本发明专利技术涉及一种磷酸肽稳定的无定形磷酸钙和／或无定形氟磷酸钙复合物，其中所述复合物在低于７．０的ｐＨ下形成。还提供一种制造这种复合物的方法。所述复合物在牙科应用中有效，尤其在牙科再矿化方面。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】本专利技术涉及由磷酸肽稳定的无定形磷酸钩和/或无定形氟磷酸4丐。 提供制造本专利技术复合物和治疗或预防龋齿、牙结石、牙侵蚀/腐蚀和牙 过敏的方法。由于其再矿化(修复)早期的龋齿，其具有抗龋齿性， 保护牙齿结构，以及其他牙科/医药应用(包括抗结石、抗侵蚀/腐蚀 和抗牙过敏)。
技术介绍
龋齿是由于通常由牙斑的牙病原菌发酵饮食糖产生的有机酸导 致的牙齿的坚硬组织的去矿化引起的。龋齿仍是一个主要的公共健康 问题。此外，恢复的牙齿表面易于遭受绕恢复边缘的进一步龋齿。即 使在大部分发达国家通过使用氟化物降低龋齿流行，该疾病仍然是主 要的公共健康问题。牙侵蚀/腐蚀是由于饮食或反胃的酸造成的牙齿矿 物质的流失。牙过敏归因于保护性矿化层的流失而暴露的牙本质小 管，牙骨质和牙结石是磷酸钓矿物在牙齿表面上的不想要的增生。因 此所有这些情况，龋齿、牙侵蚀/腐蚀、牙过敏和牙结石是磷酸4丐水平 的失调。通过提供可生物利用的4丐和磷酸根离子补充流失的磷酸钾矿物 质，用稳定的无定形磷酸4丐(ACP)或稳定的无定形氟磷酸4丐(ACFP) 治疗龋齿、牙侵蚀/腐蚀和牙过敏。稳定的ACP和稳定的ACFP还可 结合至牙结石的表面并阻止或减少进一步增生。因此，稳定的ACP 和稳定的ACFP在预防和治疗口腔疾病或其他医学情况中可起重要作 用。酪蛋白以胶束形式存在于牛奶中，其被认为是半径约100nm的近 球形颗粒，分散在水、盐、乳糖和乳清蛋白质的连续相中(Schmidt, D. G(1982>Dev.Z)m>7C/^m. 1, 61-86)。酪蛋白胶束作为磷酸4丐的载体， 为骨和牙齿的形成提供可生物利用的钓和磷酸根离子来源。酪蛋白胶束保持可溶的和可生物利用状态的4丐和磷酸根离子的能力是由被称 为酪蛋白磷酸肽(CPP)的酪蛋白的多磷酸化肽片段保持。墨尔本大 学申请的WO 98/40406描述了4^性pH下产生的酪蛋白磷酸肽-无定形 磷酸钙复合物(CPP-ACP)和CPP稳定的无定形氟磷酸钓复合物 (CPP-ACFP )。已经显示这些复合物能预防釉质去矿化和促进动物和 人原位龋齿^^莫型(Reynolds, 1998)中釉质表面下损伤的再矿化。有效形成复合物的CPP无论其是否为全长度的酪蛋白的部分都 能起这个作用。可从全长度的酪蛋白胰蛋白酶消化物中分离的活性物 (CPP)的实例列举在US 5,015,628中且包括肽Bos (牛) X-5P (f59-79) [1〗,Bos P-酪蛋白X-4P (fl-25) [2], BosoCs2-酪蛋 白X-4P (f46-70) [3]和BosoCs2画酪蛋白X-4P (fl-21) [4],如下Gln59-Met-Glu-Ala-Glu-Ser(P)-Ile-Ser(P)-Ser(P)-Ser(P)-Glu-Glu-Ile-Val画Pro画Asn-Ser(P)-Val-Glu-Gln-Lys79 a sl(59-79) Argi-Glu-Leu國Glu-Glu-Leu-Asn-Val-Pro-Gly國Glu-Ile-Val画Glu-Ser(P) -Leu-Ser(P)-Ser(P)-Ser(P)-Glu-Glu國Ser國Ile匪Thr-Arg25|3 (1-25)Asn46-Ala-Asn-Glu-Glu-Glu-Tyr-Ser-Ile-Gly-Ser(P)-Ser(P)-Ser(P)-Glu-Glu-Ser(P)-Ala-Glu-Val-Ala-Thr-Glu-Glu-Val-Lys70 as2(46-70)x[Ca2(P04)(OH)],其中x>l。