分析物和核酸的检测制造技术

本发明专利技术提供了检测样品中的至少一种分析物和至少一种核酸的方法。本发明专利技术还提供了用于实施所述方法的试剂。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术提供了检测样品中的至少一种分析物和至少一种核酸的方 法。本专利技术还提供了用于实施所述方法的试剂。
技术介绍
包括Western印记、ELISA等各种检测细胞裂解物中的蛋白质的方 法是本领域中已知的。包括RT-PCR等各种检测细胞裂解物中的核酸的方 法也是本领域中已知的。然而，样品中所检测的蛋白质和所检测的核酸 的相对量难于比较，这是因为这些样品通常是分别地、以不同方法制备 的。另外，用于蛋白质和核酸的不同检测方法也会给关联它们的相对量 带来困难。
技术实现思路
在各种实施方式中，提供了检测细胞中的至少一种目标分析物和至 少一种目标核酸的方法。在各种实施方式中，提供了以下的方法，所述 方法包括在多功能性裂解缓冲液中裂解细胞从而产生细胞裂解物、利 用近感检测测定法(proximity detection assay)检测所述细胞裂解物中的至少一种目标分析物、和利用核酸定量捡测测定法检测所述细胞裂解物中 的至少一种目标核酸。在各种实施方式中，检测至少一种目标分析物和 检测至少一种目标核酸是在同一容器中进行的。在各种实施方式中，提供了以下的方法，所述方法包括在多功能6性裂解缓冲液中裂解细胞从而产生细胞裂解物，将所述细胞裂解物与以下物质(i)、 (ii)和(iii)温育(i)至少一个近感检测探针组，其中每个近感检 测探针组包括至少两种近感检测探针，并且其中每种近感检测探针包含 至少一种分析物结合部分和至少一种寡核苷酸部分；(ii)至少一种夹板寡核苷酸(splint oligonucleotide);和(iii)至少一种连接酶，由此形成至少一个 经连接的近感检测探针组；将所述细胞裂解物与至少一种蛋白酶温育； 检测所述至少一个经连接的近感检测探针组；和检测至少一种目标核酸。在各种实施方式中，提供了以下的方法，所述方法包括在多功能 性裂解缓冲液中裂解细胞从而产生细胞裂解物，将所述细胞裂解物与至 少一个近感检测探针组温育，其中每个近感检测探针组包括至少两种近 感检测探针，并且其中每种近感检测探针包含至少一种分析物结合部分 和至少一种寡核苷酸部分，由此形成至少一个经杂交的近感检测探针组； 将所述细胞裂解物与至少一种蛋白酶温育；检测所述至少一个经杂交的 近感检测探针组；和检测至少一种目标核酸。在各种实施方式中，提供了多功能性裂解缓冲液。在各种实施方式 中，多功能性裂解缓冲液包含选自NDSB-201、LDAO、CHAPS、DEDTAB、 Zwittergent 3-10和CAPSO中的至少一种化学品。在各种实施方式中，提供了用于检测至少一种目标分析物和至少一 种目标核酸的试剂盒。在各种实施方式中，试剂盒包含含有至少一种化 学品的至少一种多功能性裂解缓冲液，所述至少一种化学品选自 NDSB-201、 LDAO、 CHAPS、 DEDTAB、 Zwittergent 3-10和CAPSO。在各种实施方式中，提供了包含裂解液的组合物，其中所述裂解液 包含多功能性裂解缓冲液和至少一个近感检测探针组，所述多功能性裂 解缓冲液含有选自NDSB-201 、LDAO、CHAPS、DEDTAB、Zwittergent 3-10和CAPSO中的至少一种化学品。 附图说明图1显示了实施例1中所述的近感连接测定法的结果。其中给出了 每种反应的循环阈值数(平均CT)。图2显示了对于实施例1所述的TaqMan —步qRT-PCR反应的荧光 的相对增力n(ARn)对循环数的图。图2中只显示了FAM层。