本发明专利技术提供与在细胞表面上表达的紧密连接蛋白３特异性结合的单克隆抗体。本发明专利技术的抗体可用作卵巢癌、前列腺癌、乳腺癌、子宫癌、肝癌、肺癌、胰腺癌、胃癌、膀胱癌和结肠癌等紧密连接蛋白３表达亢进的癌症的诊断。本发明专利技术还提供对这些癌症细胞显示细胞毒作用的单克隆抗体。即，公开了使表达紧密连接蛋白３的细胞同与紧密连接蛋白３结合的抗体接触，对表达紧密连接蛋白３的细胞引发细胞毒的方法，以及抑制表达紧密连接蛋白３的细胞增殖的方法。并且本发明专利技术还公开了癌症的诊断或治疗方法。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及癌症的诊断和治疗方法、以及细胞增殖抑制和抗癌药。技术背景近年来，利用单克隆抗体的特征一 一 高靶特异性和低副作用的特 质，使用该抗体作为治疗药物的癌症治疗受到关注。作为治疗药物使用的抗体的主要抗肺瘤机理例如有以下的机理通过抗体，从正常细胞中 识别肺瘤细月包；具有细胞毒作用的效应细胞与抗体的结合，该抗体与在胂瘤细胞上 表达的抗原特异性结合；或形成与该抗体结合的补体复合物；由效应细胞或补体发挥的对该肿瘤细胞的细胞毒活性。以HER-2为耙的乳腺癌治疗抗体司徒曼布、以CD20为粑的非何杰 金淋巴瘤治疗抗体利妥希玛可作为利用抗体治疗癌症的例子。但是，实 际上显示临床有效性的抗体的数目目前仅有少数。因此，目前认为适合 抗体治疗的对象癌症种类受到^f艮大限定。对于现有的治疗药物几乎无法 获得效果、因此几乎没有治疗选择方案的癌症，人们强烈希望开发副作 用少、抗肿瘤效果高的抗体治疗药物，确立新的治疗方法。紧密连接蛋白(claudin) 3是属于紧密连接蛋白家族的蛋白质的一 种，在紧密连接中存在，具有除去紧密连接中特征性的细胞间空隙的作 用。紧密连接是指在动物等生物体组织中，将相邻的细胞膜结合的牢固 的结构。紧密连接蛋白3是控制离子等小的溶质物质的细胞间透过性的 结构蛋白。有报道称在卵巢癌、前列腺癌、乳腺癌、子宫癌、肝癌、肺 癌、胰腺癌、胃癌、膀胱癌和结肠癌等多种癌症组织中的紧密连接蛋白 3分子的表达升高(非专利文献1-6)。紧密连接蛋白3的表达分布可参照 The Swedish Human Protein Atlas (HPA) 的 网 站 (http:Vwww.proteinatlas.org/)。在妇科癌症中，在美国致死率最高的子宫 癌中显示紧密连接蛋白3和紧密连接蛋白4的表达在化疗药物抗性的复 发部位特别升高。紧密连接蛋白4与紧密连接蛋白3同样，是属于紧密 连接蛋白家族的蛋白质的一种。目前有报道称在人的染色体上存在包白4的24种紧密连接蛋白基因家族。已知紧密连接蛋白3和紧密连接蛋白4均发挥产气荚膜梭状芽孢杆 菌(C7oW"^ww; e/:/h力ge"力肠毒素(CPE)的毒素受体的功能。CPE与紧密 连接蛋白3、紧密连接蛋白4结合之后，形成巨大复合物，由此在细胞 膜上开孔，引发细胞坏死。对移植了表达紧密连接蛋白3、紧密连接蛋 白4的人肿瘤细胞而制备的胆癌模型小鼠给予致死剂量以下(亚致死量) 的CPE,则显示肿瘤体积减小、存活率提高的数据(非专利文献6-7)。虽 然有人提出了 CPE在人的临床应用的可能性，但是显示药效和致死毒性 的给予量的差异的狭窄、或CPE本身对人的抗原性尚存疑问，因此实际 上尚未达到临床应用阶段。紧密连接蛋白3是具有四次跨膜区域的蛋白质，具有在细胞外露出 2个肽环的结构。构成预想为胞外环的肽序列的多肽部分如下所示，仅 有51个氨基酸残基(环l)和23个氨基酸残基(环2)。胞外环1 胞外环2 细胞膜====================== 胞质的 胞质的 胞质的除此之外，动物种之间的紧密连接蛋白家族的序列同一性高，因此 在常规免疫方法中极难获得识别胞外区的抗体。并且，属于紧密连接蛋 白家族的分子互相具有非常相似的结构，因此尚未确立获得特异性识别 亚型的抗体的方法(非专利文献8)。作为识别在细胞上表达的紧密连接蛋白3的抗体，仅有报道，即， 对鸡免疫紧密连接蛋白3的部分肽，通过对该肽进行亲和纯化，获得多 克隆抗体，然后进行分离(非专利文献3)。对与在细胞表面表达的天然 分子型紧密连接蛋白-3结合的单克隆抗体进行分离、从而显示其抗肿瘤 作用的例子目前尚未有报道。非专利文献1: Soini (2005) Histopathology 46, 551.非专利文献2: Santin等人(2005) Br. J. Cancer 92, 1561.非专利文献3: Offner等人(2005) Cancer Immunol. Immunother. 54,431.非专利文献4 非专利文献5 非专利文献6 非专利文献7 非专利文献8Long等人(2001) Cancer Res. 61, 7878. Rangel等人(2003) Clin. Cancer Res. 9, 2567. Kominsky等人(2004) Am. J. Path. 164, 1627. Santin等人(2005) Cancer Res. 65， 4334. Hoevel等人(2002) J. Cell. Physiol. 191, 60.
