包含能结合人树突细胞的单克隆抗体和β人绒毛膜促性腺激素的疫苗缀合物制造技术

本发明专利技术提供新的抗体疫苗缀合物及使用所述缀合物诱导细胞毒性Ｔ细胞（ＣＴＬ）应答的方法。在一个具体的实施方案中，该疫苗缀合物包含与抗甘露糖受体（ＭＲ）抗体连接的人绒毛膜促性腺激素β亚基（βｈＣＧ）抗原。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关申请本申请要求于2004年7月30日申请的美国临时专利申请号10/903,191的优先权。上述申请的全部公开内容通过引用结合到本文中。
技术介绍
免疫应答起始于专门的抗原呈递细胞(APC)水平，此类细胞包括存在于机体组织中的树突细胞(DC)和巨噬细胞(Mg)。DC表达高水平的细胞表面分子和补体受体，它们与T淋巴细胞相互作用，因此能够诱导有效的免疫应答。DC也分泌细胞因子、趋化因子和蛋白酶，它们能够启动免疫应答并使细胞免疫和体液免疫的扩增达到顶点。DC在其表面表达结合抗原片段的主要组织相容性复合体(MHC)分子。表达能识别这类抗原-MHC复合物的T细胞受体(TCR)的T细胞被激活并启动免疫级联。一般而言，有I类和II类MHC分子两类MHC分子。I类MHC分子将抗原呈递给特定的CD8+T细胞，而II类MHC分子将抗原呈递给特定的CD4+T细胞。为了有效治疗许多疾病，特别是癌症，疫苗必须引发有效的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)应答，亦称细胞毒性T细胞应答。细胞毒性T细胞主要包括在I类MHC情况下识别抗原的CD8+T细胞。与I类MHC分子有关的抗原加工明显与II类MHC分子不同。外源性递送到APC的抗原主要与II类MHC分子一起加工。相比之下，由于I类MHC分子位于胞内，内源性递送到APC的抗原主要与I类MHC分子一起加工。这不仅对APC如此，对所有表达I类MHC分子并在其表面连续展示与I类MHC分子相关的内源产生的抗原的有核细胞也是如此。因此，当病毒或肿瘤抗原作为与I类MHC分子相结合的肽被展示时，CTL可以靶向表达独特蛋白的感染病毒的细胞或肿瘤细胞。然而在特定条件下，DC具有独特能力，也能使外源抗原进入内部区室以结合I类MHC分子，致使它们经由I类和II类MHC两种途径呈递给T细胞。此过程称为交叉敏化或交叉呈递。因此，尽管抗体介导应答已经证明，当直接针对特定的分泌抗原或细胞表面抗原时，对特定疾病具有一定保护性或治疗性功效，但是针对多种疾病的最有效的免疫疗法看来都需要T细胞介导的免疫应答，尤其是CTL应答。由于有效的CTL应答并不限于胞外抗原，所以有可能开发出基于抗原的治疗性疫苗，所述疫苗并非有效的抗体靶标。因此，响应疾病相关抗原而发生的CTL新方法具有重大意义，因为，通常认为这些细胞对许多疫苗功效来说是至关重要的，并对大多数治疗性癌症疫苗来说是必不可少的。目前测试的一种疫苗方法使用抗原性肽进行免疫。此免疫方法绕过了对抗原摄取和加工的需求，而是依赖于肽与APC表面已经表达的I类MHC分子的直接结合能力。尽管此方法已经清楚证明患者体内的CTL诱导，但是该方法有些局限性。抗原性肽必须事先建立，不同MHC单体型的个体需要不同肽，而且肽在体内寿命短。另一种测试的方法是采用抗体-抗原复合物。Paul等(62)表明，对给定抗原具有特异性的抗体能增加小鼠针对所述抗原的体液免疫应答，推测是通过将免疫复合物传递给APC上表达的IgG的Fc受体(FcγR)。Wernersson及其同事(63)使用免疫复合物，研究了各FcγR在增强体内免疫应答中的作用。他们的研究证明FcγRI足以介导增强的免疫应答。然而，这类免疫复合物并不特异性靶向APC，因为它们也与许多并不参与抗原呈递的细胞上的Fc受体结合，因而降低了抗原递送效率。随后的研究使用抗体，以将抗原选择性靶向APC上的各种受体，并且已经证明这类选择性呈递能够诱导体液应答(66，67)。此外，已经知道，在I类MHC的情况下，与DC上的FcR结合的免疫复合物被加工和呈递(64，65)。此外，许多这类靶向FcR的方法受到限制，因为FcR在许多非APC例如血小板和嗜中性白细胞上表达。