优选地，ACFP相主要为碱性相，其中所述ACFP主要包括Ca2+ 、 P043-和F _离子。ACFP的所述碱性相的通式可以为 [Ca3(P04)2]x[Ca2(P04)F]y，其中当y:l时x》l或当x-l时y》1。人们认为，结构上来看，本专利技术的PP稳定的ACP复合物中的 ACP含代替ACFP中氟离子的氩氧根离子。在本专利技术的说明书中的磷酸肽是指其中至少2个氨基酸被磷 酸化的氨基酸序列。序列中至少两个磷酸氨基酸优选为相邻的。优选 地，所述磷酸肽包括序列A-B-C-D-E，其中A, B, C, D和E各自 为磷酸丝氨酸、磷酸苏氨酸、磷酸酪氨酸、磷酸组氨酸、谷氨酸或天 冬氨酸，且A， B, C, D和E的至少2个，优选3个为磷酸氨基酸。 在一个实施例中，所述磷酸氨基酸残基为磷酸丝氨酸，例如三个连续 的磷酸丝氨酸残基。在一个优选的实施例中，所述磷酸肽包括三个连 续的磷酸丝氨酸残基，紧跟2个谷氨酸残基，序列表示为 Ser(P)-Ser(P)-Ser(P)-Glu-Glu (其中Ser(P)为磷酸丝氨酸，Glu为谷氨酸)。在一个实施例中，所述PP为完整的酪蛋白磷酸肽(CPP)或酪 蛋白的片段。因此，所述PP可为酪蛋白磷酸肽或磷酸多肽。形成的 复合物的分子式为[CPP(ACP)8]n或[CPP(ACFP)8]n,其中Il等于或大于1,例如6。形成的复合物可为胶状的复合物，其中中心颗粒集聚形成 悬浮在水中的小(例如，约2-5nm)和大(例如，约100nm)胶状颗粒。所述PP可为任何来源的；其可存在于较大多肽中，包括全长度 的酪蛋白多肽，或者其可通过对酪蛋白或其他富磷酸氨基酸蛋白质如 磷蛋白(phosphitin)进行胰蛋白酶或其他酶消化或化学水解(例如通 过碱或酸)进行分离，或者通过化学或重组合成，只要其包括如上限 定的A-B-C-D-E序歹'j。位于中心序列两侧的序列可为任何序歹'J。然而， <尤选;也为asl ( 59-79 ) [1], P (1-25) [2], as2 ( 46-70 ) [3]和a s2 (1-21 ) [4]中的那些两侧序列。所述两侧序列任选地通过删除、增加 或保守取代一个或多个残基进行修饰。所述两侧区域的氨基酸组成和 序列并非关键。在一个优选的实施例中，所述PP是一种或多种选自asl ( 59-79) [1], P(l-25)[2], as2 (46-70) [3]和a s2 (1-21) [4]的酪蛋白磷酸肽。排除任何理论或作用模式的束縛，人们认为PP结合ACP或ACFP 束产生存在于溶液中的亚稳态复合物。这种结合被认为阻止了 ACP 或ACFP长大到引起磷酸4丐的成核和沉淀的尺寸。这样，4丐和其他离 子如氟离子可被定位，例如在牙齿的表面以预防去矿化并预防龋齿的 形成。因此，人们认为这样提供了一种以可生物利用形式输送能再矿 化牙齿的无定形磷酸4丐的机制。