高含量丹参多酚酸盐在制备治疗脑缺血、缺氧药物中的应用制造技术

本发明专利技术提供了高含量丹参多酚酸盐在制备治疗脑缺血缺氧药物中的应用。所述的药物是以高含量丹参多酚酸盐为活性成份与药用载体组成的注射剂。在临床上有较大的应用价值。

【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于中药
具体涉及一种高含量丹参多酚酸盐在制备治疗脑缺 血、缺氧药物中的应用。
技术介绍
近年，心血管疾病的发病率逐年增加，据统计目前中国有高血压患者l亿多人， 冠心病患者一千多万。心血管疾病逐渐成为危害人民健康的第一杀手。寻找和研 制有效的心血管疾病治疗药一直是药物研究领域的重点。传统中药在本领域己显示了 很强的优越性，其中较为著名的是丹参及其制剂。丹参(Salvia miltiorrhiza Bunge) 是传统的活血化瘀中药之一,有长期的临床应用基础。丹参注射液是临床上治疗冠心 病、心绞痛、心肌梗塞、缺血性中风等疾病的常用药物。本专利技术人开展了丹参的水溶性成分的系统研究，发现丹参的水溶性有效成分均以 盐的形式存在于生药材中，这些成分主要为丹参乙酸镁及其同系物紫草酸镁、迷迭 香酸钠、丹参乙酸二钾、异丹参乙酸二钾、丹参素钾和紫草酸二钾等。通过活性筛选 和药理学研究发现丹参乙酸镁和它的同系物均为活性成分，其中以丹参乙酸镁药理 作用最强，它是丹参的主要活性成分，并首次阐明以丹参乙酸镁为主要成分的多酚酸 盐是丹参中最重要的有效活性部位，本专利技术人已申报专利200510028740.7。经本专利技术 人进一步研究，丹参多酚盐除了目前临床用于治疗冠心病等症状之处，又发现了它用 于治疗脑缺血和缺氧等的新适应症。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于研究设计高含量丹参多酚酸盐在制备治疗脑缺血、缺氧药物中的应用。本专利技术提供了一种高含量丹参多酚酸盐在制备治疗脑缺血、缺氧药物中的应用。本专利技术人将高含量丹参多酚酸盐5mg/kg大鼠静脉给药后，对大鼠大脑中动脉阻 断造成局部脑缺血模型的梗塞面积较生理盐水组减小(P<0.05)。高含量丹参多酚酸 盐10、 20mg/kg组能显著减小大鼠局部脑缺血造成的脑梗塞面积(PO.Ol)。另外将沙土鼠双侧颈总动脉结扎再灌注可造成全脑缺血再灌模型，静脉注射高含 量丹参多酚酸盐5、 10 mg/kg组沙土鼠分别在缺血再灌注6 h、 24 h和2 h的行为学评 分明显低于生理盐水组评分(P0.05)。高含量丹参多酚酸盐20mg/kg组在2h 、 24 h 评分明显低于同时间生理盐水组评分(P0.05)，在4、 6h评分与生理盐水组相比有显 著差异(PO.Ol)。高含量丹参多酚酸盐能降低沙土鼠在缺血再灌注24h累积死亡率。本专利技术人又取小鼠分别单次静脉注射高含量丹参多酚酸盐10mg/kg、 20mg/kg、 40mg/kg以及灯盏细辛注射液22.5mg/kg，5分钟后观察各组小鼠低压缺氧的存活时间。试验结果高含量丹参多酚酸盐和灯盏细辛注射液对低压缺氧小鼠存活时间的延 长作用有显著的统计学意义。本专利技术人还将高含量丹参多酚酸盐(12.5-400 (ig/ml)对去甲肾上腺素诱发的兔 基底动脉血管环收縮反应具有较显著的舒张作用，EC50值为58.5 pg/ml。同时在缺氧24hr复氧4hr后，PC-12细胞受到损伤，高含量丹参多酚酸盐100、 300、 1000 pg/ml可以明显改善细胞活力，对于PC-12细胞缺氧复氧损伤具有一定的 保护作用。因此上述结果表明高含量丹参多酚酸盐具有治疗脑缺血、缺氧的新适应症。 本专利技术的高含量丹参多酚酸盐是通过下列方法制备的(1) 丹参煎煮提取丹参药材粉碎后，依次以丹参生药重量的4倍量、2倍量和2倍量的水先后煎煮 三次，每次2小时，合并三次提取液，冷至室温，离心过滤，滤液备用；(2) 树脂分离 将滤液缓缓流过装有丹参生药重量的3倍量的1300—1大孔树脂吸附柱，吸附完 毕后，先用丹参生药重量的6倍量水洗去糖、蛋白质及无机盐；再以丹参生药重量的6倍量20%乙醇除去非丹参乙酸盐的丹参多酚酸盐类化合物，用薄层检测控制收集富 含丹参乙酸盐的50%乙醇洗脱液；(3) 二次醇沉将富含丹参乙酸盐的50%乙醇洗脱液，减压浓缩至1/10的丹参生药量后，搅拌 下徐徐加入9/10丹参生药量的无水乙醇，静置两小时后，离心弃去沉淀；滤液浓縮 至l/20的丹参生药量后，加入相当于19/20丹参生药量的无水乙醇，静置两小时，作为第二次醇沉，离心弃去沉淀，滤液减压浓縮至干，制得高含量丹参多酚酸盐；(4) 高含量丹参多酚酸盐粉针剂制备-高含量丹参多酚酸盐粉末溶于40倍量水，通过0.2-0.4 ii m的超滤膜，滤液灌装 于瓶内，冷冻千燥后即得产品。上述高含量丹参多酚酸盐粉针剂，其特征在于该粉针剂中丹参乙酸镁的含量 为50%-95%，多酚酸盐有效部位含量近100%。其中所述步骤(2)的树脂为1300-1大孔树脂、D101型、AB-8型或RA型树脂。本专利技术首次公开了高含量丹参多酚酸盐在制备治疗脑缺血缺氧药物中的应用。所 述的药物是以高含量丹参多酚酸盐为活性成份与药用载体组成的注射剂。在临床上有 较大的应用价值。附图说明图1.高含量丹参多酚酸盐对去甲肾上腺素或氯化钾诱导收縮的兔脑基底动脉血 管的舒张作用。图2.高含量丹参多酚酸盐对缺氧复氧后PC-12细胞LDH释放率的影响。 具体实施例方式实施l.对大鼠大脑中动脉阻断造成局部脑缺血模型的治疗作用试验目的观察高含量丹参多酚酸盐对大鼠大脑中动脉阻断造成局部脑缺血模型的影响。受试药物名称高含量丹参多酚酸盐(原料药) 提供单位上海绿谷制药有限公司批号050701含量含丹参乙酸镁为81. 1%配制方法高含量丹参多酚酸盐原料药用生理盐水分别配成5、 10、 20mg/ml， 临用时新鲜配制。对照样品名称灯盏细辛注射液 提供单位云南省生物制药厂批号20041224含量含总黄酮45mg(10ml/支)性状棕色澄明液体动物来源，种属，品系Wistar大鼠，由中国科学院上海实验动物中心提供，动物合格证号SCXK(沪)2003-0003，饲养合格证号SYXK (沪)2003-0029。 体重280土20g性别$动物总数50只试验方法大鼠用7%水合氯醛(400 mg/kg， ip)麻醉后，仰位固定于手术板上。颈部 正中切口，分离左侧颈总动脉(CCA)至暴露颈内动脉(ICA)、颈外动脉(ECA)分支， 仔细分离ECA并将其枕动脉、甲状腺上动脉分支用电凝器电凝并剪断，分离到 舌动脉和颌动脉分叉处结扎；分离ICA并将其颅外段唯一分支翼腭突动脉 (Pterygopalatine)结扎。用动脉夹夹住ECA自CCA发出的起始处，在ECA远端 靠结扎处剪开小口，插入一根直径为0.26111111的尼龙丝并疏松结扎，剪断ECA; 以镊子夹住ECA断端并拉直使尼龙丝在ICA部分的长度应为22 mm左右，说 明尼龙丝已到达ICA分支到大脑中动脉(MCA)处，阻断了MCA的血液供应；将尼龙丝固定后，缝合手术切口，同时给予生理盐水或试药。缺血6h后，将大鼠 断头处死，迅速取出大脑，去除小脑和脑干后用4。C生理盐水冲洗，去血污。将 大脑自后向前切为厚度为2mm的冠状切片，立即置于2XTTC生理盐水中，避 光37'C孵育30 min。然后用10%中性甲醛固定已染色脑片1 h。未受损的脑组 织染为红色，梗塞区则因线粒体损害而不染色，呈白色。将脑片拍照扫描，用计 算机辅助图象分析仪(T一90)按求不规则图形面积法测出每片脑片面积及梗塞 区的面积，计算出梗塞灶的面积占总面积的百分比。剂量设置本品本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种高含量丹参多酚酸盐在制备治疗脑缺血、缺氧药物中的应用。

