一种治疗和／或预防乙肝的药物制造技术

本发明专利技术公开了一种治疗和／或预防乙肝的药物。该治疗和／或预防乙肝的药物，包括西咪替丁和乙肝疫苗。本发明专利技术的治疗和／或预防乙肝的药物，主要是通过激活与提高机体的细胞免疫反应，尤其是高水平的乙肝专一性ＣＤ８阳性ＣＴＬ细胞活性，同时分泌γ－干扰素等有效免疫组分而达到的。本发明专利技术的治疗和／或预防乙肝的药物，不仅使用方便，成本低，安全，而且易于推广。

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种治疗和/或预防乙肝的药物。技术背景乙型肝炎是由乙型肝炎病毒引起的，是一个严重的公共卫生问题，对人类健康 的威胁很大。感染乙型肝炎后，部分患者将发展成为慢性持续性感染状态，有的可 能演变为肝硬变或原发性肝细胞癌。我国是乙型肝炎病毒感染高流行区，人群感染率为60%，乙型肝炎表面抗原(HBsAg)人群携带率为10%。目前，据估计，全世界 共有3亿HBsAg携带者，而我国就占其中的三分之一，乙型肝炎传播已成为影响人 口素质的重要问题。作为疫苗可预防的疾病，乙肝疫苗的接种是控制乙型肝炎最有效的措施。乙肝 疫苗依据组成成分可分为合成肽疫苗、基因(核酸)疫苗和重组亚单位疫苗。合成 肽疫苗是仿特异性抗原的某些肽链或蛋白人工合成的抗原形成的疫苗。基因(核酸) 疫苗是相对于基因(核酸)免疫来说的。它是将含有编码特定抗原蛋白质的基因序 列克隆到合适的质粒载体上，制备成核酸表达载体，通过肌肉注射等方法将其导入 机体内，通过宿主细胞的转录系统合成抗原蛋白质，从而激发机体免疫系统产生针 对外源蛋白质的特异性免疫应答反应。这一基因免疫过程中所使用的核酸表达载体 被称为基因疫苗，又称核酸疫苗。第三类乙肝疫苗是重组亚单位疫苗，即将病毒抗 原基因在大肠杆菌或酵母系统中进行表达出蛋白质，提取纯化后与铝佐剂配伍而 成。进入80年代，乙型肝炎重组亚单位疫苗的发展非常迅速，自1981年起，默克 公司成功研制出乙型肝炎基因S蛋白在酵母中表达后与铝佐剂配伍的重组亚单位疫 苗并商品化后，对全球乙型肝炎的预防和控制起重要作用。目前用于乙肝疫苗商品化的佐剂仅有铝佐剂，通常为氢氧化铝或磷酸铝。铝佐 剂的优点有吸附并储存抗原延长抗原作用时间，能增强APC细胞对抗原的递呈能 力，其最主要的优点是能增强体液免疫反应。其最大的缺点是不能增强细胞免疫反 应，尤其是不能增强细胞毒淋巴细胞杀伤反应。由于我国乙肝病毒人群携带率为10%,不仅造成乙型肝炎病毒传播的巨大威胁， 同时对于这些携带者而言，其健康一直受到极大的威胁和危害。所以治疗乙肝病毒 携带者已成为世界一大难题。现在临床上基于干扰素，或干扰素加抗病毒药物的治疗方案只有30%的有效率，并在停药后病毒反弹，所以总体治疗效果不尽理想。有效的治疗手段应是基于激发病毒携带者体内的免疫系统。国际上公认的评价 治疗性乙肝疫苗的指标是抗原专一性的细胞免疫反应，尤其是要激发高水平的乙肝 专一性CD8阳性CTL细胞活性，并分泌高水平的Y —干扰素等有效免疫组分。国际上虽然有报道利用乙肝病毒S或C抗原为免疫原与不同免疫增强剂配合， 以提高激活机体的细胞免疫水平，但临床效果仍然在评价中。现有上市的乙肝疫苗是基于乙肝病毒S抗原与铝佐剂配伍的形式，其缺点限制 了其疫苗用于乙肝治疗发案的发展。西咪替丁(西咪替丁Cimetidine， CIM)是一种组胺H2受体拮抗剂，能显著抑制 胃酸分泌。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种新的治疗和/或预防乙肝的药物。 本专利技术所提供的治疗和/或预防乙肝的药物，包括西咪替丁和乙肝疫苗。 所述乙肝疫苗包括乙肝病毒重组亚单位疫苗和乙肝病毒核酸疫苗。所述乙肝病毒重组亚单位疫苗具体可为乙肝病毒s抗原、乙肝病毒前Sl(preSl)抗原或乙肝病毒前S2 (preS2)抗原；所述乙肝病毒核酸疫苗具体可为为乙肝病毒S抗原核酸疫苗、乙肝病毒preSl 抗原核酸疫苗或乙肝病毒preS2抗原核酸疫苗；所述乙肝病毒S抗原核酸疫苗为在真核细胞表达载体的多克隆位点插入乙肝病 毒表面抗原S编码基因得到的重组表达载体；所述乙肝病毒前Sl抗原核酸疫苗为在真核细胞表达载体的多克隆位点插入乙 肝病毒前Sl抗原编码基因得到的重组表达载体；所述乙肝病毒前S2抗原核酸疫苗为在真核细胞表达载体的多克隆位点插入乙 肝病毒前S2抗原编码基因得到的重组表达载体。所述真核细胞表达载体具体可为pcDNA3. 0。所述盐酸西咪替丁和乙肝疫苗可混合在一起。