肽配体定向药物递送制造技术

本发明专利技术基于其３Ｄ晶体结构，本发明专利技术提供了用于结合ＥＧＦＲ表面口袋的新型肽配体（Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｌｅｕ－Ｔｈｒ）。当与脂质体表面ＰＥＧ部分的远端接合时，肽定向脂质体被ＥＧＦＲ高表达的癌细胞（Ｈ１２９９和ＳＰＣＡ１）特异性且有效地结合和摄取。向细胞靶向递送脂质体抗癌药物阿霉素可以在体外获得更好的疗效。在体内，通过尾静脉注射靶向脂质体，使用活体动物荧光显像系统研究其在异种移植肿瘤组织中的分布和蓄积的时间过程。看到ＬＡＲＬＬＴ靶向脂质体在肿瘤位点逐步富集，并且优选在注射后保持８０小时以上。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】肽配体定向药物递送
技术介绍
在癌症的治疗中，广泛使用了化学疗法，但药物对正常组织的毒性导致的严重副 作用经常削弱其疗效。为了改善化疗剂的治疗指数，许多研究已经将重点放在向肿瘤组织 特异性递送药物，而避免向正常组织递送药物的策略上。已经开发并且已经在患者中使用了几种基于脂质体的抗癌药物制剂，与非脂质体 制剂相比，它们具有更好的疗效和更小的副作用。Doxil (也被称为Caelyx)是最成功的产 品之一(1)，其包含涂覆PEG的脂质体(隐形脂质体)，具有延长的血清半衰期和通过渗漏 脉管系统(leakyvasculatures)逐步外渗并在肿瘤中蓄积的能力。除了这样的被动靶向机 制外，还提出了主动靶向策略，其中使用抗体或靶向配体对脂质体定向，以进一步促进载药 脂质体与肿瘤之间的相互作用。已经对抗体靶向免疫脂质体进行了深入研究，并且在动物 和临床研究中都表现出潜力(2-6)。同时，为了治疗癌症，还检验了以小分子配体(7，8)和 肽(9，10)构建主动靶向脂质体。与计算机模拟(in silico)或体外(in vitro)结合研究相比，用于结合的体内 (in vivo)环境复杂得多，其中有许多解剖学上的屏障以及来自如网状内皮系统(RES)的 天然清除机制和其他非特异性相互作用的干扰。已经利用免疫脂质体和小分子靶向脂质体 确定了许多变量(variables) (33，34)。已经确定了几种影响各种主动靶向脂质体的药物 代谢动力学特性和外渗行为的因素(33，34)。对表面结合的配体的免疫清除是主要关注点 (35，36)。发现包含IgG的免疫脂质体与Fc受体相互作用并被迅速清除(37，38，39)。甚至 小分子配体叶酸的结合都会导致体内脂质体的RES清除增强(8)。此外，还发现表面配体密 度(40)和PEG接头的长度(8,9)都很重要。表皮生长因子受体(EGFR)在很多种人类癌症中过表达，包括但不限于肺癌、乳腺 癌、膀胱癌和卵巢癌。还发现其与各种晚期疾病和不良预后的特征有关(11)。已有报道称 各种EGFR靶向载体和接合物能够提高细胞毒性药物、毒素或放射性核素向癌细胞的递送， 并抑制动物模型中肿瘤的生长(12-16)。Mamot及其同事开发出一种EGFR特异性免疫脂质 体，一系列研究表明其在体内和体外都有较好的递送特性和抗肿瘤效果(17-19)。已经有几种药物被成功地开发成EGFR靶向，包括酪氨酸激酶抑制剂特罗凯 (Tarceva )和易瑞沙 (Iressa )，以及其封闭抗体爱必妥 (Erbitux )。除了设 计定向于EGFR的药物外，其他策略是开发能够将现有治疗剂定向至EGFR的系统。许多研 究已经开发出利用其天然配体_表皮生长因子(EGF)，来靶向递送细胞毒性药物、毒素、脂 质体，以及其它药物/基因递送系统和放射性核素系统(12-15)。但是EGF对癌症细胞的内 源性促增殖效应一直是关注点。提出了两种其它策略。一种是使用抗体或抗体片段来定向 结合到EGFR(17，18，27)，另一种是使用较小的肽或EGF片段(12，28，29)。能与EGFR强有 力地特异性结合，但具有小免疫原性和促增殖效应的小肽是非常需要的。