用于治疗癌症的新型抗-CD38抗体制造技术

特异性结合ＣＤ３８的抗体、人源化抗体、表面重建抗体、抗体片段、衍生抗体及其与细胞毒性剂的缀合物，能够通过凋亡、抗体依赖性细胞介导的细胞毒性（ＡＤＣＣ）和补体依赖型细胞毒性（ＣＤＣ）杀死ＣＤ３８↑［＋］细胞。所述抗体及其片段能够用于治疗表达ＣＤ３８蛋白的肿瘤，例如多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病、慢性骨髓性白血病、急性骨髓性白血病或急性淋巴细胞白血病或治疗自体免疫和炎性疾病例如系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、多发性硬化、红斑狼疮和哮喘。所述衍生抗体可以用于诊断和成像表达高水平ＣＤ３８的肿瘤。还提供了包含细胞结合剂以及细胞毒性剂的细胞毒性缀合物，包含该缀合物的治疗组合物，使用该缀合物抑制细胞生长和治疗疾病的方法，包含该细胞毒性缀合物的试剂盒。特别的，细胞结合剂是识别并结合ＣＤ３８蛋白的单克隆抗体、其表位结合片段。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】专利技术背景CD38是45kD的II型跨膜糖蛋白，具有长C-末端胞外结构域和短N-末端胞质结构域。CD38蛋白是双功能胞外酶，其能够催化NAD+转化成环腺苷二磷酸核糖(cADPR)，还催化将cADPR水解成ADP-核糖。在个体发育的过程中，CD38出现在CD34+定向干细胞和淋巴细胞、红细胞和骨髓细胞的谱系定向祖细胞。在T细胞和B细胞发育的不同阶段，CD38的表达在大部分淋巴细胞谱系中以不同的表达水平得到持续。在许多造血系统恶性肿瘤和来自各种造血系统恶性肿瘤的细胞系中，CD38得到上调，所述造血系统恶性肿瘤包括非何杰金淋巴瘤(non-Hodgkin’s lymphoma)(NHL)、伯基特淋巴瘤(Burkitt′s lymphoma)(BL)、多发性骨髓瘤(MM)、B慢性淋巴细胞白血病(B-CLL)、B和T急性淋巴细胞白血病(ALL)、T细胞淋巴瘤(TCL)、急性骨髓细胞性白血病(AML)、多毛细胞白血病(HCL)、何杰金淋巴瘤(Hodgkin’slymphoma)(HL)以及慢性骨髓细胞性白血病(CML)。另一方面，造血系统的大部分原始多能性干细胞是CD38-。造血系统恶性肿瘤中的CD38表达及其与疾病进展的关联使CD38成为抗体治疗的吸引人的靶。CD38已经被报道参与Ca2+迁移(M.Morra等人，1998，FASEB J.，12：581-592；M.T.Zilber等人，2000，Proc Natl Acad Sci U S A，97：2840-2845)以及在淋巴细胞和骨髓细胞或细胞系中参与通过多种信号传递分子酪氨酸磷酸化的信号传导，其中所述信号传递分子包括磷脂酶C-γ、2AP-70、syk和c-cbl(A.Funaro等人，1993，Eur J Immunol，23：2407-2411；M.Morra等人，1998，FASEB J.，12：581-592；A.Funaro等人，1990，J Immunol，145：2390-2396；M.Zubiaur等人，1997，JImmunol，159：193-205；S.Deaglio等人，2003，Blood 102：2146-2155；E.Todisco等人，2000，Blood，95：535-542；M.Konopleva等人，1998，J Immunol，161：4702-4708；M.T.Zilber等人，2000，Proc Natl AcadSci U S A，97：2840-2845；A.Kitanaka等人，1997，J Immunol，159：-->184-192；A.Kitanaka等人，1999，J Immunol，162：1952-1958；R.Mallone等人，2001，Int Immunol，13：397-409)。