纤维蛋白溶解剂药用组合物制造技术

本发明专利技术涉及纤维蛋白溶解剂药用组合物。具体地说，本发明专利技术涉及包含金属蛋白酶纤维蛋白溶解剂（纤溶酶（ｆｉｂｒｏｌａｓｅ）或ＮＡＴ）的药用组合物、制备冻干组合物的方法以及用于制备水性药用组合物的药盒和方法以及该方法的用途。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
纤维蛋白溶解剂药用组合物的制作方法纤维蛋白溶解剂药用组合物本申请是申请日为2000年9月29日，申请号为00816379.0， 专利技术名称为纤维蛋白溶解剂药用组合物的专利技术专利申请的分案 申请。专利
本专利技术涉及纤维蛋白溶解剂的新型药用组合物。更具体地说， 本专利技术涉及纤维蛋白溶解酶(fibrolase)及新型作用血栓溶解剂(NAT) 各自的冷冻液体组合物和冻干组合物以及它们的生产和使用方法。专利技术背景一般来说，多肽在水溶液中稳定性较差，通常会发生化学降解 和物理降解，导致加工和贮存期间生物活性丧失。尤其在水溶液时 遇到的另一个问题是水解，如脱氨和肽键断裂。这些问题是根据生 物活性给予患者规定剂量的治疗活性多肽存在的严重问题。为减少多肽的降解，通常4吏水型药用组合物冷藏或冷冻备用。作为替代方法，经常采用冷冻干燥方法稳定多肽以便可以长期贮存， 尤其是当所述多肽在液体组合物中相对不稳定时。 一 个冷冻干燥循环通常包括以下三个步骤冷冻、初次干燥、二次干燥；Williams和 Polli, Journal of Parenteral Science and Technology,第38巻，第2期, 第48-59页(1984)。在冷冻步骤中，将所述溶液冷却直至充分冷冻。在这一步骤 中，溶液中大量水形成水。冰在初次干燥步骤中升华，该步骤是利 用真空将冷冻室内压降至冰蒸发压以下进行的。最后，在第二个干 燥步骤中，在室内压降低和存放架温度升高下除去吸附或结合水。 这一过程获得称作冻干饼的物质。此后所述冻干饼可在使用前复制。复制冻干物质的标准方法是加回 一定体积的纯水(通常相当于冻 干期间除去的水体积)，但是有时复制胃肠外给药药物时使用抗菌剂 稀释液；Chen, Drug Development and Industrial Pharmacy,第18巻，第11-12期，第1311-1354页(1992)。冷冻干燥被认为是去除多肽溶液中多余水份的最好方法之一。 冷冻干燥工艺可获得稳定且适合长期贮运的产品。冷冻干燥产品可 在室温下贮存，因此更易于贮运及分销到更广泛的地理市场，例如 可能没有冷藏条件的国外市场。人们已经注意到，某些情况下赋形剂对冻千产品起稳定剂的作 用；Carpenter等，Developments in Biological Standardization,第74 巻，第225-239页(1991)。例如已知的赋形剂包括多元醇类(包括甘 露醇、山梨醇和甘油)；糖类(包括葡萄糖和蔗糖)及氨基酸类(包括丙 氨酸、甘氨酸和谷氨酸)。此外，多元醇和糖也经常用来保护多肽免受冷冻和干燥引起的 破坏并提高在干燥状态下贮存时的稳定性。 一般来说，糖类尤其是 二糖在冷冻干燥过程和贮存期间均有效。也有报道，其它类型分子 包括单糖和二糖及诸如PVP的聚合物用作冻干产品的稳定剂。专利技术概述本专利技术涉及纤溶酶(fibrolase)及新型作用血栓溶解剂(NAT) 的稳定药用组合物，其中有些是适于在冷冻状态下贮存的液体组合 物，而其它适于冷冻干燥贮存。