高分子微粒的制备方法技术

本发明专利技术公开了向表面导入了上述抗原或抗体的高分子微粒的制备方法，该方法是在使用单体、自由基聚合引发剂、乳化剂和疏水物进行细乳液聚合时，使抗原或抗体共存，制备高分子微粒。该方法可提供检测灵敏度高、并且可以避免以往发生的非特异性反应的免疫学分析试剂。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及在细乳液聚合中、通过使抗原或抗体共存，上述抗原或 抗体导入了表面的。
技术介绍
目前在临床诊断检查现场中，对于多数检体要求短时间且高精度地 测定作为疾病诊断指标的多种物质，并将该结果迅速、准确地反馈给治 疗临床现场，其中，通过利用抗原抗体反应的免疫学测定可以实施^[艮多 对微量的分析对象物的准确定量。特别是作为提高检测灵敏度或准确性 的方法，已知有将分析对象物的抗原或抗体担载在聚苯乙烯等合成高分 子(所谓的胶乳)颗粒表面，利用该颗粒进行的胶乳凝聚法。胶乳凝聚法 是目视或光学检测分析对象物质和与胶乳颗粒结合的抗原或抗体的反 应而产生的胶乳颗粒的凝聚程度，短时间内测定分析对象物质的方法。还大多采用夹层法，该方法是将胶乳颗粒制成磁性颗粒，由此通 过与磁性颗粒结合的第一抗体捕获分析对象物质，用磁石收集，漂洗未 反应物等(所谓的B/F分离)，然后添加酶或荧光剂等标记产生信号的物 质的第二抗体，进行分析。根据抗原抗体反应进行定量的分析对象物质通常大多是生物体试 样中所含的微量成分，重点在于低浓度区域的定量性。但是，根据疾病 的进展程度，测定对象物质浓度有时会显示异常高的值，因此在临床检 查现场中，需求具有可准确地测定低值至高值的性能的试剂。不管胶乳凝聚法或是夹层法，在使用胶乳颗粒时，必须是在胶乳颗 粒的表面固定抗原或抗体，其方法是采用物理或化学担载的方法。例如 通过物理吸附在胶乳颗粒上直接固定抗原或抗体，或者采用通过经由胶 乳颗粒表面的官能团、例如氨基、羧基、巯基、羟基、醛基或环氧基等 的共价键，在胶乳颗粒上结合抗原或抗体的方法。但是，这些物理或化学结合方法中，可担载在胶乳表面上的抗原或 抗体的量是有限的，从测定范围或检测灵敏度方面考虑，上述胶乳凝聚 法或夹层法的实施也官能团的导入率、粒度分布等)在每批次之间、不同生产商之间都不固定， 因此，即使结合抗原或抗体的操作是固定的，制备的结合抗体的胶乳颗 粒的性能也产生不均匀。例如在与胶乳表面物理或化学结合的方法中， 抗原或抗体未完全结合，而是由于结合后的漂洗而被除去，或由于离心 或分散处理使结合的抗原或抗体剥落。即，结合的抗原或抗体的量不均 匀，因此对于测定范围或检测灵敏度有影响。近年来的 一个新问题是如非专利文献1所公开的那样，有 一种检体，共存的"与改性部位结合"物质"导致非、:争异性反应。由此，测定纟i果的 可靠性丧失，无法准确进行疾病诊断。该问题并不是对抗原或抗体、或 者胶乳颗粒分别进行研究即可解决的，是非常高难度的课题。非专利文献1:"临床病理",2000年8月，第48巻，第8号，760-763页专利技术的内容 .本专利技术人对可代替目前釆用的物理或化学结合方法的、抗原或抗体 与与胶乳表面结合的方法进行了深入的研究，结果发现，在合成胶乳颗 粒时使作为抗原或抗体的蛋白质同时共存，则在合成结束时可得到上述 抗原或抗体导入到胶乳颗粒表面的胶乳颗粒。并且令人惊异的是，导入 的抗原或抗体仍保持其特性，与以往的物理性吸附等的试剂相比，上述 胶乳颗粒与分析对象物质显示高的反应性，并且发现导入到胶乳颗粒 表面的抗原或抗体不会发生由于结合导致的结构上的改性，可以避免与 以往所见的发生非特异性反应的检体反应。本专利技术人发现在胶乳颗粒 的合成反应中，在使抗原或抗体共存的状态下、在特定条件下，可以使 单体聚合，从而完成了本专利技术。本专利技术的课题在于提供新型的，该方法可提 供检测灵敏度高、并且可以避免以往发生的非特异性反应的免疫学分析 试剂。粒的制备方法解决，其特征在^于在使用单体、自由^基聚合引发剂、乳 化剂和疏水物进行细乳液聚合时，使抗原或抗体共存，制备高分子微粒。 