抗-EGFR抗体的高浓缩液体制剂制造技术

制备含有至少一种抗－ＥＧＦＲ抗体和／或其变体和／或片段之一的高浓缩液体制剂的方法，所述方法是通过超滤进行的。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
本专利技术涉及用于通过超滤制备高浓缩液体制剂的方法，所述的液体制剂含有至少一种抗-EGFR抗体和/或其变体和/或片段中的一种，特别是抗EGF受体的单克隆抗体，特别优选Mab C225(西妥昔单抗(cetuximab))和Mab h425(EMD72000)。此外本专利技术涉及抗-EGFR抗体，特别是抗EGF受体的单克隆抗体，特别优选Mab C225(西妥昔单抗)和Mabh425(EMD72000)和/或其变体和/或片段的高浓缩液体制剂，其特征在于高浓缩液体制剂具有10-250，优选50-180mg/ml，特别优选100-150mg/ml的抗-EGFR抗体含量，并且涉及其用途。 生物
的发展使得在过去十年期间可以通过重组DNA技术制备用于药学应用的一系列蛋白质。蛋白质药物如单克隆抗体用于如肿瘤治疗，例如用于特异性免疫治疗或肿瘤接种。治疗性蛋白质比常规有机和无机活性成分更大而且更复杂，并且它们具有复杂的三维结构和许多官能团，其影响蛋白质的生物学活性或者备选地可以引起不希望的效应。在制备、保存和运输过程中，蛋白质药物暴露于许多外界影响，这些影响对蛋白质活性成分具有减弱稳定性的作用。因此，有必要精确地研究特异性降解反应发生的原因和机制，以便能够稳定蛋白质，例如通过添加某些稳定性辅助剂(见，如Manning M.C.，Patel K.，&Borchardt R.T.(1989)Stability ofprotein pharmaceuticals.Pharm.Res.6，903-918)。文献中公开了治疗性蛋白质的许多制剂。但是，对于各种蛋白质活性成分的药物制剂的组合物的要求是很不同的，并且通常，由于不同蛋白质的特定理化性质和降解反应，将已确定的蛋白质配方应用于新的蛋白质活性成分是不可能的。因此，这些新的活性成分的适当药物制剂仍然是一个主要的挑战。虽然在目前的文献中将超滤作为重组蛋白质纯化的下游处理中的标准方法来描述(Taylor和Francis(2000)Pharmaceutical FormulationDevelopment of Peptides and Proteins，London，p.1-212；McPherson A.(1989)Separation Methods，Preparation and Analysis of ProteinCrystalsNew York，Robert E.Krieger Publishing Co，Inc，p.1-51)，然而有利的高浓度未能在下游处理中获得。另外，由于随后的纯化和层析步骤，获得的处理溶液可再次发生稀释。虽然US 6,252,055描述了通过超滤制备高浓缩抗体制剂，然而，以这种方式制备的抗体制剂甚至在制备后即具有≥4％的高比例可溶性聚集体。而且，获得的该抗体制剂不能用它们的天然结构和稳定性来表征，而这必须认为例如对抗体制剂的免疫原性和功效是非常重要的。聚集体对蛋白质制剂的免疫原性增强和效力降低以及生物利用度降低的不利影响已经从文献(S.A.Marshall，G.A.Lazar，A.J.Chirino，和J.R.Desjarlais.Rational design and engineering of therapeutic proteins.Drug Discovery Today8(5)212-221，2003；Schellekens H.Bioequivalenceand the immunogenicity of biopharmaceuticals.Nat Rev Drug Discov 1(6)457-462，2002)中得知。由于上述原因，显然，制备足够长时间稳定的液态高浓缩抗体制剂经证明对本领域技术人员是非常困难的。而且，由于对蛋白质以及特别是抗体甚至在低浓度范围内的极其显著的聚集趋势是十分了解的(S.A.Marshall，G.A.Lazar，A.J.Chirino和J.R.Desjarlais.Rational designand engineering of therapeutic proteins.Drug Discovery Today8(5)212-221，2003)，所以高浓缩液体制剂的制备对本领域技术人员是没有吸引力的。因此，蛋白质的聚集在文献中描述为最普通的物理不稳定性反应(W.Wang.Instability，stabilization，and formulation of liquid proteinpharmaceuticals.Int.J.Pharm.185(2)129-188，1999)。虽然WO03053465和WO03007988中公开了含有Mab C225(西妥昔单抗)或Mab h425(EMD72000)的制剂，但是，在WO03053465公开的制剂具有相对低的蛋白质浓度并且它们在室温下不是长期稳定的，在WO03/007988中公开的制剂同样地具有相对低的蛋白质浓度并且制剂(冻干物)必须在使用前重构。用于稳定蛋白质制剂的冷冻干燥方法公开在例如WO9300807和WO9822136中，但是，冻干制剂的严重不利之处在于使用者必须在使用前重构冻干物，这代表在使用前制备中相当大的错误之源。由于与液体制剂相比加入了进一步的制备过程，由于在方法研发(保证冻干期间的稳定性)、制备(制备成本和持续时间)以及例如验证方面的附加工作，此过程是不利的。在迄今已知的低蛋白质浓度制剂的情况下，在静脉内施用时需要高的输注体积。因此本专利技术的目的是浓缩根据本专利技术的抗体，这样，通过减少施用体积，也可考虑皮下施用。经皮下施用的制剂必须不超过1.0-1.5ml的体积而且必须进一步是含水的(euhydric)(pH7.2或pH4.0-9.0)和等渗的(约290mOsm)。皮下制剂的进一步优势在于患者自己施用的可能性。然而，在浓缩过程中蛋白质的稳定性不能受到削弱，即分解和聚集产物的增加应该在规范的范围内是可接受的。而且，这种制剂应该无毒理学上不可接受的物质或只含有生理学可接受浓度的毒理学上不可接受物质。因为由于预期的困难，已经建立的蛋白质配方通常不能应用于新的蛋白质活性成分，所以本专利技术的目的是发现新的、稳定的、高浓度的治疗性蛋白质特别是抗EGF受体的单克隆抗体例如Mab C225(西妥昔单抗)和Mab h425(EMD72000)的液体制剂，其对严酷条件例如高温度、空气潮湿和/或剪切力具有增强的稳定性，这样使得在制备、存储、运输和施用过程中它们的效力得以保持并且这些制剂不含毒理学上不可接受的辅助剂。专利技术概述令人惊奇的是，高浓缩液体形式的抗-EGFR抗体药物制剂可使用超滤方法获得，所述的制剂具有10-250mg/ml，特别优选是50-180mg/ml，特别优选的是100-150mg/ml的蛋白质浓度。通过超滤方法获得的制剂优选在长时期内是稳定的或者如果需要，它们可与合适的稳定化辅助剂混合或通过随后的冻干来稳定。根据本专利技术的制剂是生理学上很好耐受性的、可容易制备的、可准确配药的并且在整个存储过程、在机械应力以及例如在多次冷冻和解冻过程中是稳定的。令人惊奇的是，发现根据本专利技术方法制备的高浓缩抗-EGFR抗体制剂本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：S·马瑟斯，HC·马勒，
申请(专利权)人：默克专利有限公司，
类型：发明
国别省市：