用于预防或者治疗皮肤缺损的组合物及其使用方法技术

本文描述的是治疗或者预防个体皮肤缺损的组合物和方法。

【技术实现步骤摘要】
用于预防或者治疗皮肤缺损的组合物及其使用方法用于预防或者治疗皮肤缺损的组合物及其使用方法 相关申请的交叉引用本申请要求享有2007年4月24日提交的美国临时申请序列号60/913,576 的优先权。本申请因此完整引入其全部教导作为参考。'
技术介绍
皮肤创伤的最优愈合需要复杂生物学和分子事件的良好协调的整合，所述 事件包括细胞迁移和增殖，和细胞外基质(ECM)沉积，血管发生和重塑。但是， 在许多慢性疾病例如糖尿病中，愈合过程的这种有序进展被损伤。常见的慢性 皮肤创伤包括糖尿病足溃疡，褥疮，和静脉淤血溃疡，而糖尿病渍疡是足部和 腿截肢的最常见原因。在世界范围内1.5亿糖尿病个体当中，15%患有足溃疡， 这经常变为无法愈合的慢性创伤。过去数十年中在预防慢性创伤的发病和致残方面未显示任何进展。对这些 慢性创伤的现有最佳治疗方式只获得50%的治愈率，皿经常是短暂的。在造 成无法愈合创伤的许多因素中，来自炎性细胞和成纤维细胞的细胞因子释放的 减少和降低的血管发生是非常重要的。最近，血小板衍生生长因子-BB (PDGF-BB)已经被用于糖尿病溃疡的临床试验，具有与常规治疗相比在20周时 创伤闭合的发生提高15%的最佳效果。显然，需要新的疗法来促进慢性仓怖的 愈合。专利技术推，此处描述的是治疗或者预防个体皮肤缺损的组合物和方法。本专利技术的优点 部分在以下描述中阐明，部分是从描述中可以明显得出，或者可以通过实践下 面描述的方面获得。通过所附权利要求特别指出的要素和组合实现和获得下面 所述的优点。应该清楚上述一般描述和下列详细描述只是示范性和说明性的， 不是限制性的。附图简述被弓l入并组成本说明书一部分的附图解释下述几个方面。附图说明图1显示与对照培养基或者成纤维细胞相比，间充质干细胞(MSC)iSS非糖尿病(A&B)或者糖尿病小鼠(C&D)中切割创伤的闭合，增加表皮再植，结构再生和细胞构) ^E-G)。图2显示移入创面的MSC分化为表达细胞角蛋白的角质形成细胞(A)，并 形成汗彼脂腺Wf结构(B&C)。图3显示与预处理培养基或者成纤维细胞培养基相比，MSC条件培养基促 进皮肤角质形成细胞生长(A)、迁移(B)和附着(C&D)。图4显示与载体培养基或者成纤维细胞治疗的创伤相比，MSC治疗的创伤 显示增加的血管供应(A)显示全皮肤固定后创面的血管系统；(B)显示内皮细胞 的创伤切面的免疫染色；(C)毛细管密度创伤的定量。图5显示与预处理培养基或者成纤维细胞条件培养基相比，MSC条件培养 基iSS HUVEC迁移、增殖(B)和血管形成。图6显示创伤愈合中MSC的旁分泌效果。(A)实时PCR分析显示与成纤维 细胞比较，细胞因子和ECM分子在MSC中的表达水平。(B)低氧治疗后在载体 对照、成纤维细胞或者BM-MSC条件培养基中IGF-1的ELISA检测。(C)第7 天创面IGF-1的RT-PCR分析。(D)MSC条件培养基的注射促进创伤闭合。图7显示MSC或者成纤维细胞条件培养基的抗体阵列分析显示细胞因子明 显不同的蛋白表达。图8显示Western印迹分析，表明在成纤维细胞或者MSC条件培养基或者 治疗的创伤中VEGF-a、血管生成素(angiopoietin) (Ang) 1和2的水平。图9是FACS分析，表明MSC治疗的创伤显示Flk-l+或者CD34+细胞分 数的增加和CD3+细胞分数的减少。图10显示创伤切面的免疫染色，表明与载体培养基或者成纤维细胞治疗的 创伤相比，MSC治疗的创伤具有增加的CD68+巨噬细胞和 咸少的CD3+T细胞。图11是(A)创伤消化的FACS分析，显示在第2周接受混合的DiI-角质形成 细胞和皮肤成纤维细胞(粉红色峰)或者DiI-角质形成细胞和BM-MSC (红色 峰)的创面的DiI-角质形成细胞分数，未接受细胞移植的创伤消化被用作阴性 对照(灰色峰)；和(B)在第1和2周接受混合的DiI-角质形成细胞和皮肤成纤维 细胞(粉红色峰)或者DiI-角质形成细胞和BM-MSC的创面的平均DiI-角质形 成细胞分数(nHP〈0.01)。专利技术详述在本化合物、组合物和/或方法被公开和描述前，应当理解下面描述的方面 不限于特定的化合物，合成方法，或者这样的用途当然可以改变。还应理解此 处使用的术语只是为了描述特定方面而不是用于限制。 .在下面的说明书和权利要求中，将对许多术语做出注释，这些术语被定义 为具有以下的含义必需注意到，在说明书和所附权利要求中使用时，单数形式'一个、一种 和货'包括复数指称，除非上下文另外明确指出。因此，例如，一种药物载体 的含义包括两种或者多种载体的混合物，等等。个体'表示一个个体。个体可以是哺乳动物例如灵长类动物或者人类。术 语个体'可以包括家养动物，包括但不限于，猫、狗等等，家畜(例如，牛，马，猪，绵羊，山羊，等等)，和实验动物(例如，小鼠，兔，大鼠，豚鼠，等等)。接触表示通过至少一种物质与另一种物质紧密物理接触的暴露的情况。 例如，接触可以包括将一种物质例如药剂与细胞接触。治疔'表示给药患有不希望的病症(例如，皮肤缺损)的个体或者系统组 合物以减轻不希望的病症的症状。预防表示消除感染不希望的病症(例如， 皮，损)的可能性。预防还包括降低感染不希望的病症的可能性。有效量'表示达到希望的效果所需的治疗量。诱导被定义为希望的效果或者结果的起始。增强被定义为增加或者提高 先前存在的情况。 I.间充质干细胞和割牛培养基此处描述的是预防或者治疗个体中存在的皮肤缺损的间充质干细胞，源自间充质干细胞的剝牛培养基或者其化合物的组合。间充质干细胞(Msc;)还称为骨髓基质细胞或者间充质祖细胞。此处使用的MSC在标准培养条件下与塑料附 着，表达CD105和CD90，缺乏CD45的表达，并且可以在体外分化为成骨细 胞，脂肪细胞和软骨细胞。MSC可以衍生自许多来源。例如，MSC可以源自非骨髓组织例如脂肪和 其他组织。 一方面，间充质干细胞源自骨髓。 一方面，骨髓(BM)MSC是在添 加来自动物或者人的血浆或者血清的培养基中培养一段时间(数小时，数天，数周)后，与无包被(或者包被细胞外基质分子)的聚苯乙烯或者玻璃组织培 养皿附着的BM细胞，所述培养基添加或者不添加生长因子或者其他营养物。 骨髓细胞包括所有源自骨髓的细胞，或者一部分细胞例如有核细胞。骨髓细胞 的来源还可以根据个体改变。因此，骨髓细胞可以源自人，猪，狗，亂小鼠， 马，和其他哺乳动物。一方面，骨髓细胞来源的间充质干细胞可以包括内皮祖 细胞。间充质干细胞的分离和培养是本领域已知的(Mackay等人，Tissue Eng. 4: 415428 (1988));William等人，Am Surg.65:22-26(1999); Pittenger等人，Science 284: 143-147 (1999》。衝必中刷骨髓或者用缓冲液或者细胞培养 涤骨磨片可以获 得骨髓细胞。利用免疫耗竭通过去除血系细胞可以从骨髓细胞的悬浮液中分离 BM-MSC。然后Mil将细胞置于新的培养皿板上培养可以扩增分离的MSC。短语源自间充质干细胞的条件培养基此处被定义为包含一种或者多种成 分的培养基，所述成分不存在于起始细胞培养基中本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种预防或者治疗个体皮肤缺损的方法，所述方法包括给药皮肤缺损一种包括间充质干细胞、源自间充质干细胞的条件培养基或者其组合的组合物。