本专利技术涉及由上述制备方法得到的、向高分子微粒的表面导入了蛋白质的高分子微粒。根据本专利技术的优选方案，上述细乳液聚合是在低温(优选0-40。C)下 进行聚合反应的低温细乳液聚合。根据本专利技术的又一优选方案，上述自由基聚合引发剂是氧化还原引 发剂，更优选抗坏血酸与11202的组合。根据本专利技术的又一优选方案，上述乳化剂是聚合性表面活性剂，更 优选具有聚乙二醇链的聚合性表面活性剂。根据本专利技术的又一优选方案，上述疏水物是十六碳烷或聚苯乙烯。本专利技术进一步涉及以下内容免疫学分析试剂，该免疫学分析试剂含有胶乳颗粒的悬浮液， 该胶乳颗粒是在胶乳颗粒的合成反应中，在分析对象物质的抗原或抗体 共存的状态下进行单体聚合，向上述胶乳颗粒的表面导入了上述抗原或 抗体而成。免疫学分析方法，该方法是将(l)可能含有分析对象化合物的被 检试样与(2)胶乳颗粒在液体中接触；所述(2)胶乳颗粒是在胶乳颗粒的合 成反应中，在上述分析对象物质的抗原或抗体共存的状态下使单体聚 合，向上述胶乳颗粒的表面导入上述抗原或抗体而形成。 的免疫学分析方法，其中，对上述接触后抗原抗体反应产生 的胶乳颗粒的凝聚程度进行光学分析。 的免疫学分析方法，其中，上述接触后，将上述液体与上述 胶乳颗粒分离，对与上述胶乳颗粒结合的分析对象物质、或残留在上述 液体中的分析对象物质进行分析。根据本专利技术，可以提供新型高分子微粒，该新型高分子微粒可提供 检测灵敏度高、且可以避免以往发生的非特异性反应的免疫学分析试 剂。附图简述图l是表示用使用导入了 BSA的胶乳颗粒的本专利技术试剂、和使用结 合有BSA的胶乳颗粒的以往试剂，测定抗BSA抗体标准溶液的2倍稀 释系列的结果的曲线图。图2是表示用使用导入了 BSA的胶乳颗粒的本专利技术试剂、和使用结 合有BSA的胶乳颗粒的以往试剂，测定抗IgG抗体标准溶液的2倍稀释系列的结果的曲线图具体实施例方式本专利技术的制备方法的特征在于在进行细乳液聚合时，使抗原或抗 体共存。根据本专利技术的制备方法，可以制备向高分子微粒(特别是胶乳颗 粒)的表面导入了上述抗原或抗体的高分子微粒(特别是胶乳颗粒)(以下 称为导入了配偶体的高分子微粒)。以往公知的细乳液聚合(例如M. Antonietti， K. Landfester, Prog. Polym. Sci., 2002, 27, 689-757、 J. M. Asua, Prog. Polym. Sci., 2002, 27, 1283-1346)同样实施。通常的细乳液聚合例如可以包含将单体、自由基聚合引发剂、乳化 剂和疏水物混合的步骤；将上述混合物剪切的步骤；以及将上述混合物 加热至聚合引发温度使其聚合的步骤，但并不限于此。细乳液聚合中， 将聚合用单体和乳化剂混合后，例如实施超声波照射的剪切步骤，通过 上述剪切力来切碎单体，形成被乳化剂覆盖的单体微油滴。可以加热至 自由基聚合引发剂的聚合起始温度，将单体微油滴直接聚合，获得高分 子微粒。本专利技术中使用的抗原或抗体只要是显示表面活性的抗原或抗体即 可，没有特别限定，优选胶乳法(例如胶乳凝聚法、使用胶乳的B/F分离) 中可利用的抗原或抗体。抗原或抗体是否显示表面活性，这可通过公知 方法、例如表面张力测定、或将芘应用于荧光探针的荧光色谱测定来确光色谱测定中，芘的第"^发光峰(11)和第三发光峰(1;3)的强度比(11/13)为 0.5-1.6 (更优选0.6-1.5)的抗原或抗体。例如上述抗原或抗体有各种抗体、 受体、酶、脂类、糖链等，具体来说有IgG、 C反应蛋白(CRP本文档来自技高网...

【技术保护点】
向表面导入了上述抗原或抗体的高分子微粒的制备方法，其特征在于：在使用单体、自由基聚合引发剂、乳化剂和疏水物进行细乳液聚合时，使抗原或抗体共存，制备高分子微粒。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：谷口龙王，水野晃宏，泽井时男，坪田博幸，
申请(专利权)人：株式会社三菱化学药得论，国立大学法人千叶大学，
类型：发明
国别省市：JP[日本]