用于制造肽的方法技术

用于制造环状肽的方法，该方法包括提供键合到梅里菲尔德型树脂上 的环状肽以及通过酯交换反应将该环状肽从所述梅里菲尔德型树脂上切 下。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】本申请要求美国临时申请60/832,649的权益，其内容通过参考并入本 申请中。本专利技术涉及用于制造肽及其中有用中间体的方法。肽类具有潜在的生物活性，并且现今已知相当众多的有用的基于肽之 药物。具有生物活性的肽的一个具体实例是Ac-Nle-Asp画His画D誦Phe-Arg-Trp誦Lys画OH(PT-141)，其是一种可用于治疗勃起功能障碍的候选药物(Drugs Fut 2004,29(6),第645页)。对于这种分子已开发了不同的合成方法。例如， Flora等人在Bioorg. Med Chem. Lett. 2005 (1065-1068 )中描述了用于该 分子的一种固相肽合成策略。然而，这种方法需要使用昂贵的王氏树脂(Wang type resins )以及极其昂贵的保护及脱保护技术。本专利技术的一个目的是提供一种可产业化的用于制造环状肽的方法，其 具有提高的环状产物产率。因此，本专利技术涉及一种用于制造环状肽的方法，该方法包括(a)提^M合到梅里菲尔德型树脂(Merrifield type resin)上的一种环状肽，以及(b )通过酯交^^应将该环状肽从所*里菲尔德型树脂上切下。出人意料地，已发现根据本专利技术的方法允许利用低成本的试剂进行工 业恥漠的环状肽或肽衍生物的制造。在根据本专利技术的方法中获得的环状肽 具有高纯度并且可以更容易地纯化，根据本专利技术的方法避免了使用常用于 将肽M里菲尔德型树脂上除去的HF。这是特别有利的，因为使用HF 是利用梅里菲尔德型树脂进行工业目肽合成的一个障碍。就本专利技术的目的而言，梅里菲尔德型树脂旨在具体表示一种氯甲基化的苯乙烯-二乙烯基苯共聚物，其可任选地被取代基所取代。更特别地优 选未经取代的氯甲基化的苯乙烯-二乙烯基苯共聚物。在才艮据本专利技术的方法中，所述环状肽的环状结构通常由2、 3、 4、 5、 6、 7、 8、 9、 10、 11、 12、 13、 14、 15、 16、 17、 18、 19或20个^J^酸 构成。该环状肽的环状结构优选地由5、 6、 7、 8、 9、 10、 11或12个^J^ 酸构成，并且更优选由6或7个M酸构成。在根据本专利技术的方法中，所述环状肽优选具有由羧基与M通过分子 内>^应所形成的酰胺键。在根据本专利技术的方法中，有利地使用醇或石克醇(特别是烷基醇或烷基 硫醇)来进行所述酯交^A应，特别是C1-C3醇，优选选自曱醇和乙醇。 更特别优选的是曱醇。曱硫醇或乙疏醇是优选的硫醇，特别是以其碱金属 盐的形式。当使用醇进行该酯交M应时，所负载的环化肽优选悬浮在该醇中或 者在该醇与适当的补充溶剂之混合物中。当使用硫醇进行该酯交M应时，所负载的环化肽优选悬浮在该硫醇 的盐在适当溶剂中的溶液中。在根据本专利技术的方法中，可以适当地使用酯交换反应催化剂，其可选 自例如碱，特别是亲核性碱例如胺(特别是叔胺)或具有空间位阻的醇盐 (例如叔醇盐，如叔丁醇钾)、阴离子交换树脂(特别是季铵型阴离子交 换树月旨(quaternary anion-exchange resin ))以及特另'J选自氰4fc物和氟4匕 物的亲核阴离子M金属盐(例如氰化钾或氟化钾)。叔胺特别是二异丙 基乙胺是优选的，并且最优选三乙胺。当使用酯交M应催化剂时，其在催化剂/溶剂混合物中的浓度通常为 0.5~3摩尔/升，优选为1~2.5摩尔/升，最优选约2摩尔/升。在一个特别的实施方案中，使用氛基醇来进行该酯交M应，所述氨 基醇特别地是具有叔胺官能团和伯醇官能团的氨基醇，例如特别是2-二曱 基氨基乙醇。在这个实施方案中，因为氨基官能团催化了该反应，所以不 需要使用额外的催化剂。在这个实施方案中，可以避免使用有毒的催化剂， 例如在Savoie et al. Can J. Chem. 1974第2832-9页中的铊衍生物。在根据本专利技术的方法中，所述酯交M应通常在0。C~100°C的温度 下进行，优选10。C 60。C。特别优选约25°C的温度。在根据本专利技术的方法中，所述酯交M应通常在大气压下进行。在根据本专利技术的方法中，游离的环状肽酸可以从步骤(b)中得到的环 状肽酯适当地获得，其通过与磁<^应来实现，所i2t^选自例如碱性的、季 铵或碱土金属的氢氧化物或碳酸盐。具体实例包括氢氧化四丁基铵、碳酸 钾以及氢氧化锂。优选的是氢氧化锂。在根据本专利技术的方法中，切割通常在pH8 10下进行。在根据本专利技术的方法中，所述任选的切割通常在0。C~100°C的温度 下进行，优选为10°C~60°C。特别优选约25°C的温度。在一个优选实施方案中，本专利技术涉及制造具有由羧基与氨基的分子内 反应形成之酰胺键的环状肽的方法，该方法包括(a) 提皿合到梅里菲尔德型树脂上的线性肽，该线性肽包含具有游离 M的第一JL&酸以及具有游离g的第二M酸；(b) 通过所述g与所述Jl^的分子内反应，对所负载的肽进行环化；(c) 通过酯交M应将所负载的环化肽从该梅里菲尔德型树脂上切下。