技术实现思路
本专利技术的课题在于提供抗紧密连接蛋白3抗体及其用途。更具体地 说，其目的在于提供新型的抗紧密连接蛋白3抗体、或使用抗紧密连接 蛋白3抗体治疗癌症的新方法、含有抗紧密连接蛋白3抗体的新型的细 胞增殖抑制剂或抗癌药。本专利技术人通过将编码紧密连接蛋白3多肽的DNA免疫小鼠，成功 获得了抗紧密连接蛋白3抗体。并且本专利技术人对这样得到的抗体测定了 与在细胞表面上表达的以下的属于紧密连接蛋白家族的分子的结合活 性。人紧密连接蛋白3蛋白、 小鼠紧密连接蛋白3蛋白、 人紧密连接蛋白1蛋白、 人紧密连接蛋白4蛋白、和 人紧密连接蛋白6蛋白。结果确认，本专利技术的抗紧密连接蛋白3抗体具有下述结合活性的任 意一种或全部与人紧密连接蛋白3蛋白的高结合活性、与人和小鼠紧 密连接蛋白3蛋白的高结合活性、以及与人紧密连接蛋白3蛋白和人紧 密连接蛋白4蛋白的结合活性。本专利技术人发现获得的抗紧密连接蛋白3抗体包含以下抗体与具表面上表达的^紧密连接蛋白3蛋^特异性结合的抗体。 ""本专利技术人进一步发现获得的抗紧密连接蛋白3抗体与内源性表达 紧密连接蛋白3的人乳腺癌细胞林MCF7显示结合活性，了解到该抗体 可用作原发性的或转移性的各种癌细胞的诊断。本专利技术人发现通过使 用抗紧密连接蛋白3抗体，可以诊断下述各种癌组织的任意一种或全部ii表达紧密连接蛋白3蛋白的各种癌组织；表达紧密连接蛋白4蛋白的各 种癌组织；以及共表达紧密连接蛋白3蛋白和紧密连接蛋白4蛋白的癌 组织本专利技术人进一步测定了抗紧密连接蛋白3抗体对于稳定表达人紧密 连接蛋白3蛋白的DG44细胞和上述MCF7细胞的补体依赖性细胞毒活 性(CDC)，发现本专利技术的抗紧密连接蛋白3抗体对于任何细胞均具有 CDC活性。并且本专利技术人又测定了抗紧密连接蛋白3抗体对MCF7细胞 的抗体依赖性细胞毒活性(ADCC),发现本专利技术的抗紧密连接蛋白3抗 体对MCF7细胞具有ADCC活性。根据以上认识，本专利技术人发现抗紧密连接蛋白3抗体对于原发性 的或转移性的各种癌症的诊断、预防或治疗有效，从而完成了本专利技术。本专利技术提供与紧密连接蛋白3蛋白结合的单克隆抗体。本专利技术还提 供含有与紧密连接蛋白3蛋白结合的抗体作为有效成分的药物组合物。 本专利技术又提供含有与紧密连接蛋白3蛋白结合的抗体作为有效成分的抗 癌药。优选与紧密连接蛋白3蛋白结合的抗体是具有细胞毒活性的抗体。 本专利技术的优选方案中，可作为治疗对象的癌症是卵巢癌、前列腺癌、乳 腺癌、子宫癌、肝癌、肺癌、胰腺癌、胃癌、膀胱癌和结肠癌。特别优 选乳腺癌。含有本专利技术的抗紧密连接蛋白3抗体的抗癌药对于上述紧密 连接蛋白3表达亢进的、原发性或转本文档来自技高网...
【技术保护点】
单克隆抗体，该单克隆抗体与紧密连接蛋白３蛋白结合。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：吉田贤二，
申请(专利权)人：株式会社未来创药研究所，
类型：发明
国别省市：JP[日本]
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