在这些观察的基础上，CD38被提议为淋巴细胞和骨髓细胞在它们正常发育过程中成熟和活化的重要信号传递分子。CD38在信号传导和造血作用中的具体作用还不清楚，特别是因为大部分这些信号传导研究一直使用异常过表达CD38的细胞系和非生理状态的配体抗-CD38单克隆抗体。因为CD38蛋白具有产生cADPR的酶促活性，其中cADPR是能够诱导Ca2+迁移的分子(H.C.Lee等人，1989，J Biol Chem，264：1608-1615；H.C.Lee and R.Aarhus，1991，Cell Regul，2：203-209)，因此已经提议单克隆抗体连接CD38能够通过提高淋巴细胞中cADPR的产量而激发Ca2+迁移和信号传导(H.C.Lee等人，1997，Adv Exp Med Biol，419：411-419)。与该假设相反，CD38的截短和点突变分析显示其胞质尾部和其酶促活性对于抗-CD38抗体所介导的信号传递都不是必要的(A.Kitanaka等人，1999，JImmunol，162：1952-1958；F.E.Lund等人，1999，J Immunol，162：2693-2702；S.Hoshino等人，1997，J Immunol，158，741-747)。CD38功能的最佳证据来自于CD38-/-敲除小鼠，该小鼠在它们的先天免疫中具有缺陷，以及具有由于树突状细胞迁移缺陷所引起的T细胞依赖性激素应答的降低(S.Partida-Sanchez等人，2004，Immunity，20：279-291；S.Partida-Sanchez等人，2001，Nat Med，7：1209-1216)。然而，不清楚是否CD38在小鼠中的功能与在人中的功能一致，因为在造血作用的过程中CD38的表达模式在人和小鼠之间存在显著不同：a)与人中的不成熟祖干细胞不同，小鼠中的类似祖干细胞表达高水平的CD38(T.D.Randall等人，1996，Blood，87：4057-4067；R.N.Dagher等人，1998，Biol Blood Marrow Transplant，4：69-74)，b)尽管在人B细胞发育的过程中，在滤泡中心B细胞和浆细胞中发现了高水平的CD38表达(F.M.Uckun，1990，Blood，76：1908-1923；M.Kumagai等人，1995，J Exp Med，181：1101-1110)，但在小鼠中，CD38在相应细胞中的表达水平低(A.M.Oliver等人，1997，J Immunol，158：1108-1115；A.Ridderstad and D.M.Tarlinton 1998，J Immunol，160：4688-4695)。在文献中已经描述了许多抗-人CD38抗体，其对各种肿瘤细胞和-->细胞系具有不同的增殖特性。例如，具有小鼠Fab和人IgG1 Fc的嵌合OKT10抗体在存在来自MM患者或正常个体的外周血单核效应细胞时，介导非常有效地针对淋巴细胞的抗体依赖性细胞毒性(ADCC)(F.K.Stevenson等人，1991，Blood，77：1071-1079)。CDR-嫁接的人源化版本抗-CD38抗体AT13/5已经被报道显示具有针对CD38-阳性细胞系的有效ADCC活性(US 09/797,941 A1)。人单克隆抗体抗-CD38抗体已经显示介导通过ADCC和/或补体依赖性细胞毒性(CDC)体外杀死CD38-阳性细胞系，以及延迟携带MM细胞系RPMI-8226(WO2005/103083 A2)的SCID小鼠中的肿瘤生长。另一方面，许多抗-CD38抗体，IB4、SUN-4B7和OKT10而不是IB6、AT1本文档来自技高网...

