制备共聚物-1的改进方法技术

本发明专利技术披露的主题提供了制备共聚物-1的新方法。在一个实施方案中， 用聚合引发剂处理N-羧基环内酸酐(NCAs)的混合物以引发N-羧基环内酸 酐的混合物的聚合，以及由此合成受保护的共聚物-1，所述N-羧基环内酸 酐包含丙氨酸、受保护的谷氨酸、受保护的赖氨酸，以及酪氨酸，以及其 中谷氨酸含有苄基或甲氧基保护基，赖氨酸含有环酰亚胺或Boc保护基。 然后可用脱保护剂处理受保护的共聚物-1和/或使受保护的共聚物-1解聚， 从而获得具有期望分子量的共聚物-1。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术披露的主题大体上涉及用于聚合氨基酸的方法。更具体而言，本专利技术披露的主题涉及制备共聚物-1的方法。
技术介绍
共聚物-1 (copolymer-l)是多肽的复杂混合物(complex mixture),所述多肽是由对氨基酸，即谷氨酸、赖氨酸、丙氨酸和酪氨酸进行聚合而制备的。共聚物-1也称为乙酸格拉默(glatiramer acetate， GA),并且具有以下结构式(Glu， Ala, Lys, Tyr)x XCH3COOH(C5H9N04C3H7N02.C6H14N202.C9H N03),XC2H402乙酸才各4立默是COPAXONE (Teva Pharmaceutical Industries Ltd., Israel)的活性成份，其包含合成多肽的乙酸盐，所述合成多肽含有四种天然存在的氨基酸L-谷氨酸、L-丙氨酸、L-酪氨酸和L-赖氨酸，这四种氨基酸所报道的平均摩尔分数(molarfraction)分别为0.141、 0.427、 0.095和0.338。乙酸格拉默用于治疗复发-緩解型多发性硬化(relapsing-remitting formof multiple sclerosis, RRMS)。
技术实现思路
本专利技术披露的主题提供了制备共聚物-1的方法。在一个实施方案中，使N-羧基环内酸酐(N-carboxyanhydrides, NCAs)的混合物与聚合引发剂接触以引发N-羧基环内酸酐的混合物的聚合，从而形成受保护的共聚物-1，所述N-羧基环内酸酐包含丙氨酸、受保护的谷氨酸、受保护的赖氨酸，以及酪氨酸，其中受保护的谷氨酸含有苄基或甲氧基保护基，以及受保护的赖氨酸含有环酰亚胺(cyclic imide)或叔丁氧基羰基(Boc)保护基。然后可用一种或多种脱保护剂处理受保护的共聚物-1，和/或对受保护的共聚物-1进行解聚。在一个实施方案中，所述方法包括对受保护的谷氨酸和受保护的赖氨酸进行脱保护，从而生成共聚物-l。在一些实施方案中，所述方法还包括在进行N-羧基环内酸酐混合物的聚合时，测量共聚物-1的分子量。在聚合进行时测量分子量使得可以在共聚物-1已经获得期望的分子量时终止聚合反应，或者在一些实施方案中，终止解聚反应(depolymerization reaction)。在一个实施方案中，可通过一种或多种联机方法(in-line method)、在线方法(on-line method)、离线方法(off-line method),以及所述方法的组合来确定分子量。在一个实施方案中，在聚合反应进行时可通过以下方式确定分子量使用红外(IR)探针来测量反应混合物中氨基曱酸酯部分基的量(通过氨基曱酸酯部分的 一种或多种特征性红外吸收带的强度确定)。然后可以使测量的氨基曱酸酯部分的量与模型(所述模型将分子量关联为反应混合物中存在的氨基曱酸酯部分的量的函数)相关联。在另一实施方案中，可在解聚反应期间测量酰胺羰基部分的量。可以使测量的酰胺羰基部分的量与模型(所述模型将分子量关联为反应混合物中存在的酰胺羰基部分的量的函数)相关联。本专利技术披露的方法克服了可能与制备多肽如共聚物-1的现有技术方法相关的许多问题。更具体而言，本专利技术披露的方法能够更有效，并且能够合成具有期望分子量的共聚物-1。