图3显示了对于实施例1所述的实验的循环阈值数对平板定位(即 TaqMan—步qRT-PCR反应)的图。图3中只显示了FAM层。图4显示了对于实施例1所述的TaqMan —步qRT-PCR反应的荧光 相对增加(ARn)对循环数的图。图4中只显示了 VIC层。图5显示了对于实施例1所述的实验的循环阈值数对平板定位(即 TaqMan —步qRT-PCR反应)的图。图5中只显示了 VIC层。图6显示了如实施例2所述，在含有蛋白酶或不含有蛋白酶的缓冲 液Na、缓冲液Nb和缓沖液Nc中制备的裂解物的琼脂糖凝胶电泳。图7显示了对于实施例2所述的实验的循环阈值数对平板定位(即 TaqMan —步qRT-PCR反应)的图。图8显示了如实施例3所述，使用各种化学品所制备的裂解物的琼 脂糖凝胶电泳。泳道1 8分别是NMP、Mackernium、Empigen、NDSB-201 、 Zwittergent 3-10、 Zwittergent 3-14、 TMACL禾B DDMAB。泳道9 16分 别是CAPSO、 CHAPS、 LDAO、 Sarkosyl、 CTAB、 DEDTAB、 DLS和 DTAB。图9显示了如实施例3所述，使用2% NDSB-201或5 mM CAPSO所制备的裂解物的各种稀释液的琼脂糖凝胶电泳。图10显示了如实施例4所述，利用了缓冲液N裂解物的各种稀释液 的平均循环阚值数(平均CT)对近感连接测定的图。图11显示了如实施例4所述，在存在或不存在核糖核酸酶抑制剂的 情况下在37。C温育了不同时间的细胞裂解物的琼脂糖凝胶电泳。图12显示了如实施例4所述，在含有Tween和不含有Tween的缓 冲液Na、缓冲液Nb和缓冲液Nc中的细胞裂解物的琼脂糖凝胶电泳。图13显示了如实施例4所述，在缓冲液N中与各种浓度的核糖核酸 酶A温育的细胞裂解物的琼脂糖凝胶电泳。图14显示了如实施例4所述，在各种处理条件下、缓冲液N中的细 胞裂解物的SDS-丙烯酰胺凝胶电泳。8图15显示了如实施例5所述，在缓冲液Na中与各种蛋白酶温育的 细胞裂解物的琼脂糖凝胶电泳。图16显示了如实施例5所述，在含0.2%LDAO的缓冲液Na中与各 种蛋白酶温育的细胞裂解物的琼脂糖凝胶电泳。图17显示了如实施例5所述，在缓冲液Nc中与各种蛋白酶温育的 细胞裂解物的琼脂糖凝胶电泳。图18显示了用于本文所述的某些近感检测测定法/目标核酸检测测 定法的非限制性的示例性作业流程图。在该作业流程设计中，在多重扩 增反应中同时检测PDA产物和mRNA。图19显示了用于本文所述的某些近感检测测定法/目标核酸检测测 定法的非限制性的示例性作业流程图。在该作业流程设计中，在蛋白酶 处理前取出部分样品以用于检测PDA产物，而剩余样品采用蛋白酶处理 并用于mRNA的检测。图20显示了获得自为检测在含有0.1。/。鱼源明胶(fish gdatin)或 1%BSA的缓冲液中的各种浓度的VEGF而进行的近感连接测定法(PLA) 的示例性数据。以平均循环阈值(平均CT)对pM VEGF的形式对示例性 数据进行作图。图21显示了获得自为检测在含有0.1%鱼源明胶和各种核酸封闭剂 的缓冲液中的各种浓度的VEGF而进行的近感连接测定(PLA)的示例性 数据。A图显示了获得自包含多聚A、多聚dC、多聚dC+多聚dG、和 在4。C储存至少2周的多聚A(对照)的近感连接测定法的示例性数据。B 图显示了获得自包含多聚A、多聚dC和经剪切的小牛胸腺DNA(CFD)、 和在4'C储存至少2周的多聚A(对照)的近感连接测定的示例性数据。以 平均循环阈值(平均CT)对pM VEGF的形式对示例性数据进行作图。