使用人胎盘灌洗液和人来自胎盘的中间体自然杀伤细胞的肿瘤抑制制造技术

本发明专利技术提供了胎盘灌洗液、胎盘灌洗液细胞和来自胎盘的中间体自然杀伤（ＰＩＮＫ）细胞及其组合。本发明专利技术还提供了包含胎盘灌洗液、胎盘灌洗液细胞和来自胎盘的中间体自然杀伤细胞及其组合的组合物，以及使用胎盘灌洗液、胎盘灌洗液细胞和来自胎盘的中间体自然杀伤细胞及其组合抑制肿瘤细胞、癌细胞等的生长或增殖的方法和治疗具有肿瘤细胞的个体的方法。在一个优选的实施方案中，所述组合物包含：分离的ＣＤ５６＋、ＣＤ１６－自然杀伤细胞。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】使用人胎盘灌洗液和人来自胎盘的中间体自然杀伤细胞的肿瘤抑制本申请要求于2008年9月28日提交的美国临时专利申请号60/995，763和于2008 年8月21日提交的美国临时专利申请号61/090，555的优选权，所述申请的全部内容通过 参考纳入本文。1.专利
本专利技术提供了通过将肿瘤细胞与胎盘灌洗液、来自胎盘的细胞、来自胎盘(例如 来自胎盘灌洗液)的自然杀伤细胞、和/或包含来自胎盘(例如来自胎盘灌洗液)的自然 杀伤细胞和来自脐带血的自然杀伤细胞的混合自然杀伤细胞接触来抑制肿瘤细胞生长或 增殖的方法。本专利技术还提供了从胎盘，例如从胎盘灌洗液(例如人胎盘灌洗液)，来制备独 特自然杀伤细胞群的方法。进一步地，本专利技术提供了使用胎盘灌洗液及其中的自然杀伤细 胞抑制肿瘤细胞增殖的方法。2.
技术介绍
胎盘灌洗液包含通过下述方式获得的胎盘细胞群使灌洗溶液流经胎盘血管系 统，并从所述血管系统、从所述胎盘的母体面、或从两者收集灌洗液体。灌洗哺乳动物胎盘 的方法描述在例如美国专利号7，045，146和美国专利号7，255，879中。通过灌洗获得的胎 盘细胞群是异源性的，包含造血细胞(CD34+)、有核细胞例如粒细胞、单核细胞和巨噬细胞、 小百分比(少于1%)的组织培养基质-粘附的胎盘干细胞和自然杀伤细胞。至今还无人 描述胎盘灌洗液或来自灌洗液的胎盘细胞群在抑制肿瘤细胞增殖中的用途。自然杀伤(NK)细胞是构成先天免疫系统的主要组分的细胞毒性淋巴细胞。在人 体中，NK细胞不表达T-细胞抗原受体(TCR)、CD3或表面免疫球蛋白(Ig)B细胞受体，但通 常表达表面标记物⑶16(FcyRIII)和⑶56。NK细胞是细胞毒性的；其细胞质中的小颗粒 包含特殊蛋白质如穿孔素和被称为粒酶的蛋白酶。当在非常接近于待杀死的细胞周围释放 时，穿孔素在靶细胞的细胞膜中形成孔，粒酶和相关分子可以通过所述孔进入，诱导细胞凋 亡。一种粒酶，粒酶B (也被称为粒酶2和细胞毒性T-淋巴细胞-结合的丝氨酸酯酶1)，是 在细胞介导免疫应答中快速诱导靶细胞细胞凋亡的一种重要的丝氨酸蛋白酶。NK细胞响应干扰素或巨噬细胞_衍生的细胞因子而被活化。活化的NK细胞被称 为淋巴因子活化的杀伤(LAK)细胞。NK细胞具有两类表面受体，标记为“活化受体”和“抑 制受体”，它们控制细胞的细胞毒活性。除了其它活性，NK细胞在宿主的肿瘤排异反应中起作用。因为癌细胞具有降低的 或没有I型MHC表达，它们可以成为NK细胞的靶点。大量临床数据表明从PBMC或骨髓分 离的人NK细胞的单倍体相合移植可介导强烈的抗白血病效应，而不会产生可检测的移植 物抗宿主病(GVHD)。参见Ruggeri等人，Science 295:2097-2100(2002))。自然杀伤细胞 可由缺乏或呈现低水平的主要组织相容性复合体(MHC)蛋白的细胞活化。活化的和扩增的 NK细胞和LAK细胞已被用于对患有晚期癌症的患者的离体治疗和体内治疗，并在骨髓相关疾病(例如白血病)、乳腺癌、和某些类型的淋巴瘤的治疗中取得了一定的成功。LAK细胞 治疗要求患者首先接受IL-2，接着接受白细胞分离法，然后在IL-2的存在下，将收集的自 体血细胞离体培育和培养几天。LAK细胞必须与相对高剂量的IL-2 —起重新输注，以完成 治疗。该净化治疗(purging treatment)价格昂贵且可能引起严重的副作用。这些副作用 包含体液潴留、肺水肿、血压降低和高热。尽管NK细胞在杀死肿瘤细胞和病毒感染的细胞中具有有利的性质，处理它们和 将它们用于免疫治疗仍然很难，主要原因在于在培养和扩增期间，很难保持它们的肿瘤靶 向和杀死肿瘤的能力。