在上文中已经说明了本专利技术所披露主题的某些方面，这些方面可通过本专利技术披露的主题整体或部分地得到解决，并且随着本申请说明书的展开以及当与下文中最佳描述的实施例和附图结合时，其它方面将会变得明显。附图说明由于已概括地描述了本专利技术披露的主题，现在参照附图(附图未必是按比例绘制的)，以及其中图1是描述用于制备共聚物-1的本专利技术所披露方法的代表性非限制实施方案，其中谷氨酸用曱氧基保护基保护，以及赖氨酸用Boc保护基保护；以及图2是描述用于制备共聚物-1的本专利技术所披露方法的代表性非限制实施方案，其中谷氨酸用千基保护基保护，以及赖氨酸用邻苯二曱酰基(phthaloyl)保护基保护。具体实施例方式以下参照附图，更充分地描述本专利技术披露的主题，这些附图显示了本专利技术披露主题的一些实施方案，但并非所有的实施方案。受益于前述说明书和相关附图所表现出的教导，本专利技术披露主题所属领域的技术人员将会意识到对本申请列出的本专利技术披露主题进行各种修改和其它实施方案。因此，应该理解的是，本专利技术披露的主题并非局限于所披露的具体实施方案，并且修改和其它实施方案意图包括在所附权利要求的范围内。尽管本申请使用了具体的术语，但是它们仅用于一般意义和描述性意义，并非出于限制的目的。当在本申请(包括权利要求书在内)使用术语一个/种(a)、一个/种(an)和所述(the)时，它们是指一种或多种或一个或多个。因此，例如当提及试样时，包括多个试样，除非上下文中有明确的相反指示(例如，多个试样)，等等。在本申请中引入所有出版物、专利申请、专利和其它参考文献作为参考，所引用的程度就如同每篇出版物、专利申请、专利和其它参考文献被明确和单独地指示引入作为参考一样。应该理解的是，尽管本申请参考许多专利申请、专利和其它参考文献，这些参考并非构成了对任何这些文件形成了本领域的公知常识的一部分的认可。在说明书全文中，当将组合物描述为具有(having)、包括(including)或包含(comprising)各种具体组分时，或者当将工艺或方法描述为具有、包括或包含特定步骤时，预期本专利技术披露主题的组合物还可基本上由所述组分组成，或者由所述组分组成，以及本专利技术披露主题的工艺或方法还可基本上由所述步骤组成，或者由所述步骤组成。此外，应该理解的是，只要本专利技术披露的主题保持是可操作的，各步骤的顺序或进行某些操作的顺序并非是重要的。而且，就本专利技术披露的主题而言，可同时进行两步或多步步骤或操作。在 一 些实施方案中，本专利技术披露的主题提供了制备合成肽(syntheticpolypeptide)如共聚物-l的方法，其中对具有受保护的氨基酸和未保护的氨基酸的N-羧基环内酸酐(NCAs)的混合物进行聚合，从而形成多肽。如本申请使用的多肽是指包含氨基酸残基的聚合物，所述氨基酸残基是通过酰胺键(通常称为肽键)结合在一起的。肽键是由氨基酸C末端上的羰基与另一个氨基酸N末端上的氨基之间的键形成的。当多个氨基酸使用这些肽键7结合时，它们形成了多肽。多肽可包括由相同氨基酸、不同氨基酸，或相同氨基酸或不同氨基酸的组合而形成的聚合物。多肽可以具有氨基酸的随机排列，或氨基酸的有序排列。在一些实施方案中，多肽可以是仅由L氨基酸或D氨基酸组成的聚合物，或由一些任意比例的L氨基酸和D氨基酸的组合组成的聚合物。更具体而言，在一些实施方案中术语多肽混合物是指氨基酸共聚物的混合物，所述氨基酸包含L-谷氨酸、L-丙氨酸、L-酪氨酸和L-赖氨酸，或这四种氨基酸的类似物或衍生物。如本申请使用的，术语共聚物、氨基酸共聚物或氨基酸共聚物制剂，，是指由限定的多个不同氨基酸(通常为2-10个，例如2、 3、 4、 5、6、 7、 8、 9或10个不同氨基酸，以及在一些实施方案中，为3-6个，例如3、 4、 5或6个不同氨基酸)组成的多肽的异质混合物(heterogenousmixture)。如本申请描述的，共聚物可由单独氨基酸的聚合来制备。术语氨基酸不限本文档来自技高网...

