沙眼衣原体E型DNA疫苗及制备方法与用途技术

本发明专利技术公开了一种沙眼衣原体Ｅ型ＤＮＡ疫苗及制备方法与用途。本发明专利技术应用分子克隆等基因工程技术，从沙眼衣原体Ｅ型染色体基因中ＰＣＲ克隆出主要外膜蛋白基因（ｏｍｐ１基因），与真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３．１（＋）定向连接构建成ＤＮＡ疫苗。通过动物实验证实，构建的沙眼衣原体Ｅ型ＤＮＡ疫苗免疫小鼠能够诱导小鼠产生一定的沙眼衣原体特异性细胞免疫和体液免疫，其中细胞免疫水平更显著，以Ｔｈ１反应占优势，对沙眼衣原体Ｅ型生殖道的攻击具有保护作用。该疫苗有望改善沙眼衣原体泌尿生殖道感染发病率高、迁延难治、易于复发和耗资巨大的现状。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物医药
，具体地说是涉及一种沙眼衣原体E型DNA疫苗及其制备方法与用途。
技术介绍
沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis，C.t)曾引起世界范围沙眼的广泛流行，造成严重危害，迄今仍是一些发展中国家致盲的首要原因。80年代中期，又成为性传播感染的主要病原菌，发病率居性传播感染的首位。近年来由沙眼衣原体引起的性传播感染的发病率正迅速上升。更为严重的是C.t感染常常症状轻微甚至没有症状，不能引起人们的足够注意，不能及时地被诊断和治疗，持续存在数月甚至数年，最终引起盆腔炎、不孕症、异位妊娠、附睾炎等一系列比较严重的并发症和后遗症，还可以造成垂直传播，引起新生儿围产期感染。此外耐药C.t株的报道不断出现，相当一部分C.t感染对治疗不敏感，治疗后容易复发，同时还存在着相当高的C.t再感染率，因此预防C.t感染尤为重要，控制C.t传播和流行的根本措施就在于预防。人们一直在孜孜不倦的寻求一种有效的疫苗希望能够从根本上预防和控制C.t的感染。C.t疫苗分为蛋白或多肽疫苗和核酸疫苗两类。前一种疫苗曾为全菌疫苗、亚单位疫苗和合成的多肽疫苗，由于这类疫苗所激发的机体特异性免疫反应较弱而短暂，因而不足以预防C.t的再感染；近年来新兴的核酸疫苗所表现出来的其他类疫苗不可比拟的优越性为C.t的预防开拓了一个最有希望的领域。C.t种共有三个生物变种，分别是沙眼生物变种、LGV生物变种和鼠生物变种。沙眼生物变种中的A～C型引起沙眼，D～K型引起泌尿生殖道感染；性病性淋巴肉芽肿生物变种的L1～L3型导致性病性淋巴肉芽肿；鼠生物变种中的鼠肺炎株主要引起鼠的感染，不侵袭人类。C.t DNA疫苗的研究已有十余年时间，绝大多数是选择C.t种中的鼠肺炎株(MoPn)去感染小鼠呼吸道的动物模型来研究DNA疫苗的免疫效果，而引起人类非淋菌性尿道炎的C.t型的DNA疫苗研究只见到一篇报道。该文章构建了C.t D型DNA疫苗，免疫小鼠后通过血清抗体检测、脾淋巴细胞增殖试验和脾细胞培养上清液中γ-干扰素的水平来评价DNA疫苗的免疫效果，结果证实能刺激机体产生细胞免疫和体液免疫。但很多资料显示，泌尿生殖道感染的C.t以E型最多，即E型是感染的优势型，由于C.t感染产生的保护作用是“型特异性”的，因此C.t D型的DNA疫苗对C.t E型感染的保护作用不强。
技术实现思路
本专利技术的目的旨在为克服现有技术的缺陷，选择C.t E型这个优势型作为研究对象，提供一种沙眼衣原体E型DNA疫苗及其制备方法与用途。本专利技术通过实验研究证实，所构建的C.t E型DNA疫苗切实的免疫效果和保护作用，为C.t DNA疫苗的深入研究和应用奠定基础，具有重要的科研和临床价值。为实现本专利技术的目的，本专利技术公开了一种沙眼衣原体E型DNA疫苗，其特征在于包括沙眼衣原体E型ompl基因和真核表达载体，ompl基因编码产物是沙眼衣原体主要外膜蛋白，所说的ompl基因核苷酸序列如SEQ ID NO1所示，所说的真核表达载体为pcDNA3.1(+)。本专利技术还公开了一种制备所述沙眼衣原体E型DNA疫苗的方法，其特征在于从沙眼衣原体E型BOUR株中提取染色体DNA，PCR扩增出编码主要外膜蛋白的ompl基因，克隆到pcDNA3.1(+)载体质粒中构建成沙眼衣原体DNA疫苗。其目的基因的5′端从BamHI位点插入，目的基因的3′端从NotI位点插入。