【技术特征摘要】
US 2007-4-24 60/9135761.一种预防或者治疗个体皮肤缺损的方法，所述方法包括给药皮肤缺损一种包括间充质干细胞、源自间充质干细胞的条件培养基或者其组合的组合物。2、 如权禾腰求l所述的方法，其特征在于皮肤缺损包f酷皮纹、鹏、群 斑或者蹙额纹。3、 如权利要求l所述的方法，其特征在于皮l^缺损包括切口或者溃疡。4、 如权利要求l所述的方法，其特征在于组合物被局部施用于皮肤缺损。5、 如权利要求1所述的方法，其特征在于组合物被注射到皮肤缺损。6、 如权利要求l所述的方法，其特征在于间充质干细胞源自骨髓。7、 如权利要求1所述的方法，其特征在于相对于给药组合物前皮肤缺损中 的量，给药皮肤缺损组合物后内皮祖细胞、巨噬细胞或者其组合的量增加。8、 如权利要求l所述的方法，其特征在于条件i音养基来自低氧或者含氧量 正常条件下的间充质干细胞。9...

【专利技术属性】
技术研发人员：Y吴，爱德华E特雷德杰特，L陈，
申请(专利权)人：Y吴，爱德华E特雷德杰特，L陈，
类型：发明
国别省市：HK[中国|香港]