丹酚酸B盐及丹参总酚酸医学用途制造技术

体内试验采用单侧输尿管结扎造成大鼠肾纤维化模型，观察灌胃给予ＤＳ的防治作用，ＳＤ大鼠随机分为４组：假手术组，模型组，ＤＳ组和阳性对照氯沙坦组，造模后连续给药７天后，大鼠处死取出肾脏，做石蜡切片，并用ＨＥ染色，光镜下观察，结果表明ＤＳ组和阳性对照组肾脏形态与模型组无明显区别，但光镜下ＤＳ组和阳性对照氯沙坦组肾小管上皮细胞肿胀程度减轻，仅少数肾小管上皮细胞发生空泡性变性，肾间质病变呈片状分布，范围＜２５％，与模型组比较，差异显著（Ｐ＜０．０５）体外用２９３细胞检测ＤＳ对人胚肾成纤维细胞增殖的影响，结果表明，当ＤＳ浓度为５００ｍｇ／ｍｌ时，明显抑制血管紧张素Ⅱ引起的２９３细胞的增殖，此结果与体内试验的组织病理学检查所观察到的ＤＳ对大鼠肾纤维化的抑制作用相一致。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及丹参中提取有效成份，更具体指丹酚酸B盐及丹参总酚酸的抑制肾纤维化的用途。
技术介绍
丹酚酸B及它的镁盐理化数据为分子式C36H28MgO16；分子量740.9154；D20+126.7(C0.73，H2O)；Uvλmax210(ε1.92×104)，286(ε1.35×104)，306(ε1.20×104)；IR3400；1700nm；1608，1519；1363；1288cm-1均有吸收峰通过MS NMR.U.V IR证明其结构为 1、丹酚酸B鎂盐(MTB)在高血脂动物模型主动脉条上，通过肉眼，光镜，电镜观察到有明显的抗AS作用，肉眼可见明显减少黄色斑块隆起，粥样硬化程度分级明显降低，光镜观察到内膜下泡沫细胞层数较少，平滑肌细胞增殖较轻，电镜下示内皮细胞改变较轻，泡沫细胞较少，收缩型平滑肌细胞所占比例较大，干滑肌细胞内内质网，高尔基体，线粒体较少，究肌丝含量较多，细胞分化程度较好；2、MTB可调节血脂，降低TC，TG，LDL，LP(a)，升高HDL；抗脂质过氧化，提高SOD活性；3、MTB可提高NO，减低内皮素血浆水平，保护内皮细胞，并通过抑制动脉粥样硬化组织Bfgf(碱性成纤维细胞生长因子)在动脉壁的表达，调控平滑肌细胞的迁移与增殖，干预AS的进程。以上实验均是硝苯地平作阳性对照性，作用于优于硝苯地平。1、MTB对CCl4诱导的大鼠慢性肝损伤及肝纤维化形成有良好的抑制作用。(1)有效抑制肝脏结缔组织增生，降低肝脏胶原含量，其效果优于秋水仙碱及原生药丹参；(2)抗肝细胞损伤，MTB各剂量组均能显著降低模型大鼠较大幅度增高的血清ALT、AST活性及总胆红素含量，高剂量组显著提高血清Alb含量。综合作用于对照药物(丹参组对降总胆红素的作用于不明显，秋水仙碱对降AST的作用不明显)。(3)MTB量效结果显示以中剂量(12.5mg/Kg鼠重)为佳。2、MTB对已形成的DMN诱导的大鼠肝纤维化有良好的治疗效果。(1)显著促进肝内胶原的重吸收，降低肝组织Hyp含量及I型胶原的沉积；(2)促进损伤肝细胞的修复，提高血清Alb含量，降低血清ALT、AST活性；(3)显著降低大鼠腹水出现率；(4)作用优于秋水仙碱及原生药丹参；(5)具一定的量效关系，有效剂量区间为12.5mg/kg/d～25mg/kg/d。3、MTB有一定的促进机体体液免疫功能与细胞免疫功能作用。能促进小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能，提高小鼠血清中的溶血素含量，抑制小鼠的白细胞移动。增加小鼠抗体生成细胞的数量。4、对体外肝星状细胞功能的影响。能显著抑制HSC的增殖，抑制活化HSC的TGFβ1自分泌及活化；降低I型前肢原mRNA表达与胶原蛋白的生成，抑制TGFβ1信号转导通路中MAPK的活化。5、MTB通过体外、体内的试验，证明丹酚酸B及它的盐具有对肺纤维化抑制作用。6、一般药理研究本品剂量为3.8、7.5和15mg/kg灌胃对麻醉Beagle犬的呼吸和循环系统的功能无明显的影响；本品剂量15、30和60/kg灌胃对小鼠爬杆试验和Iruin行为分级试验均无影响。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一类具有对肾纤维化抑制作用的药物(化合物)，本专利技术涉及的化合物为丹酚酸B及其中包括它的镁、铵、钾盐(DS-1)盐和丹参总酚酸，包括紫草酸、迷迭香酸、丹参素、丹酚酸A等的医学用途。