一种秦巴硒菇的水浸物及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种秦巴硒菇的水浸物及其制备方法和应用，特别地指以０～６０℃的水浸出的秦巴硒菇的有效成分。同时指明了其抑制早幼粒细胞性白血病细胞系增殖的应用。本发明专利技术还提供了这种有效成分的制备方法，为今后秦巴硒菇在抗肿瘤上的开发应用提供了可行的方案。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于药物制造领域。
技术介绍
秦巴硒菇，又称巴西蘑菇(Agaricus blazei Mushroom)。1998年由中科院植物研究所在陕西紫阳县人工栽培成功，因该菌种来源于巴西原始森林，其子实体中富含硒，故得名。巴西蘑菇是一种营养价值极高的真菌类植物，南美巴西当地人民常作为美味佳肴，款待上等宾客。又因其具有很高的药用价值，又称为阳光食品。1945年被美国真菌学家W.A.Murill首次发现。20世纪60年代末，在巴西的日本咖啡种植者传入日本。1965年岩出在室内人工栽培获得成功，日本命名为姬松茸(拉丁名Agaricus blazeimurill)，是一种食药兼用的珍稀菌种。国际科学家主要通过物理和化学方法提纯的各种有效成分如水提醇沉法获得的粗制多糖和水溶性物质并进行了大量的动物实验和体外实验，证实此提取物具有抗肿瘤、抗病毒、降血脂、降血压、治疗搪尿病、保护肝脏功能及提高机体免疫力等多方面的医疗保健功能，尤其治疗某些肿瘤疾病效果优于目前所报道的其他菌种的提取成分。关于用不同温度制备的秦巴硒菇水浸物、水浸物的制备方法及其在抗血液系统细胞病变尤其在抑制早幼粒细胞性白血病细胞增殖的应用研究，尚未见报道。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种秦巴硒菇的水浸物及其制备方法和应用，以克服现有的秦巴硒菇的有效成分提取方法成本昂贵、提取效果差、易造成有效成分丧失、提取方法复杂不利于大规模工业化生产和日常家庭进行提取的缺陷。技术方案本专利技术的目的之一是提供一种秦巴硒菇的水浸物，即秦巴硒菇以0～60℃的水浸出的水溶物。上述的秦巴硒菇的水浸物的一种优选方案是，所说的水的温度为0～4℃；更优选的温度为4℃。上述的秦巴硒菇的水浸物的另一种优选方案是，所说的秦巴硒菇以0～4℃的水经30分钟以上浸出的水溶物，优选以4℃的水浸出。本专利技术的另一目的是提供一种秦巴硒菇的水浸物的制备方法，包括如下步骤(1)将秦巴硒菇置于0～60℃的水中；(2)分离上清溶液，即获得水浸物。上述的秦巴硒菇的水浸物的制备方法的一种优选方案是，所说的水的温度为0～4℃；更优选的温度为4℃。上述的秦巴硒菇的水浸物的制备方法的另一种优选方案是，所说的秦巴硒菇经30分钟以上的水浸出。本专利技术的第三个目的是提供一种秦巴硒菇的水浸物的应用，包括抑制血液系统病变细胞的增殖；特别是抑制早幼粒细胞性白血病细胞的增殖。本专利技术所说的秦巴硒菇的水浸物包括水浸物的母液、水浸物溶液和水浸物经干燥后的固体成分。秦巴硒菇做为保健用品，进行制取水浸液服用。有益效果现有技术多是采用物理方法如利用水提醇沉提取各种多糖有效成分，如粗制多糖，本专利技术的秦巴硒菇的水浸物是以0～60℃的水浸出的水溶性有效成分，提取方法简单、成本低廉、提取效果明显优于其它温度和方法、不易造成有效成分的丧失、提取方法的简化也有利于大规模的工业化提取。本专利技术的秦巴硒菇水浸物在应用中具有良好的抗癌效果，其抗癌作用与剂量呈线性关系，即水浸物的浓度越大，抗癌效果越强。4℃水浸物在70ng/mL的浓度下即可有效抑制早幼粒细胞性白血病细胞的增殖。由于本专利技术的秦巴硒菇的水浸物为水溶性的有效成分，易于口服，也易于和其他抗肿瘤成分相溶(容)，为制备保健品和药品提供了便捷的途径。本文所用的术语“浸出率”是指每毫升浸出液所含的固体物质的重量。本文所说的术语“水”是指化学意义上的一氧化二氢(H2O)，在实际应用中可使用去离子水、蒸馏水、双蒸水、过滤净化水、自来水等经过物理或化学方法净化或纯化制得的水。