用于改善动脉粥样硬化的口服给药的肽制造技术

本发明专利技术提供了改善动脉粥样硬化的一种或多种症状的新型肽（见图２３）。该肽包含至少一个Ａ型两亲性螺旋和至少一个Ｄ－氨基酸。该肽是高度稳定的且容易通过口服途径给药。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
相关申请的交叉参考本申请是2001年6月29日申请的USSN 09/896,841的部分继续申请，而后者是2000年8月24日申请的USSN 09/645,454的部分继续申请，这两者以其整体作为参考文献在本文中引用用于所有目的。对于由联邦政府赞助的研究和开发所做出的专利技术的权利声明本工作由美国公共卫生部和国家心，肺和血液研究所拨款HL30568和HL34343资助。美国政府拥有明确的对本专利技术的权利。本专利技术涉及动脉粥样硬化领域。具体地说，本专利技术涉及可口服用药且改善动脉粥样硬化的一种或多种症状的一类肽的鉴定。
技术介绍
心血管疾病特别是在美国和西欧国家中是发病率和死亡率的主要原因。在心血管疾病的形成中涉及的一些病原性因素包括对该疾病的遗传诱因，性别，诸如吸烟和饮食的生活方式因素，年龄，高血压，和高脂血症，包括高胆固醇血症。其中一些因素，特别是高脂血症和高胆固醇血症(血液胆固醇浓度高)提供了与动脉粥样硬化相关的重要风险因素。胆固醇在血液中以游离状态和脂蛋白颗粒内的酯化胆固醇存在，通常称为乳糜微粒，极低密度脂蛋白(VLDL)，低密度脂蛋白(LDL)，和高密度脂蛋白(HDL)。血液中的总胆固醇浓度受下列因素影响(1)从消化道吸收的胆固醇，(2)从诸如糖类，蛋白质，脂肪和乙醇的饮食成分合成的胆固醇，和(3)由组织，特别是肝脏从血液中除去胆固醇并随后将胆固醇转变成胆汁酸，类固醇激素，和胆汁胆固醇。血液胆固醇浓度的维持受遗传和环境因素影响。遗传因素包括胆固醇生物合成中的限速酶浓度，肝脏中低密度脂蛋白的受体浓度，胆固醇胆汁酸转化的限速酶浓度，脂蛋白的合成和分泌速率及人的性别。影响人类血液胆固醇浓度的环境因素包括饮食结构，吸烟影响，身体活动，和各种药物的使用。饮食变量包括脂肪的含量和类型(饱和的和多不饱和脂肪酸)，胆固醇的含量，纤维的含量和类型，也许还有诸如维生素C和D的维生素和诸如钙的无机物的含量。流行病学研究表明高密度脂蛋白(HDL)和载脂蛋白(apo)A-I水平与动脉粥样硬化结果的发生反相关(Wilson等(1988)Arteriosclerosis 8737-741)。给喂养致动脉粥样化食物的兔子注射HDL显示出抑制动脉粥样硬化病灶形成(Badimon等(1990)J.Clin.Invest.851234-1241)。人apo A-I由于其抗致动脉粥样化特性而成为了被深入研究的主题。包括apo A-I的可交换的载脂蛋白具有脂缔合结构域(Brouillette和Anantharamaiah(1995)Biochim.Biophys.Acta 1256103-129；Segrest等(1974)FEBS Lett.38247-253)。假定Apo A-I具有8个串联重复的22mer序列，其中大多数具有形成A型两亲性螺旋结构的潜力(Segrest等(1974)FEBSLett.38247-253)。A型两亲性螺旋的特征包括具有在极性-非极性界面的带正电荷的残基和在极性面中央带负电荷的残基(Segrest等(1974)FEBS Lett.38247-253；Segrest等(1990)ProteinsStructure，Function，and Genetics 8103-117)。已表明Apo A-I与磷脂强烈缔合形成复合物并启动富含胆固醇的细胞中的胆固醇流出。apo A-I血清水平的传递和维持有效减轻动脉粥样硬化的一种或多种症状至今仍证明是难以捉摸的。
技术实现思路
本专利技术提供了新的肽，其施用可减轻动脉粥样硬化的一种或多种症状。具体地说，本专利技术的发现是包含一种A型两亲性螺旋的肽当用“D”氨基酸残基制成和/或具有保护的氨基和羧基末端时可通过口服施用给生物体，容易被吸收并传递到血清，且有效减轻动脉粥样硬化的一种或多种症状。因此，在一个实施方案中，本专利技术提供了改善动脉粥样硬化症状的肽，其中该肽的长度范围从大约10个到大约30个氨基酸，包含至少一个A型两亲性螺旋，包含至少一个“D”氨基酸残基，防止磷脂被氧化剂氧化，且不是D-18A肽(例如，具有全部D型氨基酸残基的D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-A-F(SEQ ID NO1))。在特别优选的实施方案中，该肽还包含偶联到氨基和/或羧基末端的保护基团。优选的保护基团包括，但不限于乙酰基，酰胺，3到20个碳原子的烷基，Fmoc，t-boc，9-芴乙酰基，1-芴羧基，9-芴羧基，9-芴酮-1-羧基，苄氧基羰基，呫吨基(Xan)，三苯甲基(Trt)，4-甲基三苯甲基(Mtt)，4-甲氧基三苯甲基(Mmt)，4-甲氧基-2，3，6-三甲基-苯磺酰(Mtr)，1，3，5-三甲基苯-2-磺酰基(Mts)，4，4二甲氧基二苯甲基(Mbh)，甲苯磺酰基(Tos)，2，2，5，7，8-五甲基苯并二氢吡喃-6-磺酰基(Pmc)，4-甲苄基(MeBzl)，4-甲氧基苄基(MeOBzl)，苄氧基(BzlO)，苄基(Bzl)，苯甲酰基(Bz)，3-硝基-2-吡啶磺酰基(3-nitro-2-pyridinesulphenyl，Npys)，1-(4，4-二甲基(dimentyl)-2，6-二偶氮亚环己基)乙基(Dde)，2，6-二氯苄基(2，6-DiCl-Bzl)，2-氯苄氧基羰基(2-Cl-Z)，2-溴苄氧基羰基(2-Br-Z)，苄氧基甲基(Bom)，t-丁氧基羰基(Boc)，环己氧基(cHxO)，t-丁氧基甲基(Bum)，t-丁氧基(tBuO)，t-丁基(tBu)，乙酰基(Ac)，和三氟乙酰基(TFA)。在某些特别优选的实施方案中，该肽还包含与氨基末端偶联的第一保护基团和与羧基末端偶联的第二保护基团。特别优选的肽密切模拟人或小鼠apo A-I的A型两亲性螺旋。在某些实施方案中，优选的肽包含与由编码人或小鼠apo A-I的A型两亲性螺旋的外显子编码的多肽有大于大约50％的氨基酸序列同一性。在某些优选的实施方案中，至少大约10％，优选至少20％，更优选至少大约30％，也更优选至少大约50％，甚至更优选至少大约75％，且最优选至少90％和甚至100％的对映体氨基酸是“D”氨基酸。该肽可与可药用赋形剂(例如，适合于给哺乳动物口服用药的赋形剂)结合。在某些特别优选的实施方案中，该肽包含一个或多个下列氨基酸序列D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-A-F-(SEQ ID NO2)，D-W-F-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-A-F-(SEQ ID NO3)，D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-A-F-(SEQ ID NO4)，D-W-F-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-A-F-(SEQ ID NO5)，D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-F-E-K-F-K-E-F-F-(SEQ ID NO6)，D-W-L-K-A-F-Y-D-K-F-F-E-K-F-K-E-F-F-(SEQ ID NO7)，D-W-F-K-A-F-Y-D-K-F-F-E-K-F-K-E-F-F-(SEQ ID NO8)， D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-F-F-(SEQ ID NO9本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种适合于口服给药改善动脉粥样硬化的症状的组合物，其中所述组合物包含下述肽，它是人ａｐｏＡ－Ｉ肽或人ａｐｏＡ－Ｉ肽的类似物，其中所述的肽具有连接到氨基末端的第一保护基团和连接到羧基末端的第二保护基团，且其中所述的肽包含多个Ｄ氨基酸残基。