、在，个实施方'案、中i所，，性肽通常在酰胺键形成试剂的存在下进，剂，例如在Bodansky， M. ， Principles of Peptide Synthesis,第2版.Springer Verlag Berlin/Heidelberg, 1993 ^描述的那些。酰胺键形成试剂的具体实例 选自混合酸酐以及其他酰化剂，例如活化酯或酰卣(例如氯曱酸异丁酯或 新戊酰氯)。它们可以是碳二亚胺(例如，1-乙基-3-(3-二曱基氨基丙基)-碳二亚胺)、活化的苯并三溱衍生物(DEPBT: 3-(二乙氧基磷,氧)-1，2,3-苯并三漆-4(3H)-酮)或苯并三唑的脲鐵(uronium)或磷総(phosphonium) 盐衍生物。一种优选的酰胺键形成试剂是二环己1^碳二亚胺。已发现这种廉价的 试剂在环化反应中提供良好的结果。本专利技术的方法还包括提供具有被保护 的氨基和,皮保护的氛基的线性肽前体。在这个实施方案中，所述氨基受到第一保护基团的保护。该第一保护 基团选自例如可在使所述线性肽与所述梅里菲尔德树脂相连接的键基本 保持完整的条件下被除去的保护基团。此类保护基团的优选实例包括可通过酸解被除去的M保护基团，其选自例如叔丁氧羰基、对甲氧基千氧 基羰基、二苯基甲lt^羰基以及优选地千l^羰基。这样的保护基的其他 实例包括可通过用金属或金属化合物还原而被除去的M保护基团，例如 三氯代乙氧基羰基。在这个实施方案中，所述羧基受到第二保护基团的保护。该第二保护 基团选自例如可在使所述线性肽与所述梅里菲尔德树脂相连接的键基本 保持完整的条件下被除去的保护基团。这样的保护基的优选实例包括可通 过酸解被除去的U保护基团，例如选自对甲氧节基、二苯甲基以及优 选地叔丁基。此类保护基团的其他实例包括可通过用金属或金属化合物还 原而被除去的保护基团，例如三氯乙基。在这个实施方案中，优先选择可在单一反应步骤中^L除去的第一和第 二保护基团。相应地，所述肽前体的保护基团可以在单一反应中被除去以 提供所述线性肽。可通过酸解在单一反应步骤中被除去的第一和第二保护 基团的合适组合的实例包括二苯基甲*^ /二苯甲基；对甲氧基节氧 基羰基/对甲氧节基，以及优选地叔丁氧羰基/叔丁基。可通过用金属本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于制造环状肽的方法，该方法包括：　（ａ）提供键合到梅里菲尔德型树脂上的环状肽，以及　（ｂ）通过酯交换反应将该环状肽从所述梅里菲尔德型树脂上切下。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2006.7.21 US 60/832,6491.用于制造环状肽的方法，该方法包括(a)提供键合到梅里菲尔德型树脂上的环状肽，以及(b)通过酯交换反应将该环状肽从所述梅里菲尔德型树脂上切下。2. 根据权利要求l所述的方法，其中使用C1-C3醇、优选曱醇来进 行所述酯交换反应。3. 根据权利要求l所述的方法，其中使用烷基硫醇、优选乙硫醇或 其盐来进行所述酯交M应。4. 根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述酯交换>^应 在pH 8 ~ 10下进行。5. 根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述环状肽的环 状结构由2、 3、 4、 5、 6、 7、 8、 9、 10、 11、 12、 13、 14、 15、 16、 17、 18、 19或20个^J^酸构成。6. 根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述环状肽通过 形成该环状结构之一部分的^酸键合到所i^里菲尔德型树脂上。7. 根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述环状肽具有 由g与^J^通过分子内反应而形成的酰胺键。8. 根据权利要求7所述的方法，其中键合到所*里菲尔德树脂上 的所述环状肽由以下方式提供(a) 提皿合到所g里菲尔德型树脂上的线性肽，该线性肽包含具 有游离氨基的第一氨基酸以及具有游离羧基的第二氨基酸，并且(b) 通过该^与该#^的分子内反应将键合到所*里菲尔德型 树脂上的所述线性肽环化。9. 根据权利要求8所述的方法，其中所述线性肽在酰胺键形成试剂 存在下被环化，该酰胺键形成试剂选自混合酸酐、活化酯、酰基卣、碳二 亚胺、活化的苯并三噪衍生物以及苯并三唑的脲鎗或磷鐵盐衍生物。10. 根据权利要求8或9所述的方法，该方法还包括提^合到所述 梅里菲尔德型树脂上的线性肽前体，该线性肽前体具有被保护的氨基和被 保护的氛基。11. 根据权利要求10所述的方法，其中所述氨基受到第一保护基团 的保护，该第一保护基团选自能够通过酸解被除去的^J^呆护基团，其选自例如叔丁氧g、对甲HJ^IU^^、 二苯曱li^a^以及优选地千氧基羰基，所述羧基受到第二保护基...

【专利技术属性】
技术研发人员：萨蒂什·乔希，希马·乔希，伯恩哈德·弗赖曼，曼纽尔·拉莫斯，罗兰·卡伦斯，
申请(专利权)人：索尔维公司，
类型：发明
国别省市：BE