【技术保护点】
特异性结合ＣＤ３８的抗体或其表位结合片段，其特征在于所述抗体或其表位结合片段能够通过凋亡、抗体依赖性细胞介导的细胞毒性（ＡＤＣＣ）和补体依赖型细胞毒性（ＣＤＣ）杀死ＣＤ３８↑［＋］细胞。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】EP 2006-10-19 06291628.31.特异性结合CD38的抗体或其表位结合片段，其特征在于所述
抗体或其表位结合片段能够通过凋亡、抗体依赖性细胞介导的细胞毒
性(ADCC)和补体依赖型细胞毒性(CDC)杀死CD38+细胞。
2.根据权利要求1的抗体或其表位结合片段，其特征在于所述抗
体或其表位结合片段能够在不存在基质细胞或基质细胞产生的细胞因
子时通过凋亡杀死所述CD38+细胞。
3.根据权利要求1～2任一项的抗体或其表位结合片段，其特征
在于所述抗体或其表位结合位点是单克隆抗体。
4.根据权利要求1～3任一项的抗体或其表位结合片段，其特征
在于所述CD38+细胞是淋巴瘤细胞、白血病细胞或多发性骨髓瘤细胞。
5.权利要求4的抗体或其表位结合片段，其特征在于所述CD38+细胞是非何杰金淋巴瘤(NHL)细胞、伯基特淋巴瘤(BL)细胞、多发
性骨髓瘤(MM)细胞、B慢性淋巴细胞白血病(B-CLL)细胞、B和T
急性淋巴细胞白血病(ALL)细胞、T细胞淋巴瘤(TCL)细胞、急性骨
髓细胞性白血病(AML)细胞、多毛细胞白血病(HCL)细胞、何杰金淋
巴瘤(HL)细胞以及慢性骨髓细胞性白血病(CML)细胞。
6.根据权利要求1的抗体或其表位结合片段，其特征在于所述抗
体或其表位结合片段能够在不存在基质细胞或基质细胞产生的细胞因
子时通过凋亡杀死至少24％的Daudi淋巴瘤细胞。
7.根据权利要求1的抗体或其表位结合片段，其特征在于所述抗
体或其表位结合片段能够在不存在基质细胞或基质细胞产生的细胞因
子时通过凋亡杀死至少7％的Ramos淋巴瘤细胞。
8.根据权利要求1的抗体或其表位结合片段，其特征在于所述抗
体或其表位结合片段能够在不存在基质细胞或基质细胞产生的细胞因
子时通过凋亡杀死11％的MOLP-8多发性骨髓瘤细胞。
9.根据权利要求1的抗体或其表位结合片段，其特征在于所述抗
体或其表位结合片段能够在不存在基质细胞或基质细胞产生的细胞因
子时通过凋亡杀死36％的SU-DHL-8淋巴瘤细胞。
10.根据权利要求1的抗体或其表位结合片段，其特征在于所述抗
体或其表位结合片段能够在不存在基质细胞或基质细胞产生的细胞因
子时通过凋亡杀死62％的DND-41白血病细胞。
11.根据权利要求1的抗体或其表位结合片段，其特征在于所述抗
体或其表位结合片段能够在不存在基质细胞或基质细胞产生的细胞因
子时通过凋亡杀死27％的NU-DUL-1淋巴瘤细胞。
12.根据权利要求1的抗体或其表位结合片段，其特征在于所述抗
体或其表位结合片段能够在不存在基质细胞或基质细胞产生的细胞因
子时通过凋亡杀死9％的JVM-13白血病细胞。
13.根据权利要求1的抗体或其表位结合片段，其特征在于所述抗
体或其表位结合片段能够在不存在基质细胞或基质细胞产生的细胞因
子时通过凋亡杀死4％的HC-1白血病细胞。
14.根据前述权利要求任一项的抗体或其表位结合片段，其特征在
于所述抗体或其表位结合片段以3×10-9M或更低的kD结合CD38蛋
白。
15.根据权利要求1-14的抗体或其表位结合片段，其特征在于所
述抗体或其表位结合片段包含具有选自下列的氨基酸序列的一个或者
多个互补性决定区：SEQ ID NO：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、
11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、
26、27、28、29、30、31、32、33、34、35和36。
16.根据权利要求15的抗体或其表位结合片段，其特征在于所述
抗体或其表位结合位点包含至少一条重链和至少一条轻链，所述重链
包含三个连续的互补性决定区，该互补性决定区具有选自SEQ ID NO：
1、2、3、7、8、9、13、14、15、19、20、21、25、26、27、31、32