在本领域内还需要有效地向靶细胞，例如EGFR过表达的细胞递送治疗剂的材料 和方法。本专利技术满足了这种需求及其他需求。专利技术概述本专利技术提供能够用于向期望的靶细胞递送药物，例如治疗剂和/或显像剂的肽。 在一个实施方案中，本专利技术提供的肽包含选自下列的序列SEQID N0:1、SEQ ID NO :3、SEQ ID NO :4、SEQ ID NO :5、SEQ ID NO :6、SEQID NO 7 和 SEQ ID NO :8。在一个实施方案中， 肽可以包含序列LARLLT(SEQ ID N0:1)。本专利技术的肽可以是任意长度，例如长度为从大约 6个氨基酸到大约15个氨基酸或从大约6个氨基酸到大约10个氨基酸。本专利技术的肽的长 度可以是6、7、8、9、10或更多个氨基酸。在某些实施方案中，本专利技术的肽的长度为6个氨基 酸，并由选自 SEQ ID NO SEQ ID NO :3、SEQ ID NO :4、SEQ ID NO :5、SEQ ID NO :6、SEQ ID NO :7和SEQ ID NO :8的序列组成。在某些实施方案中，本专利技术的肽可以由氨基酸序列 LARLLT组成。本专利技术还提供了模拟本专利技术的肽的EGFR结合活性的模拟肽，以及保留其功能 的氨基酸取代。在另一个实施方案中，本专利技术的肽和模拟肽可以直接或间接地连接一种或多种化 合物。在某些实施方案中，本专利技术的肽与治疗剂和/或显像剂连接。在一个实施方案中，本 专利技术提供了包含脂质和肽的分子，所述肽包含选自下列的序列SEQ ID N0:U SEQ ID NO 3,SEQ ID N0:4、SEQ IDN0 :5、SEQ ID NO :6、SEQ ID NO :7 禾口 SEQ ID NO :8。在某些实施方 案中，肽可以包含序列LARLLT。任选地，肽可以通过使用接头间接地连接到脂质。可以使用 本领域技术人员已知的任何接头。可以与本专利技术的肽和模拟肽连接的适合脂质的例子包括 但不限于，1，2-二硬脂酰基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺(DSPE)。在某些实施方案中，接头 可以包括聚乙二醇(PEG)。连接接头的脂质的例子为1，2-二硬脂酰基-sn-甘油基-3-磷 酸乙醇胺-N-[甲氧基(聚乙二醇)-2000] (DSPE-PEG2000)。这样的分子可以进一步连接一 种或多种本专利技术的肽和模拟肽。本专利技术的肽和模拟肽可以连接活性剂，例如治疗剂和/或显像剂。连接可以是直 接或间接的。本专利技术的肽和模拟肽可以通过肽或模拟肽与活性剂上的官能团直接反应来连 接活性剂。本专利技术的肽和模拟肽可以通过肽和活性剂与接头反应间接连接活性剂。通常， 接头为能够与肽和活性剂都形成共价连接的双官能分子。在另一个实施方案中，本专利技术包括脂质体。本专利技术的脂质体的例子为包含含有本 专利技术的脂质和肽的分子的脂质体，例如所述肽包含选自下列的序列SEQ ID N0:1、SEQ ID N0:3、SEQ ID N0:4、SEQ ID N0:5、SEQ IDN0:6、SEQ ID NO :7 禾口 SEQ ID NO :8。在某些实 施方案中，肽可以包含序列LARLLT。如上所述，用于本专利技术的脂质体的分子可以包含位于脂 质部分与肽部分之间的接头。在一个实施方案中，脂质可以为1，2-二硬脂酰基-811-甘油 基-3-磷酸乙醇胺(DSPE)。在一个实施方案中，接头可以为聚乙二醇(PEG)。在一个实施方 案中，脂质-接头-肽的组合可以为1，2- 二硬脂酰基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺-N-[甲 氧基(聚乙二醇)_2000] (DSPE-PEG2000)-LARLLT。本专利技术的脂质体可以使用任何本领域技 术人员已知的脂质或脂质组合来制备。