚膜的细菌(脑膜炎奈瑟氏菌(Neisseria meningitisdis))也显示与MBL的强有力结合14。感染MBL缺陷型个体的微生物可来自多种不同的细菌、病毒和真菌物种12，15-17。缺陷还与习惯性流产有关18。事实上，MBL可作为针对绝大多数细菌的广谱防御分子，并因此被认为是如此多的细菌不能致病的一个原因。虽然越来越多的信息提请人们注意MBL的保护作用，但也有发现提示，在MBL完善的个体中比在MBL缺陷的个体中，某些微生物，特别是胞内病原体的感染出现的频率更高19，20。这与一项动物实验的结果一致，在该实验中，小鼠肝脏在注射人的MBL之前HSV-2的数量增加21。已能从供血者血浆中获得临床级MBL，它们可安全用于输注22。也能产生具有与天然MBL相似的结构和活性的重组MBL(专利申请PA 199900668/C5/KH)。专利技术简述本专利技术涉及MBL在预防和/或治疗感染中的应用，所述MBL可从天然来源纯化，或从经重组技术产生的，或通过任何其它适当的MBL产生型细胞产生的物质中纯化。所述情况可能与一种治疗性或医疗性处理，如细胞毒性治疗有关。MBL可在开始所述处理之前或之后给与，并可持续任何被认为适当的时间。本专利技术还涉及对具有正常MBL水平的个体进行处理，因为这些个体很可能-在任何细胞毒性处理之前-因MBL给药而受益。相应地，本专利技术一个方面涉及对免疫受损个体的感染进行的治疗和/或预防，或涉及对由于接受了已知与免疫受损情况的发生有关的治疗而很可能出现这类病症的个体进行的治疗。所述治疗的实例如化疗和放疗如X-线处理。化疗和放疗被作为数种癌症的治疗的一部分，它们旨在减缓疾病的进展或通过治愈性治疗而逆转这种进展。化疗和放疗都是损害免疫的，因为免疫系统的细胞被杀死，因而导致一种免疫抑制状态，其尤以嗜中性粒细胞缺少症为特征。据信MBL主要通过其调理活性(使微生物做好被吞噬的准备)来发挥其抗微生物活性。该活性依赖于MBL结合至微生物表面后的补体活化以及C4b和C3b在该微生物表面的沉积。MBL还可促进直接由补体介导的对微生物的杀伤作用，其通过激活补体的最终裂解途径并将膜攻击复合物(MAC)插入细胞膜中而实现。该机制被认为重要性不大。多种微生物，如肺炎链球菌(Streptococcus本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种组合物在制备预防和／或治疗下述个体之感染所用药物中的应用，所述组合物含有至少一种甘露聚糖结合型凝集素（ＭＢＬ）亚单位，或至少一种甘露聚糖结合型凝集素（ＭＢＬ）寡聚体，该寡聚体含有至少一种甘露聚糖结合型凝集素（ＭＢＬ）亚单位，所述个体分为：ａ）有免疫受损状态的个体；和／或ｂ）具有因医疗处理而获得免疫受损状态的危险的个体。

【技术特征摘要】
DK 1999-5-14 199900668;DK 1999-10-20 1999015081.一种组合物在制备预防和/或治疗下述个体之感染所用药物中的应用，所述组合物含有至少一种甘露聚糖结合型凝集素(MBL)亚单位，或至少一种甘露聚糖结合型凝集素(MBL)寡聚体，该寡聚体含有至少一种甘露聚糖结合型凝集素(MBL)亚单位，所述个体分为a)有免疫受损状态的个体；和/或b)具有因医疗处理而获得免疫受损状态的危险的个体。2.权利要求1的应用，其中所述组合物包含至少一种甘露聚糖结合型凝集素(MBL)寡聚体，该寡聚体包含至少一种甘露聚糖结合型凝集素(MBL)亚单位。3.权利要求2的应用，其中所述寡聚体优选选自四聚体，五聚体和/或六聚体。4.权利要求1的应用，其中所述有免疫受损状态的个体的血清MBL水平高于50ng/ml血清。5.权利要求1-4中任一项的应用，其中所述血清MBL水平是功能性血清MBL水平。6.权利要求1的应用，其中所述免疫受损状态是嗜中性粒细胞减少症。7.权利要求1的应用，其中所述免疫受损状态是自身免疫性嗜中性粒细胞减少症。8.权利要求1的应用，其中所述感染是微生物感染。9.权利要求8的应用，其中所述微生物为真菌。10.权利要求8的应用，其中所述微生物为酵母。11.权利要求8的应用，其中所述微生物为细菌。12.权利要求11的应用，其中所述细菌能抵抗至少一种抗生素。13.权利要求11的应用，其中所述细菌为多重耐药细菌。14.权利要求11的应用，其中所述细菌为致病性细菌。15.权利要求8的应用，其中所述感染为病毒感染。16.权利要求15的应用，其中所述病毒为逆转录病毒。17.权利要求16的应用，其中所述逆转录病毒为人类免疫缺陷病毒。18.权利要求1作为试剂盒的一部分的应用，所述试剂盒进一步包括一种能使微生物减毒或被消灭的抗微生物药物。19.权利要求18的作为试剂盒一部分的应用，所述试剂盒进一步包括一种能使细菌减毒或被消灭的抗细菌药物。20.权利要求1的应用，其中所述MBL亚单位或MBL寡聚体在天然宿主生物中产生。21.权利要求20的应用，其中所述天然宿主生物为能天然表达所述MBL亚单位或MBL寡聚体的人类细胞。22.权利要求1的应用，其中所述MBL亚单位或MBL寡聚体由并非天然表达MBL多肽的宿主生物产生。23.权利要求1的应用，其中所述MBL亚单位或MBL寡聚体通过包含至少一步体外重组DNA步骤的方法产生。24.权利要求22或23的应用，其中所述MBL亚单位或MBL寡聚体的产...

【专利技术属性】
技术研发人员：斯蒂芬蒂尔，詹斯C詹斯尼厄斯，
申请(专利权)人：斯蒂芬蒂尔，詹斯C詹斯尼厄斯，
类型：发明
国别省市：DK[丹麦]