一种治疗人乳头瘤病毒１８型引发的肿瘤的多肽药物，涉及一种生物医学领域，特别是一种关于人乳头瘤病毒１８型引发的肿瘤的多肽药物。其特征在于它的氨基酸序列为：氨基－ＶＡＷＤＳＶＹＹＭ－羧基，利用赖氨酸具有两个氨基、一个羧基的特点，以赖氨酸为接头，所形成的特殊连接方式。本发明专利技术具有便于运输保存和自动化批量生产的优点，它具有激活特异性细胞毒性Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）的能力，该特异性ＣＴＬ细胞具有杀伤、溶破带有人乳头瘤病毒１８型相关肿瘤标志的靶细胞，效果明显，而且无毒副作用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种生物医学领域，特别是一种关于人乳头瘤病毒18型引发的肿瘤 的多肽药物。
技术介绍
人乳头瘤病毒的英文全称是human papilloma virus，简称HPV。宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤，全球范围内，宫颈癌是女性癌症死因的第二杀 手，每年新增约50万病例，其中有20%发生在中国。好发年龄呈双峰状，35 39岁和60 64岁。近年已明确，几乎所有的宫颈癌都由人乳头瘤病毒引起。其中，超过2/3的宫颈癌病 例可归咎于两种类型的HPV 16型和18型。发生宫颈癌的病因至今尚未完全明了，可能与性生活紊乱，过早性生活，早年分 娩，多产，地理环境等因素有关。分子生物学研究结果显示90%以上的宫颈癌伴有HPV感 染。宫颈癌以鳞状细胞癌最为多见，其次为腺癌和腺鳞癌等。高危型人乳头瘤病毒的感染 是诱发宫颈癌的必要条件，几乎所有的宫颈鳞癌中都可以检测到HPV-DNA的存在。目前治疗宫颈癌的只能采用手术、放疗，或两者联合使用。近年来，在上述方法基 础上加免疫治疗受到重视并取得较好的效果。单独应用一种治疗方法的并发症发生率为 3 11%，联合应用两种治疗方法的并发症发生率达到30%或以上。手术和放疗各有优缺 点。目前的趋势是强调综合治疗，把手术、放疗和化疗进行有机的结合，以达到提高治疗效 果、改善生活质量、减低并发症、尽可能保留生育功能和卵巢功能的目的。综合治疗宫颈癌的方法，归纳起来有以下几种1)手术治疗法切除标本的正常组织边缘距离肿瘤病灶最少达Icm以上。其缺点 是损伤大，不能凭肉眼发现受HPV病毒感染的细胞，因此，被感染的细胞清除不彻底。2)放射治疗法放疗包括外照射和腔内放疗。适用于各期患者，常和手术、化疗配 合使用。该方法主要缺点是虽然能够杀死受HPV病毒感染的细胞，但是，射线对正常组织 细胞损伤较大。3)化学治疗法化疗可用于术前、术后，或放疗前后，也常与放疗同时进行，以提 高放疗的疗效。迄今为止，已报道有M种细胞毒药物用于进展或复发宫颈癌的化疗，单药 化疗以顺钼的研究最广泛，疗效也最肯定。该方法主要缺点是虽然能够杀死受HPV病毒感染的细胞，但是，化疗药物对正常 组织细胞的毒性较大，出现诸如过敏性休克、呕吐、白细胞减少、抵抗力下降等副作用。
技术实现思路
本专利技术的目的就是提供一种治疗人乳头瘤病毒18型引发的肿瘤的多肽药物或疫 苗，它可以专门针对受HPV18型病毒感染的细胞进行有效地破坏，而且对人体无毒副作用。本专利技术的目的是通过这样的技术方案实现的，它的氨基酸序列为氨基 端-VAWDSVYYM-羧基端；利用赖氨酸具有两个氨基、一个羧基的特点，以赖氨酸为接头，所连接的特殊方式。正常人体的外周血单核细胞(简称PBMC) —般不具有特异性溶破受到HPV18型病 毒感染的细胞的功能，本专利技术提供的多肽在体外与HLA-A*0201阳性人体的外周血单核细 胞共同孵育，可以增加这些外周血单核细胞转化为细胞毒性T淋巴细胞(简称CTL)的数量 50% -70%，还可以诱导激活CTL溶破HPV18型阳性的肿瘤细胞，溶破率为60% -80%。本专利技术的基本的氨基酸序列来源于GENBANK报道的氨基酸序列，采用蛋白质表位 分子设计的原理和方法，对HPV18型的E2蛋白序列进行CTL表位分析，主要是基于量化基 序法确定E2蛋白的CTL表位，具体做法是从E2蛋白第1位氨基酸残基开始，逐个截取九 肽段或十肽段，共获得357条九肽段和356条十肽段。