因为纤溶酶和NAT的纤维蛋白溶解特性，本专利技术的组合物可用 于体内溶解血凝块，因此可治疗性给药。对于本专利技术目的，术语NAT指具有纤维蛋白溶解活性的金 属蛋白酶，其特征在于SEQIDNO: 1。所述NAT多肽由SEQ ID NO: 2的cDNA分子编码，但是编码相同多肽的任何DNA分子变异体序 列可用于按照下文提及的方法进4亍表达和生产。纤溶酶是已知的金属蛋白酶，曾经描述于科学文献和专利文献； 参见Randolph等,Protein Science, Cambridge University Press (1992), 第590-600页，及1989年7月12日公布的欧洲专利申请第0 323 722 号(Valenzuela等)。通常本专利技术组合物中所用的纤溶酶属于SEQ ID NO: 3，它由SEQ ID NO: 4的cDNA分子编码(或其编码相同氨基酸序列 的变异体)。纤溶酶和NAT不同于其它治疗体内凝血块的治疗药，.例如尿激 酶、链激酶和tPA，它们是纤溶酶原激活物。与所述药物不同，纤溶 酶和NAT直接作用于凝血块而降解纤维蛋白和纤维蛋白原。除治疗有效量纤溶酶或NAT外，本专利技术的药用组合物在药学上 可接受的緩冲剂中包含锌稳定剂以及任选增量剂，包含或不含其它 赋形剂，它们合在一起提供可长期贮存的稳定冷冻产品或稳定冻干产品。一方面，本专利技术提供包含纤溶酶或NAT、水溶性锌盐、柠檬酸 緩冲剂、任选其它选自水溶性钙盐的稳定剂及任选增量剂(如甘露醇) 的可冷冻的药用组合物。也可力。入表面活性剂如吐温80 (BASF, Gurnee, Illinois)以提高冻融稳定性。可加入Tris緩冲剂(Sigma, St. Louis Missouri)或其它緩冲能力高于pH 7.0的緩冲剂使pH稳定在7.4 或7.4以上。在本专利技术的另一方面，所逸药用组合物可以是可冻干的或已冻 干的药用组合物，它包含纤溶酶或NAT、锌稳定剂(如水溶性锌盐) 和种檬酸緩冲剂，该组合物含有或不含其它赋形剂(例如增量剂，诸 如甘露醇、甘氨酸等)。所述冻干组合物也可以含有作为冻干保护剂 的二糖，例如蔗糖或海藻糖。可^/口入表面活性剂如吐温80保护金属 蛋白酶(纤溶酶或NAT)免受冷冻干燥应力。最好使用pKa在8.0士0.5 范围内的合适緩冲剂(如Tris),《吏pH保持于8.0 ±0.5。本专利技术还包括制备冻干组合物的方法，该方法包括以下步骤(i) 将纤溶酶或NAT与緩冲剂和水溶性锌盐及任何所需的任选成分混 合，(ii)冷冻干燥该混合物。另外，本专利技术提供制备药用组合物水溶液的药盒，它包含装有 上述冻干组合物的第一个容器及装有其生理学上可接受溶剂的第二个容器。此外，本专利技术的再一方面包括包含以下步骤的方法复制所述 冻干组合物；将复制组合物给予需要溶解血凝块的患者。专利技术详述按照本领域技术人员已熟知的标准重组表达方法，可使用各 种宿主-载体系统表达纤溶酶或NAT多肽的编码序列，由此获得用于 所述组合物的纤维蛋白溶解活性多肽。所述系统包括但不限于真核 生物细胞系统如感染病毒(如牛痘病毒、腺病毒等)的哺乳动物细胞系 统；感染病毒(如杆状病毒)的昆虫细胞系统；微生物如含酵母菌载体 的酵母菌；或原核生物细胞系统如用噬菌体DNA、质粒DNA或粘 粒DNA转化的细菌(如大肠杆菌)。这些载体的表达元件在其强度和 特异性上各不相同。根据所使用的宿主-载体系统，可使用众多合适 转录和翻译元件中的任何一种元^f牛。