其中，所述西咪替丁和所述乙肝 病毒重组亚单位疫苗的质量比可为50， 0 — 2， 000:1，优选为1000:1;所述西咪替丁 和所述乙肝病毒核酸疫苗的质量比可为2.5-10: 1，优选为5: 1。所述西咪替丁和乙肝疫苗还可分别独立包装。使用时，所述西咪替丁和乙肝疫苗先混合后再一同注入机体。西咪替丁是不溶于水的，而盐酸西咪替丁可以溶于水。所以，当它用于水溶性时，如与DNA质粒混合，要使用盐酸西咪替丁，当与脂溶性物质，如油溶性物质时 要使用西咪替丁。上述西咪替丁可自己制备或从生产厂家购买，如东港市宏达制药有限公司等， 溶于盐酸后为盐酸西咪替丁。所述治疗和/或预防乙肝的药物可通过注射、喷射、滴鼻、滴眼、渗透、吸收、物理或化学介导的方法导入机体如肌肉、皮内、皮下、静脉、粘膜组织；或是被其 他物质混合或包裹后导入机体。所述治疗和/或预防乙肝的药物的用量一般为0. 06-0. g/kg体重/次，每 7-30天给药一次， 一般共需2-6次。IgG、 IgGl和IgG2a抗体定量检测实验和流式细胞仪检测CD8细胞内IFN- y表 达实验均表明西咪替丁能够使乙肝疫苗诱导机体产生混合的Th免疫反应，在核酸 疫苗方面，更偏向Thl，在重组亚单位疫苗方面，产生混合的Th免疫反应；T淋巴 细胞扩增实验表明西咪替丁能够使乙肝疫苗对机体产生明显的特异性淋巴细胞扩 增反应；流式细胞仪检测体内CTL实验表明盐酸西咪替丁及其衍生物能够增强乙肝 疫苗对体内的CTL反应；在核酸疫苗方面，流式细胞仪检测共刺激分子表达实验表 明盐酸西咪替丁能够增强APC细胞对抗原的递呈。本专利技术将西咪替丁作为乙肝疫苗的佐剂，制备得到治疗和/或预防乙肝的药物。 本专利技术的治疗和/或预防乙肝的药物，主要是通过激活与提高机体的细胞免疫反应， 尤其是高水平的乙肝专一性CD8阳性CTL细胞活性，同时分泌y —干扰素等有效免 疫组分而达到的。本专利技术的治疗和/或预防乙肝的药物，不仅使用方便，成本低， 安全，而且易于推广。 附图说明图1为实施例l的定量ELLISA检测IgG含量结果图2为实施例l的定量ELLISA检测IgGl和IgG2a含量结果图3为实施例l的淋巴细胞扩增反应结果图4A为实施例1的流式细胞仪检测IL-4在CD4 T细胞中的表达结果 图4B为实施例1的流式细胞仪检测IFN- y在CD4 T细胞中的表达结果 图5A为实施例1的流式细胞仪检测IFN- y在CD8 T细胞中表达结果图5B为实施例1的体内CTL反应结果图5C为实施例1的流式细胞仪检测体外CTL反应结果图6为实施例2的定量ELLISA检测IgG含量结果图7为实施例2的定量ELLISA检测IgGl和IgG2a含量结果图8为实施例2的淋巴细胞扩增反应结果图9A为实施例2的流式细胞仪检测IL-4在CD4 T细胞中的表达结果 图9B为实施例2的流式细胞仪检测IFN- y在CD4 T细胞中的表达结果 图10A为实施例2的流式细胞仪检测IFN- y在CD8 T细胞中表达结果 图10B为实施例2的体内CTL反应结果图ll为实施例2的流式细胞仪检测CDllc+CD80+， 00110+0086+和00110+似1^11+ 在脾脏细图12为pcD-S2质粒的物理图谱具体实施方式下述实施例中的实验方法，如无特别说明，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种治疗和／或预防乙肝的药物，包括西咪替丁和乙肝疫苗。

【技术特征摘要】
1、一种治疗和/或预防乙肝的药物，包括西咪替丁和乙肝疫苗。2、 根据权利要求1所述的药物，其特征在于所述乙肝疫苗包括乙肝病毒重组 亚单位疫苗和乙肝病毒核酸疫苗。3、 根据权利要求2所述的药物，其特征在于所述乙肝病毒重组亚单位疫苗为 乙肝病毒S抗原、乙肝病毒前S1抗原或乙肝病毒前S2抗原；所述乙肝病毒核酸疫苗为乙肝病毒S抗原核酸疫苗、乙肝病毒前Sl抗原核酸疫苗或乙肝病毒前S2抗原核酸疫苗；所述乙肝病毒s抗原核酸疫苗为在真核细胞表达载体的多克隆位点插入乙肝病毒表面抗原S编码基因得到的重组表达载体；所述乙肝病毒前Sl抗原核酸疫苗为在真核细胞表达载体的多克隆位点插入乙肝 病毒前Sl抗原编码基因得到的重组表达载体；所述乙肝病毒前S2抗原核酸疫苗为在真核细胞表达载体的多克隆位点插入乙肝病毒前S2抗原编码基因得到的...

【专利技术属性】
技术研发人员：王宾，王军朋，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]