对于每一条肽段，在结合矩阵中查找 各位点氨基酸残基的结合系数，这九肽或十肽结合系数相乘后再乘以标准系数，即为该九 肽或十肽与HLA-A*0201的结合系数。最后，选取结合系数最高的几条肽段作为候选CTL表 位。以此方法找到了具有功能的本专利技术所述的氨基酸序列，如氨基端-VAWDSVYYM-羧基 端。合成本专利技术所述的氨基酸序列方法均是现有的成熟技术，它是按照如下的方法制 成的采用标准Fmoc方案，起始选用0. 0125mmol, PSC树脂(ABI公司生产，批号A5F013)， 分别按照权利要求1、2、3或4所述的序列特征，使肽链从C端逐个向N端延伸，各氨基酸原 料(美国ABI公司生产)的用量为0. Immol0各种氨基酸保护基团是各氨基酸的alpha氨 基为 Pmoc 保护，其余侧链保护基团，Arg(Mtr)、tyr(tBu)、Thr (tBu)、Tyr(tBu)、Asp (OtBu)。 每步缩合都加入HoBt/Dcc活化保护氨基酸的羧基。每步缩合用含有20%六氢吡啶的NMP溶液去除Fmoc保护基，肽链合成后，按照 ABI公司推荐的步骤，将含树脂的肽链加入处于冰浴条件下的混合反应液中，反应液的成 分结晶苯酸0. 75g、酒石酸乙二胺(EDT)O. 25ml、苯硫基甲烷(Thionaisole)O. 5ml、去离子 水0. 5ml、三氟乙酸10ml。在室温条件下持续搅拌，反应时间为4. 5小时，把肽链从树脂上裂 解下来，同时去除多种保护基。将混合液经4G的玻璃滤器过滤，以滤掉切下的树脂及保护 基团，并用三氟乙酸冲洗反应瓶和滤器，将滤液在常温下低压蒸发至1 anl，加乙醚50ml 使多肽沉淀后，经6G滤器过滤后，冷冻干燥，所得便是肽产品。以上过程都是在ABI-431A 固相自动肽合成仪(美国生产)上完成。本专利技术涉及的合成多肽药物或疫苗可以室温保存、运输，也可以自动化批量生产。使用现有的成熟技术，制备表达HPV18型E2蛋白的靶细胞，叫Caski细胞；按照本领域公知的方法获得HLA_A*0201阳性人体的外周血单核细胞(简称 PBMC)；培养上述PBMC细胞M小时后，取悬液O XlO6Ail) 4瓶。加入本专利技术所述的氨基 酸序列多肽(20yg/ml)，加入等量完全培养基作为对照组，37°C，5%C02环境下孵育。7天 后重复该刺激过程，共反复刺激3次。最末一次刺激后第3天收集悬浮细胞，这些细胞具有 针对HPV18型E2蛋白的靶细胞的细胞毒性(CTL细胞)，计数检测发现使用本专利技术涉及的 合成多肽药物或疫苗可以使CTL细胞数量较对照组增加50% -80%。将转染了 HPV18之E2基因的Caski细胞与上述CTL细胞共同孵育，发现该CTL细 胞可以溶破转染了 HPV18之E2基因的Caski细胞，溶破率得到60% -90%。由于采用了上述技术方案，本专利技术具有便于运输保存和自动化批量生产的优点，它具有激活特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的能力，该特异性CTL细胞具有杀伤、溶破带 有人乳头瘤病毒18型相关肿瘤标志的靶细胞，效果明显，而且无毒副作用。具体实施例方式下面结合实施例对本专利技术作进一步说明本专利技术的氨基酸序列为氨基端-VAWDSVYYM-羧基端；利用赖氨酸具有两个氨基、 一个羧基的特点，以赖氨酸为接头，所连接的特殊方式。该多肽可以体外刺激HLA_A*0201阳性人体的外周血单核细胞，可以增加这些外 周血单核细胞转化为细胞毒性T淋巴细胞(简称CTL)的数量提高50%-70%，还可以激活 CTL溶破对HPV18型肿瘤细胞，溶破率为60% -80%。实施例1 它的氨基酸序列可以为权利要求1.一种治疗人乳头瘤病毒18型引发的肿瘤的多肽药物，其特征在于它的氨基酸序列 为VAWDSVYYM。2.如权利要本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种治疗人乳头瘤病毒１８型引发的肿瘤的多肽药物，其特征在于它的氨基酸序列为：ＶＡＷＤＳＶＹＹＭ。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：吕凤林，田菲菲，杨力，
申请(专利权)人：重庆大学，
类型：发明
国别省市：85
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