附图说明图1为等体积的秦巴硒菇不同温度的水浸物溶液对K562细胞系集落形成的影响的量效曲线图2为等重量的秦巴硒菇不同温度的水浸物固体成分对K562细胞系集落形成的影响的量效曲线具体实施方式下面结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。实施例中数据结果的统计学处理采用t检验和相关分析。实施例1本实施例说明经过培养取得受试肿瘤细胞的过程，和检测秦巴硒菇水浸物有效活性的方法。靶细胞K562细胞为早幼粒细胞白血病细胞系，自中科院上海细胞所细胞库购进。细胞培养于含10％FCS的RPMI1640培养液，置37℃，饱和湿度，5％CO2培养箱中培养。实验时，按白细胞直接计数法读取细胞数，备用。秦巴硒菇有效成分下肿瘤细胞集落的形成取对数生长的K562细胞，计数，待用。将1×103细胞，20％的胎牛血清(FCS)、分别加入不同浓度的秦巴硒菇有效成分、RPMI1640(Gibco)培养液和终浓度为0.3％琼脂充分温匀后，接种于24孔培养板中，置饱和湿度、37℃、5％CO2培养箱中培养5天于后，倒置光显微镜下计数≥50个K562细胞组成的集落数。实施例2 本实施例说明以不同温度的水制备的秦巴硒菇的有效成分，即所说的水浸物。称取秦巴硒菇5克，置干净的试剂瓶中，加入双蒸水50毫升，拧紧瓶盖，分别放入60℃水浴锅、0℃冰水浴、4℃冰箱和室温(25℃)静置30min，期间混摇一次。而后，在无菌条件下，从不同温度水浸液中各取10mL，分别置离心管中，3000/min离心20min。取上清，经0.2μm微孔滤膜除菌，作为活性测定的母液。实施例3本实施例说明秦巴硒菇不同温度的水浸物中固体物含量测定方法和结果。取9个1.5mL EP管，标记，分析天平称重，记录。无菌条件下取出0℃，4℃，室温和60℃的浸出液100μL，分别加入四个EP管中，在无尘条件下，将含有母液的EP管开盖，插入超级微量恒器中，80℃蒸发4小时，待EP管内水分蒸发干时，称取每一管的重量，减去空管重量，获得物为固体物质的净重。结果表明，不同温度对秦巴硒菇的有效成分的浸出率不一样，0℃的浸出液含有的固体成分为164ng/mL，4℃的浸出液含有的固体成分为184ng/mL，室温(25℃)的浸出物含量为22.34ng/mL，而60℃溶液中含有固体成分564ng/mL。即在0-60℃范围内，温度越高固体物的浸出率越高。实施例4本实施例说明等体积的秦巴硒菇不同温度的水浸物溶液对K562细胞系集落形成的影响。表1和图1结果提示，不同温度提取的水浸物溶液对K562细胞均有抑制集落形成的作用，加入细胞培养基的水浸物溶液体积越大，集落形成越少，二者呈现显著的线性关系。经相关分析，在60℃、0℃、4℃和室温(25℃)相关值分别为r＝-0.976，0.989，0.985和0.964。说明秦巴硒菇水浸物溶液具有良好的抗癌效果，其抗癌作用与剂量呈线性关系，即体积/体积浓度越大，抗癌效果越强。表1不同温度提取的水浸物溶液对K562细胞集落形成的影响 实施例5本实施例说明等重量的秦巴硒菇不同温度的水浸物固体成分对K562细胞系集落形成的影响。由表2和图2可知，不同温度水提物的浸出物的固体成分其抗肿瘤活性有明显的差别，在等重量的情况下，集落形成数量有很大差异。280ng/mL组经t检验，0℃组25℃组的p＜0.001，4℃组60℃组的p＜0.01，4℃组25℃组(室温组)的p＜0.001。显然，0℃和4℃组浸出物的固体成分的抗癌活性最强。说明秦巴硒菇水浸物的固体成分具有良好本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种秦巴硒菇的水浸物，其特征在于，是秦巴硒菇以０～６０℃的水浸出的水溶物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李兴玉，李静，高霞，
申请(专利权)人：上海师范大学，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]