狗胆粉及其在制药中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种狗胆粉，通过以下方法步骤制得：提供新鲜狗胆囊并取胆汁，经１００目筛过滤，在６０℃下干燥，经研磨后再过１００目筛，最后消毒。本发明专利技术还公开了狗胆粉的新用途，即狗胆粉在制备防治肝纤维化的药物中的应用，尤其是狗胆粉在制备对狗胆粉在对二甲基亚硝胺诱发大鼠肝纤维化药物的防治作用；狗胆粉在制备对四氯化碳诱发大鼠肝纤维化药物的防治作用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及狗胆粉及其在制药中的新用途，特别涉及狗胆粉在制备防治肝纤维化的药物中的应用。
技术介绍
狗胆是犬科动物狗的胆汁，对狗胆的应用《本草纲目》中早有记载，“凡气血痛及伤损者，热酒服半个，淤血尽下。治刀箭疮，去肠中脓水，耵耳出脓，拔白换汤不换黑，血气摄痛，反胃吐食，痞块疳积，赤白下痢”。作为药材民间应用已久，具有清肝明目，止血消肿之功效。近代，狗胆作为一种传统中药材被收编于《中药大词典》中，但对狗胆的研究、利用甚少。查阅文献，迄今为止国内外尚未见狗胆在抗肝纤维化方面的研究报道，更没有发现利用狗胆在制备防治肝纤维化的药物中的应用。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种狗胆粉及其新用途，尤其是在制备防治肝纤维化的药物中的应用。 实际上，本专利技术涉及的一种狗胆粉，通过以下方法步骤制得提供新鲜狗胆囊并取胆汁，经100目筛过滤，在60℃下干燥，经研磨后再过100目筛，最后消毒。 本专利技术的狗胆粉涉及在制备防治肝纤维化的药物中的应用。 为了更好地理解本专利技术的实质，下面将狗胆粉的药理实验及结果来说明其在制药领域中的新用途。 一、狗胆粉对二甲基亚硝胺(Dimethylnitrosamine，DMN)诱发大鼠肝纤维化的防治作用(一)狗胆粉对二甲基亚硝胺诱发大鼠肝纤维化的抑制作用本实验用DMN制备大鼠肝纤维化模型，以类似品—熊胆为药物对照，进一步证明狗胆抑制肝纤维化的作用。 1材料和方法1.实验动物S-D雄性大白鼠，体重160-180g。 2.试剂及药物二甲基亚硝胺(DMN)；直接红(Direct Red 80)；免疫组化单克隆抗体ED1(Serotec.co.uk)和αSMA(Dako，Denmak)。 本专利技术的狗胆粉；熊胆粉(吉林省延边熊厂提供的明月山牌)。 3.动物模型制作将60只动物随机分为6组，中毒组(10只)1％DMN(生理盐水稀释)1ml/kg连续3天/周，腹腔内注射共4周，同时用生理盐水2cc/d灌胃共4周。狗胆1、2、3组(每组10只)1％DMN腹腔内注射，剂量、时间同上，同时用狗胆小剂量(400mg/kg)、中剂量(600mg/kg)、大剂量(800mg/kg)，每日灌胃共4周。熊胆组(10只)1％DMN腹腔内注射，剂量、时间同上，同时用熊胆400mg/kg/d灌胃共4周。对照组(10只)注射用生理盐水1ml/kg连续3天/周，腹腔内注射共4周，同时用生理盐水2cc/d灌胃共4周。实验第4周末麻醉大鼠，心脏采血离心处理，处死动物后立即取肝脏。 4.血清AST、ALT、总蛋白、总胆固醇的测定血清AST、ALT的测定采用Reiman氏方法，血清总蛋白的测定采用Biuret法，血清总胆固醇的测定采用酶法，全部Kit购自Eiken Chemical(Tyoko，Japan)公司，严格按Kit说明书进行操作，利用分光光度计(Ultraspec 4050，LKB，Switzerland)测定吸光度，对照标准曲线计算AST、ALT值，总蛋白、总胆固醇含量。 5.病理检查大鼠肝/体重的检测处死前测量动物的体重，采血后立即取肝脏称重量，计算肝/体重百分比。称重后于肝左叶相同部位取组织二块，经10％的中性福尔马林固定，常规石蜡包埋，切片行H-E、直接红染色(0.1％直接红picric acid饱和液)，光镜下观察肝组织的病理变化及纤维组织增生程度，。直接红染色的切片利用CMIAS真彩色病理图象分析系统(北京航空航天大学)进行胶原纤维的定量分析。