【技术特征摘要】
1. 一种高含量丹参多酚酸盐在制备治疗脑缺血、缺氧药物中的应用。2、 根据权利要求1所述的一种高含量丹参多酚酸盐在制备治疗脑缺血、缺氧药 物中的应用，其特征在于所述的高含量丹参多酚酸盐是通过下列方法制备的-(1) 丹参煎煮提取-丹参药材粉碎后，依次以丹参生药重量的4倍量、2倍量和2倍量的水先后煎煮 三次，每次2小时，合并三次提取液，冷至室温，离心过滤，滤液备用；(2) 树脂分离-将滤液缓缓流过装有丹参生药重量的3倍量的1300I大孔树脂、D101型、AB-8 型或RA型树脂吸附柱，吸附完毕后，先用丹参生药重量的6倍量水洗去糖、蛋白质 及无机盐；再以丹参生药重量的6倍量20%乙醇除去非丹参乙酸盐的丹参多酚酸盐类 化合物，用薄层检测控制收集富含丹参乙酸盐的50%乙醇洗脱液；(3) 二次醇沉将富含丹参乙酸盐的50%乙醇洗脱液，减压浓縮至1/10的丹参...

【专利技术属性】
技术研发人员：王逸平，刘梅英，
申请(专利权)人：绿谷集团有限公司，上海绿谷制药有限公司，上海绿谷生命园医药有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]