图22显示了获得自为利用含有本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测细胞中的至少一种目标分析物和至少一种目标核酸的方法，所述方法包括：　ａ）在多功能性裂解缓冲液中裂解所述细胞从而产生细胞裂解物；　ｂ）使用近感检测测定法检测所述细胞裂解物中的至少一种目标分析物；和　ｃ）使用核酸定量检测测定 法检测所述细胞裂解物中的至少一种目标核酸；　其中（ｂ）和（ｃ）在同一容器中进行。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】US 2006-8-1 60/835,1181.一种检测细胞中的至少一种目标分析物和至少一种目标核酸的方法，所述方法包括a)在多功能性裂解缓冲液中裂解所述细胞从而产生细胞裂解物；b)使用近感检测测定法检测所述细胞裂解物中的至少一种目标分析物；和c)使用核酸定量检测测定法检测所述细胞裂解物中的至少一种目标核酸；其中(b)和(c)在同一容器中进行。2. 如权利要求1所述的方法,其中至少一种目标分析物选自蛋白质、 肽、碳水化合物和激素。3. 如权利要求2所述的方法，其中至少一种目标分析物是蛋白质。4. 如权利要求1所述的方法，其中所述近感检测测定法包括a) 将所述细胞裂解物与第一近感检测探针和第二近感检测探针在使 得所述第一近感检测探针和所述第二近感检测探针之间能够相互作用的 条件下温育；和b) 检测所述第一近感检测探针和所述第二近感检测探针之间的所述 相互作用。5. 如权利要求4所述的方法，其中所述第一近感检测探针包含第一 寡核苷酸部分和第一分析物结合部分，并且其中所述第二近感检测探针 包含第二寡核苷酸部分和第二分析物结合部分。6. 如权利要求5所述的方法，其中所述第一分析物结合部分和所述 第二分析物结合部分能够结合相同的目标分析物。7. 如权利要求5所述的方法，其中所述第一分析物结合部分和所述 第二分析物结合部分能够结合不同的目标分析物。8. 如权利要求5所述的方法，其中所述第一近感检测探针和所述第 二近感检测探针之间的所述相互作用包括选自所述第一寡核苷酸部分和 所述第二寡核苷酸部分之间的杂交和所述第一寡核苷酸部分和所述第二寡核苷酸部分的连接中的至少一种方法。9. 如权利要求8所述的方法，其中所述第一近感检测探针和所述第 二近感检测探针之间的所述相互作用包括所述第一寡核苷酸部分和所述 第二寡核苷酸部分的连接。10. 如权利要求4所述的方法，其中所述温育包括至少一种夹板寡 核苷酸。11. 如权利要求1所述的方法，其中所述至少一种目标核酸是至少一 禾中mRNA。12. 如权利要求11所述的方法，其中所述核酸定量检测测定法包括 逆转录和实时PCR。13. 如权利要求1所述的方法，其中所述至少一种目标核酸中的至 少一种目标核酸编码所述至少一种目标分析物中的至少一种目标分析 物。14. 如权利要求1所述的方法，其中所述多功能性裂解缓冲液包含 选自NDSB-201、 LDAO、 CHAPS、 DEDTAB、 Zwittergent 3-10和CAPSO 中的至少一种化学品。15. 如权利要求14所述的方法，其中所述多功能性裂解缓冲液包含 NDSB-201。16. 如权利要求1所述的方法，其中所述检测至少一种目标分析物 包括第一实时PCR反应，并且所述检测至少一种目标核酸包括第二实时 PCR反应。17. —种检测细胞中的至少一种目标分析物和至少一种目标核酸的 方法，所述方法包括a) 在多功能性裂解缓冲液中裂解所述细胞从...

【专利技术属性】
技术研发人员：马克E香农，大卫W拉夫，
申请(专利权)人：应用生物系统有限公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]