因而，本领域存在对自然杀伤细胞的易用供给的需要。3.专利技术概述本专利技术提供了胎盘灌洗液；来自胎盘灌洗液的细胞，例如来自胎盘灌洗液的所有 有核细胞；胎盘灌洗液细胞和脐带血细胞的组合；和/或来自胎盘的自然杀伤细胞，例如来 自胎盘灌洗液的自然杀伤细胞或通过消化胎盘组织获得的自然杀伤细胞在抑制肿瘤细胞 增殖中的用途。在一个方面，本专利技术提供一种抑制肿瘤细胞或肿瘤细胞群增殖的方法，该方法包 括将所述肿瘤细胞或肿瘤细胞群与人胎盘灌洗液接触。在该方法的具体实施方案中，所述 肿瘤细胞为血癌细胞。在另一具体实施方案中，所述肿瘤细胞为多个血癌细胞。在另一具 体实施方案中，所述肿瘤细胞为实体瘤细胞。在另一具体实施方案中，所述肿瘤细胞为多个 实体瘤细胞。在另一实施方案中，所述肿瘤细胞为原发性导管癌细胞、白血病细胞、急性T 细胞白血病细胞、慢性髓细胞样淋巴瘤(CML)细胞、急性髓性白血病细胞、慢性髓性白血病 (CML)细胞、肺癌细胞、结肠腺癌细胞、组织细胞性淋巴瘤细胞、多发性骨髓瘤细胞、成视网 膜细胞瘤细胞、结肠直肠癌细胞或结肠直肠腺癌细胞。在另一具体实施方案中，所述接触在 体外进行。在另一具体实施方案中，所述接触在体内进行。在更具体的实施方案中，所述体 内接触在人体中进行。在另一具体实施方案中，所述胎盘灌洗液为已流经胎盘血管系统(例如仅流经胎 盘血管系统)的灌洗液。在另一具体实施方案中，所述胎盘灌洗液已流经胎盘血管系统，且 是从胎盘的母体面收集的。在另一具体实施方案中，所述胎盘灌洗液中所有的或基本上所 有的(例如大于90%、95%、98%或99%)的细胞是胎儿细胞。在另一具体实施方案中，所 述胎盘灌洗液包含胎儿细胞和母体细胞。在更具体的实施方案中，所述胎盘灌洗液中的胎 儿细胞包含少于约90%、80%、70%、60%或50%的所述灌洗液中的细胞。在另一具体实施 方案中，所述灌洗液是通过用0. 9% NaCl溶液流经胎盘血管系统获得的。在另一具体实施 方案中，所述灌洗液包含培养基。在另一具体实施方案中，所述灌洗液已经过处理除去了大 量红细胞。在另一方面，本专利技术提供了一种抑制肿瘤细胞或多个肿瘤细胞增殖的方法，该方 法包括将所述肿瘤细胞或众多肿瘤细胞与众多胎盘灌洗液细胞接触。在另一具体实施方案 中，所述众多胎盘灌洗液细胞是或包含来自胎盘灌洗液的所有有核细胞。在另一具体实施 方案中，所述胎盘灌洗液或胎盘灌洗液细胞(例如来自胎盘灌洗液的所有有核细胞)已经 过处理除去了至少一类细胞。在另一具体实施方案中，所述接触在体外进行。在另一具体 实施方案中，所述接触在体内进行。在更具体的实施方案中，所述体内接触在哺乳动物(例 如人类)中进行。在另一具体实施方案中，所述胎盘灌洗液细胞已经过处理从而富集了至少一类细胞，例如CD56+细胞。在另一具体实施方案中，所述胎盘灌洗液细胞为CD56+胎盘 细胞。在更具体的实施方案中，所述CD56+细胞为CD56+CD16_自然杀伤细胞，例如胎盘中间 体自然杀伤(PINK)细胞，所述细胞例如从胎盘灌洗液细胞获得，或从通过机械破坏或酶破 坏胎盘组织获得的胎盘细胞中获得。在另一具体实施方案中，所述CD56+细胞通过CD56-偶 联微珠选择。在另一具体实施方案中，所述CD56+细胞包含的细胞与等量的CD56+CD16+自然 杀伤细胞相比，显示出可检测的更低的NKG2D、NKp46或⑶94的表达。在另一具体实施方案 中，所述PINK细胞为CD3_。在更具体的实施方案中，在所述胎盘灌洗液细胞中的至少50% 的细胞是所述CD56本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抑制肿瘤细胞增殖的方法，该方法包括将所述肿瘤细胞与人胎盘灌洗液细胞接触。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】US 2007-9-28 60/995,763;US 2008-8-20 61/090,555一种抑制肿瘤细胞增殖的方法，该方法包括将所述肿瘤细胞与人胎盘灌洗液细胞接触。2.权利要求1的方法，其中所述肿瘤细胞为血癌细胞。3.权利要求1的方法，其中所述肿瘤细胞为实体瘤细胞。4.