在另外一个实施例中，本专利技术提供一种如上所述的稳定的ACFP 复合物或稳定的ACP复合物，该复合物作为运输载体，所述运输载 体在靶位点共定位离子，所述离子包括，但不限于4丐、氟和磷酸根离 子。在一个优选的实施例中，所述复合物包括以无定形形式的磷酸钓， 其提供较好的防龋齿、防侵蚀/腐蚀、防结石和防牙过敏功效。所述耙 位点优选地为牙齿或骨骼。本专利技术的另一方面提供一种磷酸肽稳定的无定形磷酸4丐(ACP ) 或无定形氟钙(ACFP)复合物，其中所述复合物在pH7.0或更低形 成，且其中所述ACP或ACFP主要为碱性形式。为了避免疑问，本专利技术所述磷酸肽稳定的ACP本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种磷酸肽稳定的无定形磷酸钙（ＡＣＰ）或无定形氟钙（ＡＣＦＰ）复合物，其中所述复合物在ｐＨ７．０或更低形成，以及其中所述ＡＣＰ或ＡＣＦＰ主要以碱性形式。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】AU 2004-11-25 20049067621.一种磷酸肽稳定的无定形磷酸钙(ACP)或无定形氟钙(ACFP)复合物，其中所述复合物在pH7.0或更低形成，以及其中所述ACP或ACFP主要以碱性形式。2. 根据权利要求1所述的复合物，其特征在于，所述磷酸肽包括序 列A-B-C-D-E,其中A， B, C, D和E独立地为磷酸丝氨酸，磷酸苏氨 酸，磷酸酪氨酸，磷酸组氨酸，谷氨酸或天冬氨酸。3. 根据权利要求1所述的复合物，其特征在于，所述复合物适于牙 科应用。4. 根据权利要求2所述的复合物，其特征在于，所述磷酸肽包括序 列Ser(P)-Ser(P)-Ser(P)-Glu-Glu,其中Ser(P)为磷酸丝氨酸及Glu为谷氨酸。5. 根据权利要求1至4中任一权利要求所述的复合物，其特征在于， 所述磷酸肽为酪蛋白磷酸肽。6. 根据权利要求5所述的复合物，其特征在于，所述酪蛋白磷酸肽 从通过酶或化学水解的全长度酪蛋白中分离。7. 根据权利要求5或6所述的复合物，其特征在于，所述酪蛋白磷 酸肽选自asl(59-79)， P (1-25), a 82(46國70)和a s2(l-21)。8. 根据权利要求1至7中任一权利要求所述的复合物，其特征在于， 所述复合物在pH约5.0至低于7.0的范围下形成。9. 根据权利要求1至8中任一权利要求所述的复合物，其特征在于， 所述复合物在pH约5.0至约6.0的范围下形成。10. 根据权利要求1至9中任一权利要求所述的复合物，其特征在于， 所述复合物在约5.5的pH下形成。11. 一种制造磷酸肽稳定的无定形磷酸钙(ACP)复合物的方法，包 括下列步骤(i) 获得包括至少一种磷酸肽的溶液，以及(ii) 混合包括钙离子、磷酸根离子和氢氧根离子的溶液，同时保持 pH约7.0或更低。12. 根据权利要求11所述的方法，其特征在于，所述氢氧根离子用 滴定法加入至磷酸肽溶液中以保持基本恒定的pH。13. 根据权利要求11或12所述的方法，其特征在于，所述4丐和;粦酸 根离子伴随不断的搅拌和以...
【专利技术属性】
技术研发人员：埃里克查尔斯雷诺兹，
申请(专利权)人：墨尔本大学，
类型：发明
国别省市：AU[澳大利亚]
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