本发明专利技术涉及包含一种Ｔ１Ｒ（Ｔ１Ｒ１或Ｔ１Ｒ２）的胞外部分或其变体或片段和另一种Ｔ１Ｒ（Ｔ１Ｒ１或Ｔ１Ｒ２）的跨膜部分或其变体或片段的嵌合味觉受体，优选与Ｔ１Ｒ３多肽和合适的Ｇ蛋白相关联。这种嵌合味觉受体可用于鉴定甜味和鲜味配体的测定法中，以及用于鉴定甜味和鲜味增强剂的测定法。此外，这些嵌合味觉受体和表达该受体的细胞可用于作图和确定特定的甜味和鲜味配体在哪里与它们各自的受体相互作用，并阐明受体激活的机制。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及新的嵌合的人和啮鼠动物的味觉受体多肽、编码核酸 序列、表达这些嵌合味觉受体多肽的细胞，以及它们在鉴定味觉调节 剂，尤其是甜味和鲜味调节剂中的用途。
技术介绍
人T1R家族味觉受体包括hTlRl、 2和3。 T1R属于C类G-蛋白偶 联受体，并且每种C类GPCR由一个大的N端胞外结构域和一个C端7 跨膜结构域组成。已经普遍知道hTlRl和hTlR3形成了调节鲜味转导 的异聚受体(heteromeric receptor)并且其识另寸鲜p木促p木剂(tastant )，而hTlR2和hTlR3形成调节甜味转导的异聚受体并且其 识别甜味促味剂。因此已知鲜味受体(hTlRl/hTlR3 )和甜味受体UTlR2/hTlR3)均具有相同的亚基hTlR3。本专利技术的简述和目标本专利技术的一个目标是产生嵌合味觉受体多肽，其响应鲜味和/或甜 味刺激和/或增强由其它化合物引起的鲜p木和甜p木(umami and/or sweet)。本专利技术的另 一个目标是在测定法中使用这种嵌合味觉受体多肽， 用于鉴定本身调节甜味或鲜味和/或增强由其它化合物引起的鲜味和 甜味的化合物。更特别地，本专利技术的一个目标是通过组合T1R1和T1R2味觉受体 基因的部分而产生编码嵌合味觉受体的DNA融合体，并且与相同或不 同物种的TlR3味觉受体共表达而产生响应甜味和/或鲜味刺激或增强 由其它化合物引起的鲜味和甜味的嵌合味觉受体。更特别地，本专利技术的一个目标是产生嵌合味觉受体，其通过这样产生将T1R1多肽，或编码DNA，优选hTlRl或mTlRl或rTlRl的胞 外结构域的全部或部分与T1R2多肽或编码DNA，优选hTlR2、 rTlR2 或mTlR2或其部分的跨膜结构域的全部或部分组合，而产生鲜味-甜味 嵌合味觉受体多肽或编码DNA。而且更特别地，本专利技术的一个目标是产生嵌合味觉受体，其通过 这样产生将T1R2多肽或编码DNA，优选hTlR2、 rTlR2或mTlR2的 胞外结构域的全部或部分与T1R1多肽或编码DNA，优选hTlRl或mTlRl 或rTlRl的跨膜结构域的全部或部分组合，而以产生嵌合的甜味-鲜味 受体多肽或编码DNA。本专利技术的另一个目标是提供包含于SEQ ID NO: 1-4中的特异性 hTlRl-2和hTlR2-1核酸序列和多肽序列。本专利技术的另一个目标是在合适的宿主细胞中，优选HEK-293细胞 中表达这些编码嵌合味觉受体的核酸序列，其另外优选表达G蛋白和 T1R3核酸序列。本专利技术的另一个目标是在测定法中使用这些细胞，用于鉴定调节 甜味或鲜味的分子，例如鲜味和甜味味觉配体以及鲜味和甜味增强剂。附图简述附图说明图1包含了称为hTlR2-l的根据本专利技术的嵌合的甜味-鲜味受体的 核酸序列(SEQ ID N0:1)，所述hTlR2-1包含与人T1R1的跨膜结构 域融合的人T1R2的胞外结构域。图2包含了称为hTlR2-l的根据本专利技术的嵌合的甜味-鲜味受体的 多肽序列(SEQ ID NO: 2)，所述hTlR2-l包含人T1R2的细胞外部分 和人T1R1的跨膜部分。图3包含了称为hTlRl-2的根据本专利技术的嵌合味觉受体的核酸序 列(SEQ ID NO: 3 )，所述hTlRl-2包含hTlRl的胞外结构域和hTlR2 的跨膜结构域。图4包含称为hTlRl-2的根据本专利技术的嵌合受体的多肽序列(SEQID NO: 4 )，并包含本专利技术中使用的嵌合的G蛋白G16gust44的蛋白质 序列(SEQ ID NO: 5)，嵌合的G蛋白G16gust44含有融合至味导素 (gustducin)的44羧基端氨基酸的Gal6的N-端部分。