冻干甲型肝炎-水痘减毒联合疫苗及其生产方法技术

本发明专利技术提供一种冻干甲型肝炎－水痘减毒联合疫苗及其生产方法，联合疫苗具有与其单价疫苗同样良好的安全性和免疫原性，可有效地预防甲型肝炎和水痘。一次免疫接种即可有效地预防两种疾病，可以降低疫苗成本、提高疫苗接种效率、减少多次注射所带来的不良反应，可以减少疫苗接种次数而达到预防多种疾病的目的。

【技术实现步骤摘要】
本专利技术提供一种冻干甲型肝炎一水痘减毒联合疫苗，本专利技术还提供了 上述联合疫苗的制备方法，以及所说的联合疫苗的保护剂，属于疫苗制备

技术介绍
预防性疫苗在全球范围内的应用使传染病得到了有效控制，大大降低 了许多常见传染病的发病率和死亡率。随着分子生物学、细胞生物学等相 关学科的飞速发展，新疫苗不断地被研究和开发。但是，疫苗种类增多必 将伴随一系列问题，儿童接种次数增加，疫苗管理也较困难。每个儿童在其学龄前的7年时间中，大约需要去接种疫苗的诊疗所多达20余次。这 不仅大大增加了儿童接种疫苗的皮肉之苦和增加了产生疫苗副反应的机 会、对医务工作者和儿童的家长带来了不便，而且也相应地增加了疫苗的 使用和管理方面的困难，容易造成漏种等，直接影响到预防效果。因此， 联合免疫的方法不仅被普遍使用，而且越来越受到重视。联合疫苗为儿童 免疫规划的连续、简化和扩大所必需。自1991年由联合国儿童基金会和世 界卫生组织等国际组织发起并推广儿童疫苗计划(CVI)以来，世界上 许多从事疫苗研究与开发的实验室和公司都在致力于联合疫苗的研制。由于水痘减毒活疫苗是唯一获准用于预防人类疱疹病毒感染的疫苗， 且甲型肝炎灭活疫苗与水痘减毒活疫苗存在免疫针次和程序上的冲突，故 而进行冻干甲型肝炎_水痘减毒联合疫苗研究首选采用甲型肝炎减毒活疫苗。目前，获得批准上市的甲型肝炎减毒活疫苗只有中国的L一A — 1减毒 株和H2减毒株，国外的减毒疫苗仍处于研究阶段。迄今尚未见使用活的减毒甲型肝炎疫苗病毒生产冻干甲型肝炎一水痘 减毒联合疫苗的报道。
技术实现思路
本专利技术提供一种冻干甲型肝炎一水痘减毒联合疫苗，具有多联多价的、 耐热稳定的特点。本专利技术还提供一种冻干甲型肝炎一水痘减毒联合疫苗的制备方法，适 用工业化生产。本专利技术公开的冻干甲型肝炎一水痘减毒联合疫苗，含有甲型肝炎减毒 活病毒、水痘减毒活病毒和保护剂。其中所说的甲型肝炎减毒活病毒是甲型肝炎减毒活病毒L-A-1疫苗株， 病毒滴度不低于6.5LogCCID5。/ml;水痘减毒活病毒是水痘减毒活病毒OKa 疫苗株，病毒滴度不低于4000PFU/ml。用于冻干甲型肝炎一水痘减毒联合疫苗的保护剂成分及浓度为海藻 糖30—100g/1、右旋糖酐10—60g/1、谷氨酸钠5—10g/1、抗坏血酸l一3g/1、 尿素5—20g/1，甘露醇3 — 10g/l或山梨醇3 —15g/l。还有以下原料L-精氨酸为0—3g/1。 本专利技术联合疫苗的制备方法，包括以下步骤1)分别提供并混合甲型肝炎减毒活疫苗病毒原液和水痘减毒活疫苗病 毒原液，得到甲型肝炎减毒活病毒和水痘减毒活病毒的混合液；2) 在步骤1)中得到的混合液中加入保护剂并混匀，得到甲型肝炎一水痘减毒联合疫苗混合液；3) 冷冻干燥步骤2)中得到的含有保护剂的联合疫苗混合液，得到冻 干甲型肝炎 一 水痘减毒联合疫苗。具体步骤如下制备冻干保护剂，首先按所示浓度将下列成分溶解于37i:注射用水中 (lOOOml):谷氨酸钠65-130g、抗坏血酸13-40 g、尿素65-260g、 L-精 氨酸0-40g、山梨醇40-130 g和(或)甘露醇40-195g，并用0. 1NHCL调整 PH值至7. 0。经0. 22Mm滤膜过滤除菌后得到保护组分A。然后称取海藻糖500. 0g溶解于温度为37。C左右注射用水补至1000ml， 经0. 22to滤膜过滤除菌后得到保护剂组分B。最后再将300. 0g右旋糖酐40溶解于温度约为37'C注射用水补至 1000ml，经116。C高压蒸汽灭菌40分钟后得到保护剂组分C。可以通过简单的机械混合方法，制备本专利技术的甲型肝炎一水痘减毒联 合疫苗混合液。按照1: (l 2) (V/V)的比例将病毒滴度为大于 7. OLogCCID5。/ml的甲型肝炎疫苗原液与病毒滴度为大于6000PFU/ml的水 痘疫苗原液混合，然后再加入冻干保护剂，轻轻混合均匀。使用作为疫苗稀释液的199综合培养液稀释至联合疫苗中各组分所需 含量或浓度，即得到甲型肝炎一水痘减毒联合疫苗混合液。