权利要求1的方法，其中所述肿瘤细胞为原发性导管癌细胞、白血病细胞、急性T细 胞白血病细胞、慢性髓细胞样淋巴瘤(CML)细胞、急性髓性白血病细胞、慢性髓性白血病 (CML)细胞、肺癌细胞、结肠腺癌细胞、组织细胞性淋巴瘤细胞、结肠直肠癌细胞、结肠直肠 腺癌细胞、或成视网膜细胞瘤细胞。5.权利要求1的方法，其中所述胎盘灌洗液是仅流经胎盘血管系统的灌洗液。6.权利要求1的方法，其中所述胎盘灌洗液已流经胎盘血管系统，并且从胎盘的母体 面被收集。7.权利要求1的方法，其中所述灌洗液是通过用0.9% NaCl溶液流经胎盘血管系统而 获得的。8.权利要求1的方法，其中所述灌洗液包含培养基。9.权利要求1的方法，其中所述灌洗液已经过处理除去了众多红细胞。10.权利要求1的方法，其中所述接触是体外接触。11.权利要求1的方法，其中所述接触是体内接触。12.权利要求11的方法，其中所述接触是在人体中。13.权利要求1的方法，其中所述众多胎盘灌洗液细胞是来自胎盘灌洗液的所有有核 细胞。14.权利要求1的方法，其中所述胎盘灌洗液细胞已经过处理除去了至少一类细胞。15.权利要求1的方法，其中所述胎盘灌洗液细胞已经过处理富集了至少一类细胞。16.权利要求1的方法，其中所述胎盘灌洗液细胞包含至少约50%的CD56+胎盘细胞。17.权利要求16的方法，其中所述⑶56+细胞是由⑶56-偶联微珠选择的。18.权利要求1的方法，其中所述灌洗液细胞和所述肿瘤细胞以每个肿瘤细胞约5个灌 洗液细胞的比例接触。19.权利要求1的方法，其中所述灌洗液细胞和所述肿瘤细胞以每个肿瘤细胞约10个 灌洗液细胞的比例接触。20.一种抑制肿瘤细胞增殖的方法，该方法包括将所述肿瘤细胞与众多CD56+、CD16lg 盘中间体自然杀伤(PINK)细胞接触。21.权利要求20的方法，其中所述接触在体外进行。22.权利要求20的方法，其中所述接触在体内进行。23.权利要求22的方法，其中所述接触在人体中进行。24.权利要求20的方法，其中所述肿瘤细胞为原发性导管癌细胞、白血病细胞、急性T 细胞白血病细胞、慢性髓细胞样淋巴瘤(CML)细胞、急性髓性白血病细胞、慢性髓性白血病 (CML)细胞、肺癌细胞、结肠腺癌细胞、组织细胞性淋巴瘤细胞、多发性骨髓瘤细胞、结肠直 肠癌细胞、结肠直肠腺癌细胞、或成视网膜细胞瘤细胞。25.权利要求20的方法，其中与外周血液自然杀伤细胞相比，所述PINK细胞以 可检测的更高水平表达以下微小RNA中的一种或多种hsa-miR-100、hsa-miR-127、hsa—miR-211、hsa_miR-302c、hsa-miR-326、hsa-miR-337、hsa-miR-497、hsa-miR-512_3p、 hsa-miR-515_5p、hsa_miR-517b、hsa_miR-517c、hsa-miR-518a> hsa_miR-518e、 hsa-miR-519d、hsa-miR-520g、hsa-miR-520h、hsa-miR-564、hsa-miR-566、hsa-miR-618、禾口 / 或 hsa-miR-99a。26.权利要求20的方法，其中将所述PINK细胞与一定量的免疫调节化合物接触一段时 间，所述量和所述时间足以使得所述PINK细胞与没有接触所述免疫调节化合物的等量的 PINK细胞相比表达可检测的更多的粒酶B。27.权利要求26的方法，其中所述免疫调节化合物为来那度胺或pomalidomide。28.权利要求20的方法，其中将所述PINK细胞与一定量的免疫调节化合物接触一段时 间，所述量和所述时间足以使得所述PINK细胞与没有接触所述免疫调节化合物的等量的 PINK细胞相比显示出对所述肿瘤细胞的可检测的更高的细胞毒性。29.权利要求28的方法，其中所述免疫调节化合物为来那度胺或pomalidomide。30.权利要求26或权利要求28的方法，其中所述PINK细胞与没有接触所述免疫调节 化合物的等量的PINK细胞相比，以更高水平表达BAX、CCL5、CCR5、CSF2、FAS、⑶SB、IL2RA、 或TNFRSF18中的一种或多种。31.权利要求2...

【专利技术属性】
技术研发人员：晓奎张，瓦内萨A沃斯基纳里安贝尔斯，琳康，尼拉弗迪利普帕德里亚，
申请(专利权)人：细胞基因细胞疗法公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]