用于对抗癌试剂敏感的癌症的生物标记物及其用途制造技术

本文公开了果糖－二磷酸醛缩酶Ａ（ＡＬＤＯＡ）、磷酸甘油酸激酶１（ＰＧＫ１）、过氧化物氧还蛋白１（ＰＲＤＸ１）、切丝蛋白１和组蛋白Ｈ４作为生物标记物，用于评价抗癌试剂功效和预测癌细胞敏感性。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于对抗癌试剂敏感的癌症的生物标记物及其用途 相关申请的交叉引用本申请对2006年10月23日提交的美国序列号60/862,527要求优先权，通 过引用将其整体并入本文，关于联邦资助研究的声明 本专利技术在政府支持下完成，得到国立卫生研究院(National Institute of Heal他)资金号P50CA83591、 P508卯19和P20 CA101955的资助。政府具有 本专利技术的某些权利。
技术介绍
血清肿瘤相关蛋白的表达谱是在检测早期阶段的癌症以及监测病情发展， 并确定治疗方法中是有效的生物标记物。药物敏感的标志蛋白是选择哪些病人 作为药物有预期治疗效果的关键因子。目前，还没有可用于评价DR5介导肿瘤 细胞凋亡过程中的癌细胞早期反应的血清生物标记物。在许多抗癌治疗的病例中，生物标记物是针对个体病例治疗预期疗效的关 键因子。生物标记物可以在治疗前预测预期治疗效果，或用于预测在开始治疗 后的初级阶段对药物的治疗的反应。这些生物标记物有利于选择合适的对象进 行治疗。同时也有利于挑选出对治疗方案没有预期临床效果的人不进行相关的 治疗以减少药物的副作用并节约治疗成本。因此，发现可预测的标志物在抗癌 药物研发中的必要性也变得尤为突出。然而，尽管已经发现了许多有效的癌症 治疗方法，却只发现了少数一些生物标记物可以用于决定治疗方案。例如，雌 激素受体和/或孕激素受体的表达在乳腺癌中可以预测他莫昔芬(tamoxifen)的 治疗反应。过度表达HER2/neu ( erbB2 )原癌基因的乳腺癌患者对人为的抗 HER2单克隆抗体曲妥单抗(赫赛汀)的治疗反应更可能有好的疗效。肺瘤坏死因子(TNF)相关凋亡诱导配体(TRAIL)，也叫Apo2L，是肺 瘤坏死因子亚家族的成员。他可以触发多种转化细胞林的凋亡。已经发现了 TRAIL蛋白的五个受体。包括两个转换凋亡信号的死亡受体DR4 (TRAIL-R1)和DR5 (TRAIL-R2，即细胞凋亡信号的传感器；以及3个抑制 TRAIL诱导细胞凋亡的诱辨受体DcRl (TRAIL-R3 ) , DcR2 ( TRAIL-R4 )和骨保护素(osteoprotegrin) 。 DFU和DR5含有用于诱导细胞凋亡所必需的细胞 质内的死亡结构域。在TRAIL与DR4和/或DR5结合以后，这些受体通过招募 Fas蛋白相关的死亡结构域和胱冬酶-8蛋白形成诱导凋亡信号复合体 (death-inducing signaling complex)起始细胞凋亡。然后激活胱冬酶效应蛋白 酶级联效应并最终导致细胞死亡。尽管TRAIL的mRNA在许多人的正常组织中都是连续正常表达的，但是 它只能由到癌变细胞或者转化的细胞凋亡，却不能诱导正常细胞发生凋亡。这 就暗示着可能存在某些机制保护正常的细胞逃离TRAIL所诱导的细胞凋亡。在 小鼠和非人的灵长类动物中的预临床研究已经发现了重组的可溶性TRAIL在的务性。但是，另外的报道发现某些形式的重组可溶性TRAIL可以在体外诱导 人正常肝细胞凋亡。尽管这可能是由于重组可溶性TRAIL的形式不同，但是它 暗示着TRAIL可能对于人的肝脏有一定的毒性。抗人DRS单克隆抗体TRA- 8 和人造形式的TRA- 8在体外和体内均能够在对肝细胞没有毒性的情况下诱导 肿瘤细胞凋亡。然而，也发现了 TRA-8诱导细胞凋亡在不同癌细胞中有不同程 度的敏感性。专利技术概述如本文体现及广泛描迷的本公开内容涉及用于评价抗癌疗法或治疗的功 效的生物标记物。此外，提供了用于评价DR5介导的细胞凋亡过程中的肿瘤细 胞反应的生物标记物.提供了预测癌细胞对治疗剂的敏感性的方法；预测治疗 剂的功效以及通过检测诸如磷酸甘油酸激酶1 (PGK1)、果糖二磷酸搭缩酶A (ALDOA)、过氧化物氧还蛋白1 (PRDX1)、切丝蛋白素(cofilin) 1 (COF1) 和组蛋白H4 (H4)等生物标记物来确定治疗剂的有效剂量。