因其效率较高，优选采用酵母表达系统(如巴斯德毕赤酵母0/c/n'a / oyto/'/》)进行重组表达，这类系t^的详细描述可见美国专利第4,855, 231号(Stroman等)、美国专利第4,812,405号(Lair等)、美国专利 第4,818,700号(Cregg等)、美国专利第4,885,242号(Cregg)及美国专 利第4,837,148号(Cregg)，它们的公开内容通过引用结合到本文中。 纤溶酶在所述系统中的表达通常涉及SEQ ID NO: 5的DNA分子， 它编码成熟多肽(核苦酸784-1392)之外还编码前原序列(核 香酸l-78本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种药用组合物，它在药学上可接受的缓冲剂中包含金属蛋白酶纤维蛋白溶解剂、锌稳定剂以及任选的增量剂，其中金属蛋白酶纤维蛋白溶解剂与锌结合，直接降解纤维蛋白，当与α－２－巨球蛋白复合时失活。

【技术特征摘要】
US 1999-10-1 09/4113351.一种药用组合物，它在药学上可接受的缓冲剂中包含金属蛋白酶纤维蛋白溶解剂、锌稳定剂以及任选的增量剂，其中金属蛋白酶纤维蛋白溶解剂与锌结合，直接降解纤维蛋白，当与α-2-巨球蛋白复合时失活。2. 权利要求1的药用组合物，其中所述锌稳定剂为选自石克酸锌、 醋酸锌和氯化锌的水溶性锌盐。3. 权利要求1的药用组合物，其中所述緩冲剂为柠檬酸或水溶性 柠檬酸盐。4. 权利要求l的药用组合物，其中所述增量剂为甘露醇。5. 权利要求1的药用组合物，其pH为6.5-8.5。6. 权利要求1的药用组合物，它为冷冻液体形式。7. 权利要求6的药用组合物，它任选包含水溶性钙盐。8. 权利要求7的药用组合物，其中所述水溶性钙盐选自醋酸钙、 硫酸钓及氯化4丐。9. 权利要求1的药用组合物，它为冷冻干燥的。10. 水性的权利要求1的药用组合物，其中 金属蛋白酶纤维蛋白溶解剂的含量为0.1-50 mg/ml; 锌稳定剂包含0.08-0.12 mM硫酸锌；药学上可接受的緩冲剂包含0.008-0.012 mM醋酸钓及95-110 mM 柠檬酸或柠檬酸钠；所述组合物的pH为7.4。11. 权利要求10的药用组合物，其中 金属蛋白酶的含量为10mg/ml; 柠檬酸的浓度为100 mM; 醋酸钧的浓度为0.01 mM; 硫酸锌的浓度为0.1 mM。12. 水性的权利要求l的药用组合物，其中 金属蛋白酶纤维蛋白溶解剂的含量为0.1-50 mg/ml; 锌稳定剂包含0.08-0.12 mM醋酸锌；药学上可接受的緩沖剂包含18-22 mM柠檬酸或柠檬酸钠，以及 0.02-0.06 mM Tris;存在增量剂，所述增量剂包含3%-6% (w/v)甘露醇；存在其他稳定剂，所述其他稳定剂包含0.008%-0.012% (w/v)的表 面活性剂；所述组合物的pH为8.0。13. 水性的权利要求1的药用组合物，其中 金属蛋白酶纤维蛋白溶解剂的含量为0.1-50 mg/ml; 锌稳定剂包含0.08-0.12 mM硫酸锌；药学上可接受的緩冲剂包含18-22 mM柠檬酸或柠檬酸钠，以及 3-6 mM Tris;存在增量剂，所述增量剂包含3%-6% (w/v)甘露醇； 存在其他稳定剂，所述其他稳定剂包...

【专利技术属性】
技术研发人员：BS肯德里克，B彼得森，
申请(专利权)人：安姆根有限公司，
类型：发明
国别省市：US[]