用于检测恰菲埃里希氏体（ＶＬＰＴ）的方法和组合物技术

本发明专利技术提供了用于恰菲埃里希氏体的检测的方法和组合物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于检测恰菲埃里希氏体(VLPT)的方法和组合物优先权本申请要求2007年9月21日提交的U. S. Ser. No. 60/974, 196的权益，通过完全 引用将其合并在此。
技术介绍
埃里希氏体属是感染哺乳动物宿主中的循环淋巴细胞的专性细胞内的病原体。犬 埃里希氏体(Ehrlichia canis)和恰菲埃里希氏体(Ehrlichia chaffeensis)是感染犬和 人类的同一亚属组的成员，可以各自分别引起犬单核细胞埃里希氏体病(CME)和人类单核 细胞埃里希氏体病(HME)。犬疾病的特征在于发烧、淋巴结病、体重损失和全血细胞减少。 在人类中，疾病的特征在于发烧、头痛、mylagia和白血球减少。早期检测和治疗对于治疗 犬和人类埃里希氏体病都是重要的。间接的免疫荧光分析(IFA)和酶联免疫吸附测定(ELISA)经常用作这些疾病的诊 断中的辅助。这些分析测量或检测来自患者的血液、血浆或血清的抗埃里希氏体属抗体与 受感染细胞、细胞溶胞产物或纯化的埃里希氏体属蛋白质的结合。然而，用于检测抗恰菲埃 里希氏体抗体或其片段的许多分析在有用性方面是严重受限的，因为直接与这些测试中使 用的埃里希氏体属抗原的不纯性质相关的敏感性和特异性问题。另外，对犬埃里希氏体接 种的动物由于免疫交叉反应在测试恰菲埃里希氏体时显示阳性结果。需要高度纯化的、特 异性的试剂来构建更精确的分析。专利技术概述本专利技术的一个实施方式提供了包含SEQ ID NO 3的纯化的多肽，其中所述多肽由 少于约50个连续的天然存在的恰菲埃里希氏体氨基酸组成；包含SEQ ID NO :2的纯化的多 肽，其中所述多肽由少于约50个连续的天然存在的恰菲埃里希氏体氨基酸组成；包含SEQ IDNO 1的纯化的多肽，其中所述多肽由少于约50个连续的天然存在的恰菲埃里希氏体氨 基酸组成。所述纯化的多肽可以由SEQ ID N0:3、SEQ ID NO :2或SEQ ID N0:1组成。本 专利技术还提供了编码本专利技术的纯化的多肽的分离的多核苷酸。本专利技术的纯化的多肽可以连接到指示物试剂、氨基酸间隔区、氨基酸接头、信号序 列、终止转移序列、跨膜结构域、蛋白质纯化配体、异源多肽、包含SEQ ID N0:l、2、3、4、5、6 的一个或更多个另外的多肽，或其组合。本专利技术的纯化的多肽可以在多肽的氨基末端或羧 基末端或两个末端包含一个或更多个C氨基酸残基。本专利技术的另一个实施方式提供了检测特异性结合测试样品中的恰菲埃里希氏体 多肽的抗体的方法。所述方法包括在容许多肽/抗体复合物形成的条件下使包含SEQ ID NO :1、2、3、5或6的纯化的多肽与所述测试样品接触；其中所述纯化的多肽由少于约50个 连续的天然存在的恰菲埃里希氏体氨基酸组成；和检测所述多肽/抗体复合物。所述多肽/ 抗体复合物的检出是所述测试样品中存在特异于恰菲埃里希氏体的抗体的指示，没有所述 多肽/抗体复合物是所述测试样品中不存在特异于恰菲埃里希氏体的抗体的指示。所述复 合物可以在进行检测步骤之前接触指示物试剂。在本专利技术的一个实施方式中，所述纯化的 多肽是SEQ ID NO :1-3、5或6，所述方法不检测特异性结合犬埃里希氏体多肽的抗体。可以测定测试样品中抗体的量。纯化的多肽可以附着到基质上。纯化的多肽可以连接到指示物 试剂、氨基酸间隔区、氨基酸接头、信号序列、终止转移序列、跨膜结构域、蛋白质纯化配体、 异源蛋白质、包含SEQ ID N0:l、2、3、4、5或6的一个或更多个另外的多肽，或其组合。本专利技术的再另一个实施方式提供了检测受试者中恰菲埃里希氏体感染的方法。所 述方法包括从所述受试者获得生物样品；在容许多肽/抗体复合物形成的条件下使包含 SEQ ID NO :1、2、3、5或6的纯化的多肽与所述生物样品接触；其中所述纯化的多肽由少于 约50个连续的天然存在的恰菲埃里希氏体氨基酸组成；和检测所述多肽/抗体复合物。所 述多肽/抗体复合物的检出是所述受试者具有恰菲埃里希氏体感染的指示，没有所述多肽 /抗体复合物是所述受试者没有恰菲埃里希氏体感染的指示。在本专利技术的一个实施方式中， 所述纯化的多肽是SEQ ID N0:l、2、3、5或6，所述方法不检测所述受试者中的犬埃里希氏 体感染。本专利技术的另一个实施方式提供了特异性结合由SEQ ID N0:l、2、3、5或6组成的多 肽的抗体。所述抗体可以是单克隆抗体、多克隆抗体、抗原结合抗体片段或单链抗体。本专利技术的又一个实施方式提供了检测样品中的恰菲埃里希氏体多肽的方法。所述 方法包括在容许多肽/抗体复合物形成的条件下使特异性结合由SEQ ID N0:l、2、3、5或6 组成的多肽的抗体与样品接触；和检测所述多肽/抗体复合物。所述多肽/抗体复合物的 检出是恰菲埃里希氏体多肽存在于所述样品中的指示，没有所述多肽/抗体复合物是恰菲 埃里希氏体多肽不存在于所述样品中的指示。在本专利技术的一个实施方式中，所述纯化的多 肽可以是SEQ ID NO :1、2、3、5或6，所述方法不检测所述样品中的埃里希氏体属多肽。