本发明专利技术提供了用于执行测定、以确定样品中被分析物的存在和／或对其进行定量的装置和方法。将被分析物与优选固定化在颗粒上的标记物混合，以提供均质溶液。任选地，可以使均质溶液流过滤器。均质溶液或滤液可以受控的流速计量流过读取区，可以检测标记物的存在或颗粒的存在。本发明专利技术的方法和装置不需要使用捕获区。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】专利技术人埃曼努埃尔·姆波克(Emmanuel Mpock)和威尔玛·曼甘(WilmaMangan)。 专利
本专利技术涉及用于定性或定量测定流体样品中一种或多种被分析物的存在的测试 试剂盒和装置。
技术介绍
典型情况下，免疫测定方法导致信号标记物在结合在特异性结合对成员的复合物 中的信号标记物与未结合的信号标记物之间分配。结合与未结合信号标记物之间的差异， 可能是结合与未结合信号标记物的物理分离或可检测信号在结合与未结合信号标记物之 间调节的结果。通过观察在一个或多个捕获区积累的标记物的图式，并将图式与样品中被 分析物的量相关联，来进行定量。测定的结果通过电磁手段、特别是光投射穿过检验条来确 定。类似地，在典型的夹心测定形式中，将样品与用于被分析物的标记的特异性结合 对成员混合，并允许其横越侧向流基质，通过位于基质上的一个或多个捕获区。如果样品中 存在被分析物，标记的特异性结合对成员将与被分析物结合，得到的被分析物-标记的复 合物将被运送到并通过捕获区。被分析物与标记的特异性结合对成员之间复合物形成的程 度，与样品中存在的被分析物的量直接成比例。在每个捕获区上固定化有能够结合被分析 物-标记复合物的第二特异性结合对成员。该第二特异性结合对成员不能结合标记的特异 性结合对成员，除非后者与被分析物结合。因此，积累在捕获区上的标记的特异性结合对成 员的量，与样品中存在的被分析物的量直接成比例。典型的侧向流装置是硝酸纤维素条。将样品施加到施用区，所述样品从那里通过 毛细作用流过含有对被分析物特异的可视标记的抗体的区域。游离和结合的标记物继续迁 移到捕获区，固定化的特异性针对被分析物的抗体在捕获区与被分析物_标记物复合物相 结合。游离的标记物(未结合抗体)继续迁移，在捕获区中留下被分析物特异性信号。被 分析物-标记物复合物的捕获由固定化的试剂介导，该试剂典型为特异性针对被分析物的 抗体。例如，EP653625公开了侧向流测定检验条，在检验条上特定标记物的结合程度使 用测定读取器光学测定。美国专利No. 7，239，394公开了用于检测标记的被分析物/试剂 复合物与固定化在侧向流测定棒检测区中的特异性结合试剂的结合的读取器，在侧向流测 定棒上读取器检测积累在检测区中的标记物的信号。国际专利申请公开W000/20866公开了用于测定被分析物的装置，包含标记物能 够在其中与被分析物结合的标记区，与捕获区连通，其中捕获区的孔径使得没有与被分析 物结合的标记物能够迁移过去，而与被分析物结合的标记物不能。因此，在从标记区向捕获 区的迁移过程中，未结合的标记物能够进入并通过捕获区，而结合的标记物将被捕获在标 记区与捕获区的接合处。因此，该公开物公开了使用减小的孔径用于条上的固定化而不是使用常规的免疫捕获技术。这些方法要求将被检测的标记物固定化在检测区中。这并不总是方便的，并增加 了测定系统的复杂性。因此，对于不使用固定化区域来检测标记的复合物，存在着需求。专利技术简述本专利技术提供了不需捕获区进行测定的装置和方法。本专利技术的方法和装置比传统方 法更加耐用和可靠；减少了测定时间；增加了数据的准确性；为使用微量被分析物浓度进 行定量测定提供了更好的控制；并改进了可制造性，具有最小的批次间差异。本专利技术的方法和装置提供了被分析物与用于被分析物的标记的特异性结合对成 员的混合，以提供均质的溶液。可以使由此获得的均质溶液以恒定的流速流过读取点。结 合的被分析物/标记物复合物可以使用比色计、电学手段或本