本专利技术所述沙眼衣原体E型DNA疫苗，用于制备预防和治疗泌尿生殖道沙眼衣原体感染性疾病的疫苗。本专利技术基于现有技术的研究基础，选择C.t E型这个优势型作为研究对象，构建沙眼衣原体E型DNA疫苗，通过一系列动物实验证实该DNA疫苗能够刺激动物机体产生有效的体液免疫和细胞免疫，对沙眼衣原体E型的生殖道感染具有保护作用。通过肌肉注射的方式免疫，能够有效激发体液免疫和细胞免疫，具有免疫过程简单、接种安全、效果明显、可重复性强等优点。附图说明图1C.t E型DNA疫苗结构模式2C.t E型完整ompl基因的扩增；图3ompl基因的双酶切；图4pcDNA3.1(+)质粒的双酶切；图5ompl-pcDNA3.1(+)重组质粒双酶切电泳鉴定；图6ompl-pcDNA3.1(+)重组质粒PCR扩增鉴定。具体实施方式本专利技术从沙眼衣原体E型BOUR株染色体基因中克隆出编码主要外膜蛋白的ompl基因，并将它定向克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)中构建出DNA疫苗插入的外源沙眼衣原体E型ompl基因结构描述如下(1)序列特征长度1182bp类型核酸链数双链几何结构线性(2)分子类型DNA(3)沙眼衣原体E型BOUR株(Trachoma type E strain BOUR)，购自美国模式菌种收集中心(ATCC)，商品编号VR-348BTM。(4)ompl基因的核苷酸序列描述如下atgaaaaaac tcttgaaatc ggtattagta tttgccgctt tgagttctgc ttcctccttg60caagctctgc ctgtggggaa tcctgctgaa ccaagcctta tgatcgacgg aattctgtgg120gaaggtttcg gcggagatcc ttgcgatcct tgcaccactt ggtgtgacgc tatcagcatg180cgtatgggtt actatggtga ctttgttttc gaccgtgttt tgaaaacaga tgtgaataaa240gaattccaaa tgggtgacaa gcctacaagt actacaggca atgctacagc tccaaccact300cttacagcaa gagagaatcc tgcttacggc cgacatatgc aggatgctga gatgtttaca360aatgccgctt gcatggcatt gaatatttgg gatcgctttg atgtattctg tacactagga420gcctctagcg gataccttaa aggaaactct gcttctttca atttagttgg attgtttgga480gataatgaaa atcaaagcac ggtcaaaacg aattctgtac caaatatgag cttagatcaa540tctgttgttg aactttacac agatactgcc ttctcttgga gcgtgggcgc tcgagcagct600ttgtgggagt gcggatgtgc gactttaggg gcttctttcc aatacgctca atctaaacct660aaagtcgaag aattaaacgt tctctgtaac gcagctgagt ttactatcaa taagcctaaa720ggatatgtag ggcaagaatt ccctcttgca ctcatagcag gaactgatgc agcgacgggc780actaaagatg cctctattga ttaccatgag tggcaagcaa gtttagctct ctcttacaga840ttgaatatgt tcactcccta cattggagtt aaatggtctc gagc本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种沙眼衣原体Ｅ型ＤＮＡ疫苗，其特征在于包括沙眼衣原体Ｅ型ｏｍｐ１基因和真核表达载体，ｏｍｐ１基因编码产物是沙眼衣原体主要外膜蛋白。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘全忠，齐蔓莉，王敬，陈锦英，
申请(专利权)人：天津医科大学总医院，
类型：发明
国别省市：12[中国|天津]