理想条件下，特异性靶向APC并能诱导有效的I类MHC限制性CTL应答以及诱导有效的II类MHC限制性TH应答的疫苗，在治疗某些疾病方面可以提供增强的功效。同样，已经知道，甘露糖基化抗原能诱导体液免疫应答和T细胞介导免疫应答，例如CTL应答。然而，甘露糖基化抗原并不特异性靶向APC，因为其它甘露糖结合蛋白含量丰富。而且，甘露糖基化蛋白由未成熟DC通过大胞饮机制而内化。因此，通过抗原甘露糖基化而产生的免疫应答机制和性质，与通过用抗体将抗原特异性靶向甘露糖受体的机制和特性截然不同。由于现有方法不能有效而特异性靶向APC，所以许多治疗用疫苗都需要从患者中纯化DC，接触抗原后再回输给该患者。因此，需要能有效靶向APC并产生抗原特异性T细胞介导免疫应答(包括抗原特异性CTL应答)的改进型疫苗，用于有效治疗多种疾病。专利技术概述本专利技术提供基于抗体的疫苗和方法，用于产生有效治疗多种疾病所需的抗原特异性T细胞介导免疫应答。具体地说，使用能结合APC上表达的特定受体的抗体，通过将一种或多种蛋白质抗原靶向抗原呈递细胞(APC)而诱导有效的抗原特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)应答。优选的受体包括C-凝集素受体，尤其是树突细胞(DC)和巨噬细胞上表达的人甘露糖受体。正如本专利技术所证明，采用抗体-抗原缀合物靶向甘露糖受体，使得抗原通过I类和II类MHC途径而加工。因此，诱导抗原特异性CTL(例如CD8+T细胞)及其它重要的效应T细胞，包括辅助T细胞(例如CD4+T细胞)。因此，一方面，本专利技术通过形成抗原与结合人APC的单克隆抗体(例如结合人APC上表达的人甘露糖受体的单克隆抗体)的缀合物，提供一种诱导或增强针对抗原的CTL应答的方法。然后，使缀合物在体内或离体与APC接触，使抗原以诱导或增强针对抗原的CTL应答(例如由CD8+细胞毒性T细胞介导的应答)的方式被内化、加工并呈递给T细胞。在一个优选实施方案中，这也用来诱导针对抗原的辅助T细胞应答(例如由CD4+辅助T细胞介导的应答)。因此，免疫应答经由I类和II类MHC两种途径而诱导。也可以使APC与佐剂或免疫刺激剂例如细胞因子接触，所述免疫刺激剂刺激树突细胞增殖，以进一步增强免疫应答。上述免疫刺激剂可以与分子缀合物单独接触或者与分子缀合物连接。因此，在一个具体的实施方案中，本专利技术提供疫苗缀合物，其包含与抗原和免疫刺激剂连接的单克隆抗体，其中单克隆抗体能结合人APC。免疫刺激剂可以与缀合物共价或非共价连接。或者，免疫刺激剂可以与缀合物用基因工程技术融合(例如与缀合物共同表达为一个融合蛋白)。可以使用各种合适的免疫刺激剂，包括但不限于CD40配体；细胞因子，例如IFN-α、IFN-β、IFN-γ和IL-2；集落刺激因子，例如G-CSF(粒细胞集落刺激因子)和GM-CSF(粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子)；抗CTLA-4抗体；toll受体激动剂(例如鞭毛蛋白和MALP-2(巨噬细胞活化脂肽-2)；LPS(内毒素)；R837(3MPharmaceuticals，St.Paul，MN)；R848(3M Pharmaceuticals，St.Paul，MN)；聚肌胞苷酸(polyIC，肌苷胞苷多核苷酸)；ssRNA；dsRNA；卡介苗(BCG)；盐酸左旋咪唑；和静脉内免疫球蛋白。本专利技术的缀合物中可以使用各种合适的抗体，包括但不限于来源于任何物种(例如人、鼠、兔等)的抗体和/或经基因工程和重组表达的抗体(例如嵌合抗体、人源化抗体和人抗体)。优选的抗体包括人单克隆抗体。用于本专利技术的抗体也可包含任何本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分子缀合物，其包含与β人绒毛膜促性腺激素（βｈＣＧ）和免疫刺激剂连接的单克隆抗体，其中所述单克隆抗体能结合人抗原呈递细胞（ＡＰＣ）。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：T克勒，M恩德雷斯，L何，V拉马克里什纳，
申请(专利权)人：塞尔德克斯医疗公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]