丹酚酸B及镁盐对心血管的作用及对肝损伤，肝纤维化的作用已作了大量试验。本专利技术对丹酚酸B及它的盐和丹参总酚酸，包括紫草酸、迷迭香酸、丹参素、丹酚酸A等进行肾纤维化抑制作用的试验，通过体外、体内的试验，证明丹酚酸B及它的盐具有对肾纤维化抑制作用。本专利技术是这样实施的本专利技术涉及的化合物为丹酚酸B盐及其它的盐包括它的镁、铵、钾盐(DS-1)等盐和丹参总酚酸及它的盐(DS-2)。药理试验一、体外试验DS对人肾成纤维细胞293增殖的影响1.实验目的评价DS体外对293细胞增殖的影响2.材料和方法2.1受试药物及试剂DS由中国科学院上海药物研究所天然药物化学研究室提供血管紧张素II购自Sigma公司2.2细胞培养人胚肾纤维细胞293，培养条件为DMEM培养液(含10％小牛血清)，37℃，5％CO2孵箱培养，待细胞长至70％融合时，用0.25％的胰酶消化2min左右，吸出一定体积的细胞移至新的培养瓶中，加入有血清培养基继续培养。用DMEM培养液制成2×105cell/ml的细胞悬液，按每孔100μl加入96孔板中，用于细胞增殖率测定。2.3细胞增殖测定融合的293细胞用胰酶消化，离心后用DMEM培养液(含10％小牛血清)制成2×105cell/ml的细胞悬液，按每孔100μl加入96孔板中，在37℃，5％CO2培养24小时，除正常对照组，每组均加入10-7mol.L-1血管紧张素II(AngII)，样品组同时加入不同浓度的DS，继续培养24小时，，每孔加入用无血清培养基配成的MTT溶液，37℃温浴4小时，使MTT还原为甲替，吸出上清液，加入150μl二甲亚砜使甲替溶解，在550nm测定光吸收值。2.4数据分析及统计方法结果用mean±SD表示，卞方检验进行比较。3.结果DS对血管紧张素II孵育的人胚肾成纤维细胞293增殖的影响，具体结果见表1，当培养基中加入10-7mol.L-1AngII24小时后，吸光度明显增加，同时DS浓度为500mg/ml时，对293细胞的增殖有明显抑制作用(p＜0.05)，但当DS浓度为250mg/ml时，对增殖无明显的抑制作用表1 DS对Ang II诱导的293细胞增殖的影响(X±9，n＝10) **p＜0.01，*p＜0.05 VS Ang II组4.小结实验结果表明DS体外可以抑制由Ang II刺激的人胚肾成纤维细胞293的增殖作用。二.体内实验1.实验目的观察DS对单侧输尿管结扎的大鼠肾纤维化是否具有抑制作用。2.实验动物SD大鼠由必凯实验动物有限公司提供，实验前经第二军医大学动物所1周适应性饲养。3.实验方法SD大鼠随机分为4组，每组10只，包括假手术组、模型组、DS组和阳性对照氯沙坦组，采用乙醚麻醉，腹部切开，分离左侧输尿管，结扎近端后缝合腹部，假手术组不结扎输尿管，手术前1日DS组以10mg/kg灌胃，氯沙坦组以1mg/kg灌胃，模型组给予相同体积生理盐水，术后7天内各组每天都灌胃一次，全程自由进食及饮水，手术后第7天再次麻醉，摘取左侧肾脏，10％福尔马林固定，石蜡包埋，切成2mm切片。2mm厚石蜡切片作HE.Massn染色，然后在光镜下观察肾间质病变。4.实验结果1、大鼠左侧输尿管结扎后病理组织学检查，从染色切片可以看出，模型组大鼠结扎侧肾脏肿大，颜色变浅，有囊性感，光镜下出现弥漫性肾间质类细胞浸润，间质水肿，且伴有不同程度的肾小管上皮细胞肿胀、变性及部分肾小管呈灶状萎缩，小管管腔闭塞和/或扩张，肾间质出现多灶纤维化，范围大于50％，假手术组肾脏大小形态正常，颜色暗红。DS组和阳性对照组肾脏形态与模型组无明显区别，但光镜下DS组和阳性对照氯沙坦组肾小管上皮细胞肿胀程度减轻，仅少数肾小管上皮细胞发生空泡性变性，肾间质病变呈片状分布，范围＜25％，与模型组比较，差异显著(P＜0.05)5.结论DS对梗阻性大鼠肾间质纤维化有保护本文档来自技高网...

【技术保护点】
丹酚酸Ｂ盐及丹参总酚酸的医学用途在制备预防。治疗由肾纤维化引起的疾病的药物中应用。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：朱大元，王才国，蒋山好，尚雁君，
申请(专利权)人：中国科学院上海药物研究所，中国人民解放军第二军医大学，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]