观察条件物镜10倍，每张切片随机选4个视野，图象采集、分割处理，参数统计分析，得出目标总面积/统计场总面积之比值。免疫组织化学染色切片厚4～5μm，常规脱蜡至水，用ABC法进行免疫组织化学染色，ED1工作浓度为1∶500，α-SMA工作浓度为1∶50。 6.统计学处理数据取均值行t检验。 2结果1.血清AST、ALT、总蛋白、总胆固醇检测结果见下表1。 表1 各组实验动物4周后血清生化指标的检测结果()***与中毒组比较p＜0.001，*与中毒组比较p＜0.052.肝/体重比检测结果见下表2。 表2 各组实验动物4周后肝/体重百分比()***与中毒组比较p＜0.0013.肝组织纤维组织增生图象分析结果见下表3。 表3各组实验动物4周后肝组织胶原纤维面积密度％()▲▲与中霉组比较P＜0.01，**与熊胆组比较P＜0.01。 4.病理学观察结果如下对照组肝小叶结构正常，无明显变性、坏死，个别标本中见门管区内少量炎细胞浸润。 中毒组肝小叶结构紊乱，肝细胞肿胀、变性，部分肝细胞胞浆浓缩，核深染，可见较多再生的肝细胞，肝细胞灶状或片状坏死，门管区内大量纤维组织增生，形成较粗的纤维间隔深入肝组织内，形成弥漫性假小叶的7/9只。 熊胆组肝小叶结构紊乱，肝细胞变性，并可见较多的点状、灶状坏死，门管区内较多纤维组织增生，形成较细的纤维间隔深入肝组织内，形成弥漫性假小叶的4/9只。 狗胆各组肝小叶结构基本正常，肝细胞轻度变性、个别标本中偶见点状坏死，门管区内纤维组织增生，形成纤细的纤维间隔深入肝组织内，仅有个别动物形成假小叶。狗胆3种不同剂量组之间病理变化及纤维组织增生程度无明显差异。 免疫组化染色结果对照组ED1+细胞在门管区、肝小叶中央静脉周围和肝实质内少量散在分布。α-SMA+细胞在门管区的各种血管壁上分布，肝小叶中央静脉壁有少量阳性表达，肝细胞间无阳性细胞分布。中毒组ED1+、α-SMA+细胞在增生的纤维间隔间大量弥漫分布，肝实质间散在分布。熊胆组ED1+、α-SMA+细胞分布同上，但数量比中毒组减少。狗胆各组ED1+、α-SMA+细胞分布与熊胆组相似，但数量比熊胆组少，狗胆三个不同剂量组两种阳性细胞的数量相似。 结论DMN是一种具有肝毒性、基因毒性和免疫毒性的化学物质，DMN在微粒体代谢后形成乙醛，从而损伤肝细胞，并使核酸和蛋白质甲基化，导致肝细胞坏死。DMN可使肝细胞变性、坏死，4周后形成与人类酒精性肝硬化相似的病理所见，并有停药后仍维持肝硬化几个月的特点。 本实验的血清AST、ALT值和总蛋白的含量检测结果看，狗胆和熊胆均有较好的降酶及增加血清总蛋白作用，而狗胆的作用优于熊胆，但熊胆组有较好的降低血清胆固醇的作用。本实验肝/体重比、肝纤维组织的图象检测结果，狗胆组与熊胆组比较有显著差异，狗胆3个组之间纤维组织增生程度无明显差异；肝组织病理观察表明，中毒组肝细胞排列紊乱，失去正常结构，肝细胞弥漫性变性，可见较多灶状、片状坏死。熊胆组病变比中毒组轻，但仍可见较多肝细胞变性，可见较多的点状、灶状坏死。狗胆组肝细胞轻度变性，偶见点状坏死。上述结果从病理学角度上进一步证实了狗胆对肝细胞的保护作用。根据本实验中血清AST、ALT的检测、肝/体重比、肝纤维组织图象分析结果及肝组织的病理检查结果，狗胆粉具有较好的抑制DMN诱发的肝纤维化的作用，其作用优于熊胆。 (二)狗胆粉在对二甲基亚硝胺诱发大鼠肝纤维化的治疗作用用1％二甲基亚硝胺腹腔注射4周诱发肝纤维化的模型后进行治疗。将60只大鼠随机分为狗胆组(3种不同剂量)、熊胆组、中毒组及对照组。观察各组大鼠肝/体重比、血清AST、ALT值，总蛋白、总胆固醇含量。肝组织标本行直接红染色，经病理图本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种狗胆粉，通过以下方法步骤制得：提供新鲜狗胆囊并取胆汁，经１００目筛过滤，在６０℃下干燥，经研磨后再过１００目筛，最后消毒。

【技术特征摘要】
1.一种狗胆粉，通过以下方法步骤制得提供新鲜狗胆囊并取胆汁，经100目筛过滤，在60℃...

【专利技术属性】
技术研发人员：朴东明，
申请(专利权)人：朴东明，
类型：发明
国别省市：22[中国|吉林]