所 述抗体可以是单克隆抗体、多克隆抗体、抗原结合抗体片段或单链抗体。所述抗体可以附着 到基质上。因而，本专利技术提供了用于恰菲埃里希氏体的检测的组合物和方法。附图的简要描述附图IA和IB显示了实验上用恰菲埃里希氏体感染的狗的血清分析的结果。 VLPT-I (SEQ ID NO :5)(在附图中显示为“肽”)和VLPT-R(SEQ ID NO :4，其中在位置112 的X是P)(在附图中显示为“r-蛋白质”)不迟于感染后第7天都能够检测恰菲埃里希氏 体抗体。专利技术的详细说明恰菲埃里希氏体多肽如在此使用的，单数形式“一”、和“该”包括复数的对象，除非上下文中明确地另外 指示。多肽是通过酰胺键共价连接的两个或更多个氨基酸的聚合物。多肽可以被翻译后 修饰。纯化的多肽是基本上没有细胞材料、其他类型的多肽、化学物质前体、多肽的合成中 使用的化学物质、或其组合的多肽制品。基本上没有细胞材料、培养基、化学物质前体、用于 多肽合成的化学物质等的多肽制品具有低于约30%、20%、10%、5%、1%或更低的其他多 肽、培养基、化学物质前体和/或用于合成的其他化学物质。因而，纯化的多肽是大约70%、 80%、90%、95%、99%或更纯的。纯化的多肽不包括低于70%纯度的未纯化的或半纯化的 细胞提取物或多肽的混合物。术语“多肽”可以指一个或更多个一种类型的多肽(一组多肽)。“多肽”还可以指两种或更多种不同类型多肽的混合物(多肽的混合物)。术语“多肽(单数或复数)”也 可以各自指“一种或更多种多肽”。本专利技术的一个实施方式提供了如SEQ ID NO :1、SEQ ID NO :2、SEQ ID NO :3、SEQ ID NO :4、SEQ ID NO 5或SEQ ID NO 6中所示的纯化的恰菲埃里希氏体多肽。XSDLHXXXXVELXXPSKEEVQXEXDXXXXXX SEQ ID NO 1DSDLHGXFSVELFDPSKEEVQLESDLQQSSN SEQ IDNO 2NSDLHEXSFVELPGPSKEEVQFEDDAKNVVY SEQ ID NO 3对于所有序列，X代表任何氨基酸。在本专利技术的一个实施方本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种纯化的多肽，包含：（ａ）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３，其中所述多肽由少于约５０个连续的天然存在的恰菲埃里希氏体氨基酸组成；（ｂ）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２，其中所述多肽由少于约５０个连续的天然存在的恰菲埃里希氏体氨基酸组成；（ｃ）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１，其中所述多肽由少于约５０个连续的天然存在的恰菲埃里希氏体氨基酸组成。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】US 2007-9-21 60/974196一种纯化的多肽，包含(a)SEQ ID NO3，其中所述多肽由少于约50个连续的天然存在的恰菲埃里希氏体氨基酸组成；(b)SEQ ID NO2，其中所述多肽由少于约50个连续的天然存在的恰菲埃里希氏体氨基酸组成；(c)SEQ ID NO1，其中所述多肽由少于约50个连续的天然存在的恰菲埃里希氏体氨基酸组成。2.编码权利要求1的纯化的多肽的分离的多核苷酸。3.权利要求1的纯化的多肽，其中所述多肽由SEQID NO :3、SEQID NO 2或SEQ ID NO 1组成。4.权利要求1的纯化的多肽，其中所述纯化的多肽连接到指示物试剂、氨基酸间隔区、 信号序列、终止转移序列、跨膜结构域、蛋白质纯化配体、异源多肽、一种或更多种包含SEQ ID NO :1、2、3、4、5、6的其他多肽，或其组合。5.权利要求1的纯化的多肽，其中所述纯化的多肽包含在所述多肽的氨基末端或羧基 末端或两个末端的一个或更多个C氨基酸残基。6.一种检测测试样品中特异性结合恰菲埃里希氏体多肽的抗体的方法，包括(a)在容许多肽/抗体复合物形成的条件下使包含SEQID NO :1、2、3、5或6的纯化的 多肽与测试样品接触；其中所述纯化的多肽由少于约50个连续的天然存在的恰菲埃里希 氏体氨基酸组成；(b)检测所述多肽/抗体复合物；其中所述多肽/抗体复合物的检出是特异于恰菲埃里希氏体的抗体存在于所述测试 样品中的指示，其中没有多肽/抗体复合物是特异于恰菲埃里希氏体的抗体不存在于所述 测试样品中的指示。7.权利要求6的方法，进一步包括在进行步骤(b)之前使步骤(a)的复合物与指示物 试剂接触。8.权利要求6的方法，其中所述纯化的多肽包含SEQID NO :2或SEQ ID N0:5，其中所 述方法不检测特异性结合犬埃里希氏体多...

【专利技术属性】
技术研发人员：TP小奥康诺尔，ER克拉三世，JM索希亚，
申请(专利权)人：艾德克斯实验室公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]