【技术保护点】
制备共聚物－１的方法，所述方法包括：　（ａ）使具有下式的Ｎ－羧基环内酸酐的混合物与聚合引发剂反应以引发Ｎ－羧基环内酸酐的混合物的聚合，从而形成受保护的共聚物－１；　＊＊＊　其中Ｒ↓［１］包含选自丙氨酸、受保护的谷氨酸、受保 护的赖氨酸，以及酪氨酸中的一种或多种氨基酸；以及其中所述受保护的谷氨酸含有苄基或甲氧基保护基，以及所述受保护的赖氨酸含有环酰亚胺或叔丁氧基羰基保护基；　（ｂ）对受保护的谷氨酸进行脱保护；　（ｃ）对受保护的赖氨酸进行脱保护，从而形 成共聚物－１。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2006.7.5 US 60/806,5851. 制备共聚物-1的方法，所述方法包括(a)使具有下式的N-羧基环内酸酐的混合物与聚合引发剂反应以引发N-羧基环内酸酐的混合物的聚合，从而形成受保护的共聚物-1；其中R1包含选自丙氨酸、受保护的谷氨酸、受保护的赖氨酸，以及酪氨酸中的一种或多种氨基酸；以及其中所述受保护的谷氨酸含有苄基或甲氧基保护基，以及所述受保护的赖氨酸含有环酰亚胺或叔丁氧基羰基保护基；(b)对受保护的谷氨酸进行脱保护；(c)对受保护的赖氨酸进行脱保护，从而形成共聚物-1。2. 权利要求1的方法，所述方法还包括d) 在进行N-羧基环内酸酐的混合物聚合的期间，确定共聚物-l的分子 量至少一次；以及e) 当共聚物-1的分子量具有预定值或在预定范围内时，终止对N-羧基 环内酸酐的混合物的聚合。3. 权利要求l的方法，其中所述聚合引发剂选自二乙胺、叔丁醇钾、 NaH、 KH、三乙胺、四曱基哌啶、二环己基胺、二环己基十一烷、二异丙 基氨基锂、叔丁基锂，以及上述物质的组合。4. 权利要求1的方法，其中对所述受保护的谷氨酸进行脱保护是在对 所述受保护的赖氨酸脱进行脱保护之前进行的。5. 权利要求1的方法，其中通过用NaOH对所述受保护的共聚物-l进 行处理来对所述受保护的谷氨酸进行脱保护。6. 权利要求1的方法，其中通过用HBr的水乙酸溶液对所述受保护的 共聚物-1进行处理来对所述受保护的赖氨酸进行脱保护。7. 权利要求1的方法，其中所述环酰亚胺选自邻苯二甲酰亚胺、N-四氯邻苯二曱酰亚胺、4-硝基-N-邻苯二甲酰亚胺、N-二硫代琥珀酰亚胺、N-2,3-二苯基马来酰亚胺、N-2，5-二曱基吡咯、N-2，5-二(三异丙基曱硅烷氧基)p比咯 和N-1,1,4,4-四曱基二曱硅烷基氮杂环戊烷加成物。8. 权利要求1的方法，其中所述共聚物-1包含摩尔比例分别为约 5-7:1-3:4-6:0.2-2.2的丙氨酸、谷氨酸、赖氨酸和酪氨酸。9. 权利要求l的方法，其中N-羧基环内酸酐的混合物如下制备使光 气或光气替代物与具有以下结构的多种氨基酸反应，其中R,包含选自丙氨酸、受保护的谷氨酸、受保护的赖氨酸，以及酪氨酸 中的一种或多种氨基酸；以及其中所述受保护的谷氨酸含有千基或曱氧基 保护基，以及所述受保护的赖氨酸含有环酰亚胺或叔丁氧基羰基保护基。10. 由权利要求1的方法制备的共聚物-1。11. 选择性制备分子量在约2千道尔顿至约25千道尔顿之间的共聚物 -1的方法，所述方法包括(a)使具有下式的N-羧基环内酸酐的混合物与聚合引发剂反应以引发 ...

【专利技术属性】
技术研发人员：马尼·S·艾耶，科琳·鲍尔，帕特·奥利弗谢弗，
申请(专利权)人：莫门塔制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：US