冷冻干燥分装好的上述混合液，其条件是一3(TC至一55'C低温条件 预冷冻3至7小时，一3(TC至35。C条件下真空干燥8至16小时。与冻干前相比，冻干后甲型肝炎疫苗病毒滴度虽稍有下降，但下降幅度不大于0. 5LogCCIDM/ml，水痘下降不大于0. 5 LogPFU5Q/ml。按照世界卫生组织(WHO)及国家药品监督管理局(SDA)有关联合疫 苗及冻干制剂制检规程及质量标准要求，对本专利技术所提供的联合疫苗进行 全面检定，其结果各项质量指标均达到或超过世界卫生组织(WHO)及国家药 品监督管理局(SDA)所规定的制检规程要求。其中甲型肝炎病毒滴度为不 低于6. 5 LogCCID5G/ml，水痘病毒滴度为不低于4000FPU/ml。联合疫苗中组分间相互干扰作用研究将冻干甲型肝炎疫苗复溶液体和冻干水痘疫苗复溶液体混合，感染2BS细胞，检测病毒滴度。将同一批次制得的冻干甲型肝炎一水痘减毒联合疫苗、冻干甲型肝炎疫苗和冻干水痘疫苗分别感染2BS细胞，检测病毒滴度。目的是检测混合后甲型肝炎和水痘两种活性病毒在同一个环境下有无相互促进、竞争或抑制等作用。甲型肝炎病毒滴度检测方法采用了荧光染色法，水痘病毒滴度检测方法采用了微量细胞病变法。试验结果见表1，联合疫苗中病毒滴度与单价苗一致。表明联合疫苗中活性组分甲型肝炎病毒和水痘病毒无相互促进或抑制现象。表l水痘、甲型肝炎原液混合后病毒滴度与其单价疫苗原液病毒滴度的比较<table>table see original document page 7</column></row><table>冻干甲型肝炎疫苗20070626-2 7.33冻干水痘疫苗20070626-5 4.0冻干甲型肝炎一水痘减毒联合疫苗20070821-3 3.75 6.67冻干甲型肝炎疫苗20070821-2 6.5冻干水痘疫苗20070821-5_^_冻干甲型肝炎一水痘减毒联合疫苗20070920-3 3.75 7.0冻干甲型肝炎疫苗20070920-2 7.0冻干水痘疫苗_20070920-5_^_同步混合感染HAV和VZV的标本电镜检査显示，HAV感染29天左右, 达到增殖最高峰。感染VZV2天后,细胞内可见到少量无包膜的VZV,增殖 高峰期出现在8天。混合感染HAV 、 VZV与单独感染HAV和VZV的电 镜检测结果无明显差异。结果见图l。 联合疫苗稳定性试验三批联合疫苗及其单价疫苗组分别放置37°C 3天、7天、9天、13天 或7天、9天，取出3-5支样品混合，以37放置前的疫苗样品作为实验 对照组，滴定甲型肝炎和水痘，方法为上述的荧光染色法和微量细胞病变 法。37'C放置3天后的甲型肝炎病毒滴度下降不高于0.5 Lg。水痘减毒活 病毒37。C放置7天后滴度下降不高于1.0Lg。结果见表2、表3，符合规定 要求。表2冻干甲型肝炎一水痘减毒联合疫苗甲型肝炎病毒稳定性试验结果_Lot 0 3 7 9 1320070920-3 7.0 6.67 6.67 6.5 6.5表3冻干甲型肝炎一水痘减毒联合疫苗水痘病毒稳定性试本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种冻干甲型肝炎－水痘减毒联合疫苗，含有甲型肝炎减毒活病毒、水痘减毒活病毒和保护剂。

【技术特征摘要】
1. 一种冻干甲型肝炎-水痘减毒联合疫苗，含有甲型肝炎减毒活病毒、水痘减毒活病毒和保护剂。2、 根据权利要求1的联合疫苗，其中所说的甲型肝炎减毒活病毒是甲型肝炎减毒活病毒L-A-1疫苗株；水痘减毒活病毒是水痘减毒活病毒OKa疫苗株。3、 根据权利要求1的联合疫苗，特征在于所说的甲型肝炎减毒 活病毒滴度不低于6.5LogCCID5。/ml;水痘减毒活病毒滴度不低于 4000PFU/ml。4、根据权利要求1的联合疫苗，其特征在于保护剂的成分及浓度 为海藻糖30 — 100g/1、右旋糖酐10—60g/l、谷氨酸钠5 —10g/l、抗 坏血酸l一3g/1、尿素5—20g/1，甘露醇3 —10g/l或山梨醇3 —15g/l。5、 ...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵晓琳，刘令九，刘景晔，付炜，王文忠，屈翠波，王玮，李育红，李淑焱，蔡晖，梁本，李莉，
申请(专利权)人：长春生物制品研究所，
类型：发明
国别省市：82[中国|长春]