图5包含了天然的T1R2/T13、 T1R1/T1R3，以及嵌合的甜味-鲜味 hTlR2-l/TlR3和嵌合的鲜味-甜味hTlRl-2/TlR3的示意图。图6包含了人和小鼠以及大鼠的T1R1、 T1R2和T1R3的核酸序列 和蛋白质序列(SEQ ID NO: 6-17)。图7包含了使用HEK-293细胞的钙成像试验的结果，该细胞表达 图1中的嵌合hTlR2-l受体，结果显示除了环己氨基磺酸盐外，这种 嵌合味觉受体响应试验的所有增甜剂(蔗糖、果糖、D-Trp、 Acek、甘 素(Dulcin))。图8包含了比较不同增甜剂激活天然的hTlR2/hTlR3受体相较于 嵌合hTlR2-l (SEQ ID NO: 2 )的有效浓度(EC50)的试验结果。图9包含了试验结果，结果显示环己氨基磺酸盐增强了 HEK-293 细胞系中的天冬酰苯丙氨酸曱酯(aspartame )应答，所述细胞系稳定 表达主体嵌合的hTlR2-1和未经修饰的hTlR3序列。图10包含了一个试验，该试验显示环己氨基磺酸盐增强了在稳定 的HEK-293细胞系中的D-色氨酸应答，所述细胞系表达hTlR2-l嵌合 味觉受体和未经修饰的hTlR3序列。图11包含了一个试验，该试验显示环己氨基磺酸盐增强了在稳定 的细胞系中的蔗糖应答，所述细胞系表达主体hTlR2-l嵌合味觉受体 和未经j奮饰的hTlR3序列。图12包含了一个试验，该试验显示环己氨基磺酸盐增强了在稳定 的HEK-293细胞系中的果糖应答，所述细胞系表达主体嵌合受体 hTlR2-1和未经修饰的hTlR3序列。图13包含了一个试验，该试验显示环己氨基磺酸盐增强了在稳定 的HEK-293细胞系中由专利鲜味激动剂化合物(称为'807 )引起的应 答，并显示鲜味化合物'807激活了嵌合的hTlR2-l味觉受体，其中 所述细胞系表达主体嵌合受体hTlR2-1和未经修饰的hTlR3序列。图14包含了一个试验，该试验显示专利鲜味配体激动剂化合物 '807增强了表达hTlR2-l和hTlR3的稳定的HEK-293细胞系中的天 冬酰苯丙氨酸曱酯应答。图15包含了一个试验，该试验显示表达嵌合受体hTlRl-2(SEQ ID NO: 3)和rTlR3受体的稳定的HEK-293细胞系的应答，并显示这种嵌 合受体响应鲜p未配体L-Glu、L-Asp和L-AP4，以及显示了该响应由IMP 或GMP的存在增强。图16显示MSG激活根据本专利技术的嵌合的hTlR1-2/rTlR3受体通过 IMP增强。专利技术详述在具体描述本专利技术前，给出了以下定义。术语"T1R"族包括这样的多态变异体、等位基因、突变体和同系 物(l)与下文中，以及Zuker(同上)(2001)和Adler (同上)(2001) 申请案中公开的T1R具有约30-40 %的氨基酸序列同一性，更特别是 约40、 50、 60、 70、 75、 80、 85、 90、 95、 96、 97、 98或99 %的氨 基酸序列同一性，所述申请案通过引用约25个氨基酸，优选50-100 个以上的氨基酸的窗口作为参考；(2)特异性结合对抗包含选自下文中 公开的T1R,及其保守修饰的变体的免疫源的抗体；(3)在严格条件 下与选自在下文中公开的T21 DNA序列，及其保守修饰的变体的序列 特异性杂交(大小为至少约100，任选至少约500-1000个核苷酸)； (4)含有与选自下文中公开的T1R氨基酸序列的氨基酸序列至少约4 0 %—致的序列；或者(5)由在严格杂交条件下与所述T1R序列本文档来自技高网...
【技术保护点】
杂合味觉受体，其包含一种人Ｔ１Ｒ的胞外结构域或其部分和另一种Ｔ１Ｒ的跨膜结构域或其部分。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：X李，F张，H许，Q李，
申请(专利权)人：塞诺米克斯公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]
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