【技术特征摘要】
US 2000-8-24 09/645,4541.一种适合于口服给药改善动脉粥样硬化的症状的组合物，其中所述组合物包含下述肽，它是人apo A-I肽或人apo A-I肽的类似物，其中所述的肽具有连接到氨基末端的第一保护基团和连接到羧基末端的第二保护基团，且其中所述的肽包含多个D氨基酸残基。2.权利要求1的组合物，其中所述的第一保护基团和所述的第二保护基团独立地选自乙酰基，酰胺，3到20个碳原子的烷基，Fmoc，t-boc，9-芴乙酰基，1-芴羧基，9-芴羧基，9-芴酮-1-羧基，苄氧基羰基，呫吨基(Xan)，三苯甲基(Trt)，4-甲基三苯甲基(Mtt)，4-甲氧基三苯甲基(Mmt)，4-甲氧基-2，3，6-三甲基-苯磺酰基(Mtr)，1，3，5-三甲基苯-2-磺酰基(Mts)，4，4-二甲氧基二苯甲基(Mbh)，甲苯磺酰基(Tos)，2，2，5，7，8-五甲基苯并二氢吡喃-6-磺酰基(Pmc)，4-甲苄基(MeBzl)，4-甲氧基苄基(MeOBzl)，苄氧基(BzlO)，苄基(Bzl)，苯甲酰基(Bz)，3-硝基-2-吡啶磺酰基(Npys...

【专利技术属性】
技术研发人员：艾伦M福格尔曼，加塔达哈里M阿南萨拉梅亚，默罕穆德纳瓦布，
申请(专利权)人：加利福尼亚大学董事会，
类型：发明
国别省市：US[美国]