已知的其他方法来 检测。在参考了下面的详细描述之后，本专利技术的这些以及其他方面将变得明显。此外，在 本文中提出了多个参考文献，它们更详细地描述了某些步骤或组成，因此以其全文引为参考。附图说明图1显示了本专利技术的一次性条的透视图。图2显示了不使用捕获区的微粒的检测。图2A显示了使用Avie Alc计量器X7 作为检测器测量的作为时间函数的信号的图。图2B显示了使用Avie Alc计量器X8作为 检测器测量的作为时间函数的信号的图。图2C显示了使用Avie Alc计量器X9作为检测 器测量的作为时间函数的信号的图。详细描述本文引用的所有出版物、专利和专利申请，无论是见上文还是见下文，在此都以其 全文引为参考。除非另有说明，否则在本申请包括说明书和权利要求书中使用的下列术语，都具 有下面给出的定义。必须指出，说明书和随附的权利要求书中使用的单数形式包括了复数 指称物，除非上下文明确表明不是这样。在本文中使用的术语“对象”包含哺乳动物和非哺乳动物。哺乳动物的例子包括 但不限于哺乳纲的任何成员人类，非人类灵长动物例如黑猩猩，以及其他猿和猴物种；农 场动物例如牛、马、绵羊、山羊、猪；家养动物例如兔、狗和猫；实验室动物包括啮齿动物，例 如大鼠、小鼠和豚鼠等。非哺乳动物的例子包括但不限于禽类、鱼等。该术语不指称具体的 年龄或性别。本文中使用的术语“抗体”包括但不限于基本上由免疫球蛋白基因或多个免疫球 蛋白基因或其片段编码的、特异性结合和识别被分析物(抗原)的多肽。“抗体”也包括但 不限于基本上由免疫球蛋白基因或多个免疫球蛋白基因或其片段编码的、特异性结合和识 别由宿主对暴露于毛滴虫抗原做出响应所产生的抗体的抗原特异性结合区(独特型)的多 肽。例子包括多克隆、单克隆、嵌合、人源化和单链抗体等。免疫球蛋白片段包括Fab片段 和由表达文库、包括噬菌体展示所产生的片段。对于抗体的结构和术语，参见例如Paul的 《基础免疫学》(第三版)(Fundamental Immunology, 3rdEd.), 1993, Raven Press, NewYork0术语“与…特异性结合”或“与…发生特异性免疫反应”是指在存在蛋白和其他生 物物质的异源群的情况下，对靶被分析物的存在具有鉴别性的结合反应。因此，在指定测定 条件下，特异性结合部分优选与特定靶被分析物结合，并且不以显著的量与测试样品中存 在的其他成分结合。在这样的条件下与靶被分析物的特异性结合，可能需要选择对特定靶 被分析物具有特异性的结合部分。可以使用多种免疫测定形式来选择与特定抗原发生特异 性免疫反应的抗体。例如，固相ELISA免疫测定方法通常被用于选择与被分析物发生特异 性免疫反应的单克隆抗体。对于可用于确定特异性免疫反应性的免疫测定形式和条件的描 述，参见 Harlow 和 Lane (1988)的《抗体实验指南》(Antibodies，A Laboratory Manual), Cold Spring Harbor Publications, New York。典型情况下，特异性或选择性反应将提供 至少两倍于背景、更典型比背景高10到100倍以上的信噪比。本文中使用的术语“标记物”和“可检测标记物”是指能够检测的分子，包括但不限 于放射性同位素、荧光剂、化学发光剂、发色团、酶、酶的底物、酶的辅助因子、酶的抑制剂、 发色团、染料、金属离子、金属溶胶、配体(例如生物素、亲和素、链亲和素或半抗原)等。本文中使用的“固相支持物”是指固相表面例如塑料板、磁珠、乳胶珠、微滴定板的 孔、玻璃板、尼龙、琼脂糖、丙烯酰胺等。在指称两种分子或一种分子与分子复合物的结合时，“特异的”是指一种对另一种 的特异性识别以及稳定复合物本文档来自技高网...
【技术保护点】
用于检测样品中的被分析物的方法，所述方法包括：将含有被分析物的样品与反应物混合，其中获得了均质溶液；以及将均质溶液流过检测区，并检测溶液中的颗粒。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：埃曼努埃尔C姆波克，威尔玛曼甘，
申请(专利权)人：MEC戴内米克公司，
类型：发明
国别省市：US
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