公开的方法和组合物的其它优点，将在下面的说明书中部分地描述，并可 以从说明书中部分地理解，或可以通过实践公开的方法和组合物来学习。借助 于在所附权利要求书中特别指出的要素和组合，可以实现和获得公开的方法和 组合物的优点。应当理解，前面的一般描述和下面的详细描述都仅仅是示例性 的和解释性的，且不限制要求保护的专利技术。附图简述附图说明图1表示TRA-8对COLO 205细胞的影响。不处理COLO 205细胞(A)，5或使用终浓度为10( B ) 、 100( C )或1000 ng/ml (D)的无血清培养基处理COLO 205细胞。培养上清液通过双向凝胶电泳进行分析，然后使用SYPRO Ruby (Molecular Probes、 Carlsbad、 California)进行染色。分子量标记物的位置显示 于每幅图的左側。每幅图的顶部显示等电点范围。圆團表示经分析的蛋白。图2显示TRA-8对结肠癌细胞的培养上清液中候选生物标记物的影响。 图2A表示不用TRA-8处理或者用终浓度为1、 10、 100或1000ng/ml的TRA-8 在371C处理24小时的COLO 205、 WiDr和HT-29细胞。细胞的成活力通过测 定细胞ATP水平进fr^价，并确定为相对于用作对照的未处理细胞的荧光值的 百分比。每个点或者条分别代表各个三次重复实验的平均值和标准误差。图2B 显示不用TRA-8处理或者用终浓度为1、 10、 100或1000ng/ml的TRA-8在37 1C处理24小时的COLO 205、 WiDr和HT-29细胞。培养上清液使用SDS- PAGE 凝胶电泳进行分析，然后4吏用抗-ALDOA、抗-COFl、抗-组蛋白H4、抗-PGKl 或抗-PRDXl抗体进行免疫印迹。图的底部示出了细胞的成活力。图3显示TRA-8对乳腺癌细胞培养上清液中候选生物标记物的影响。图3A 显示不用TRA-8处理或者用终浓度为1、 10、 100或1000ng/ml的TRA-8在37 1C处理24小时的2LMP和BT-474细胞。细胞成活力的检测如图2所述。图3B 显示不用TRA-8处理或者用终浓度为1、 10、 100或1000ng/ml的TRA-8在37 t:处理24小时的细胞。培养上清液使用图2B中所述的方法进行分析。图的底 部示出了细胞的成活力。图4显示TRA-8对肺癌细胞培养上清液中候选生物标记物的影响。图3A 显示不用TRA-8处理或者用终浓度为1、 10、 100或1000ng/ml的TRA-8在37 1C处理24小时的NCI-H2122和A-427细胞。细胞成活力的测定如图2所述。 图2B显示不用TRA-8处理或者用终浓度为1、 10、 100或1000ng/ml的TRA-8 在37"处理24小时的细胞。培养上清液使用图2B中所述的方法进行分析。图 的底部示出了细胞的成活力。程。图5A显不用TRA-8处理或者用终浓度为1 jig/ml的TRA-8在37t:处理0、 1、 2、 4、 8和24小时的COLO205(钻石形)、WiDr(正方形)、2LMP(三角形) 和NCI-H2122细胞(交叉)。细胞成活力的测定如图2A所示。图5B显不用 TRA-8处理或者用无血清培养基中终本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于预测癌细胞对第一抗癌试剂的敏感性的方法，包括：　（ａ）使癌细胞与有效量的抗癌试剂接触，和　（ｂ）评价细胞对一种或多种选自以下的生物标记物的释放：果糖－二磷酸醛缩酶Ａ（ＡＬＤＯＡ）、磷酸甘油酸激酶１（ＰＧＫ１）、过氧化物氧还蛋 白１（ＰＲＤＸ１）、切丝蛋白１（ＣＯＦ１）和组蛋白Ｈ４；相比于对照细胞，接触细胞对生物标记物的释放的增加表示癌细胞对该试剂敏感。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：RP金伯利，T周，礒山毅，
申请(专利权)人：UAB研究基金会，
类型：发明
国别省市：US[美国]