和33的氨基酸序列，所述轻链包含三个连续的互补性决定区，该互补
性决定区具有选自SEQ ID NO：4、5、6、10、11、12、16、17、18、
22、23、24、28、29、30、34、35和36的氨基酸序列。
17.根据权利要求16的抗体或其表位结合片段，其特征在于所述
抗体或其表位结合位点包含轻链可变区，该轻链可变区具有选自SEQ
ID NO：38、40、42、44、46和48的氨基酸序列。
18.根据权利要求16的抗体或其表位结合片段，其特征在于所述
抗体或其表位结合位点包含重链可变区，该重链可变区具有选自SEQ
ID NO：50、52、54、56、58和60的氨基酸序列。
19.根据权利要求16的抗体或其表位结合片段，其特征在于所述
抗体或其表位结合片段包含至少一条重链和至少一条轻链，所述重链
包含具有SEQ ID NO：1、2和3表示的氨基酸序列的三个连续互补性
决定区，所述轻链包含具有SEQ ID NO：4、5和6表示的氨基酸序列
的三个连续互补性决定区。
20.根据权利要求19的抗体或其表位结合片段，其特征在于所述
抗体或其表位结合片段包含具有SEQ ID NO：38构成的氨基酸序列的
轻链可变区。
21.根据权利要求19的抗体或其表位结合片段，其特征在于所述
抗体或其表位结合片段包含具有SEQ ID NO：50构成的氨基酸序列的
重链可变区。
22.根据权利要求16的抗体或其表位结合片段，其特征在于所述
抗体或其表位结合片段包含至少一条重链和至少一条轻链，所述重链
包含具有SEQ ID NO：7、8和9表示的氨基酸序列的三个连续互补性
决定区，所述轻链包含具有SEQ ID NO：10、11和12表示的氨基酸序
列的三个连续互补性决定区。
23.根据权利要求22的抗体或其表位结合片段，其特征在于所述
抗体或其表位结合片段包含具有SEQ ID NO：40构成的氨基酸序列的
轻链可变区。
24.根据权利要求22的抗体或其表位结合片段，其特征在于所述
抗体或其表位结合片段包含具有SEQ ID NO：52构成的氨基酸序列的
重链可变区。
25.根据权利要求16的抗体或其表位结合片段，其特征在于所述
抗体或其表位结合片段包含至少一条重链和至少一条轻链，所述重链
包含具有SEQ ID NO：13、14和15表示的氨基酸序列的三个连续互补
性决定区，所述轻链包含具有SEQ ID NO：16、17和18表示的氨基酸
序列的三个连续互补性决定区。
26.根据权利要求25的抗体或其表位结合片段，其特征在于所述
抗体或其表位结合片段包含具有SEQ ID NO：42构成的氨基酸序列的
轻链可变区。
27.根据权利要求25的抗体或其表位结合片段，其特征在于所述
抗体或其表位结合片段包含具有SEQ ID NO：54构成的氨基酸序列的
重链可变区。
28.根据权利要求16的抗体或其表位结合片段，其特征在于所述
抗体或其表位结合片段包含至少一条重链和至少一条轻链，所述重链
包含具有SEQ ID NO：19、20和21表示的氨基酸序列的三个连续互补
性决定区，所述轻链包含具有SEQ ID NO：22、23和24表示的氨基酸
序列的三个连续互补性决定区。
29.根据权利要求28的抗体或其表位结合片段，其特征在于所述
抗体或其表位结合片段包含具有SEQ ID NO：44构成的氨基酸序列的
轻链可变区。
30.根据权利要求28的抗体或其表位结合片段，其特征在于所述
抗体或其表位结合片段包含具有SEQ ID NO：56构成的氨基酸序列的
重链可变区。
31.根据权利要求16的抗体或其表位结合片段，其特征在于所述
抗体或其表位结合片段包含至少一条重链和至少一条轻链，所述重链
包含具有SEQ ID NO：25、26和27表示的氨基酸序列的三个连续互补
性决定区，所述轻链包含具有SEQ ID NO：28、29和30表示的氨基酸
序列的三个连续互补性决定区。
32.根据权利要求31的抗体或其表位结合片段，其特征在于所述
抗体或其表位结合片段包含具有SEQ ID NO：46构成的氨...

【专利技术属性】
技术研发人员：PU帕克，LM巴特尔，A斯卡莱特斯卡亚，VS戈尔马克尔，D塔瓦雷斯，J德克特，V米科尔，V布兰克，
申请(专利权)人：赛诺菲安万特，
类型：发明
国别省市：FR[法国]