可以用于制备脂质体的适合脂质的例子包括但不限 于磷脂(例如，磷脂酰胆碱、磷脂酰甘油和磷脂酰乙醇胺)，溶血脂质和聚乙二醇化的磷脂。 适合的脂质可以以任意比率组合。任选地，用于本专利技术的脂质体可以为热敏脂质体，其由具 有从大约39. 0°C到大约45°C的凝胶向液体的相变温度的脂质组成。基本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种包含选自下列的序列的肽：ＳＥＱＩＤＮＯ：１、ＳＥＱＩＤＮＯ：３、ＳＥＱＩＤＮＯ：４、ＳＥＱＩＤＮＯ：５、ＳＥＱＩＤＮＯ：６、ＳＥＱＩＤＮＯ：７和ＳＥＱＩＤＮＯ：８，其中肽的长度为大约６个到大约１５个氨基酸。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】一种包含选自下列的序列的肽SEQ ID NO1、SEQ ID NO3、SEQID NO4、SEQ ID NO5、SEQ ID NO6、SEQ ID NO7和SEQ ID NO8，其中肽的长度为大约6个到大约15个氨基酸。2.根据权利要求1所述的肽，其包含SEQID NO :1。3.根据权利要求1所述的肽，其由SEQID NO 1组成。4.一种包含与肽结合的脂质的分子，该肽包含选自下列的序列SEQID NO=U SEQ ID NO :3、SEQ ID NO :4、SEQ ID NO :5、SEQ ID NO :6、SEQID NO 7 禾口 SEQ ID NO :8。5.根据权利要求4所述的分子，其包含位于所述脂质和所述肽之间的接头。6.根据权利要求5所述的分子，其中所述脂质为1，2-二硬脂酰基-sn-甘油基-3-磷 酸乙醇胺(DSPE)。7.根据权利要求5所述的分子，其中所述接头包含聚乙二醇(PEG)。8.根据权利要求4所述的分子，其包含1，2-二硬脂酰基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇 胺-N_[甲氧基(聚乙二醇)-2000] (DSPE-PEG2000)。9.根据权利要求4所述的分子，其包含SEQID NO :1。10.一种脂质体，其包含包含与肽结合的脂质的分子，其中肽包含选自下列的序列:SEQ ID NO =USEQ ID N0:3、SEQ IDN0:4、SEQ ID NO :5、 SEQ ID NO :6、SEQ ID NO 7 和 SEQ ID NO :8。11.根据权利要求10所述的脂质体，其中所述分子包含位于所述脂质和所述肽之间的接头。12.根据权利要求10所述的脂质体，其中所述脂质为1，2_二硬脂酰基-sn-甘油 基-3-磷酸乙醇胺(DSPE)。13.根据权利要求12所述的脂质体，其中所述接头包含聚乙二醇(PEG)。14.根据权利要求12所述的脂质体，其包含1，2-二硬脂酰基-sn-甘油基-3-磷酸乙 醇胺-N_[甲氧基(聚乙二醇)-2000] (DSPE-PEG2000)-LARLLT。15.根据权利要求10所述的脂质体，其中所述脂质体进一步包含选自下列的脂质磷 脂酰胆碱、磷脂酰甘油和溶血脂质。16.根据权利要求10所述的脂质体，其中所述脂质体包括1，2-二棕榈酰基-811-甘油 基-3-磷酸胆碱(DPPC)和单硬脂酰基磷脂酰胆碱(MSPC)。17.根据权利要求10所述的脂质体，其进一步包含选自治疗化合物和显像化合物的化 合物。18.根据权利要求17所述的脂质体，其中所述脂质体包含双分子层并限定内部空间， 所述化合物位于脂质体的内部空间、脂质体的双分子层之中或者位于内部空间和双分子层 之中。19.根据权利要求17所述的脂质体，其中所述治疗化合物为抗癌化合物。20.根据权利要求19所述的脂质体，其中所述抗癌化合物选自烷化剂、抗代谢物、纺 锤体毒素植物生物碱、细胞毒性抗肿瘤抗生素、拓扑异构酶抑制剂、单克隆抗体或其片段、 光敏剂、激酶抑制剂、抗肿瘤酶和酶的抑制剂、细胞凋亡诱导剂、生物反应调节剂、抗激素、 类视黄醇和含钼化合物。21.根据权利要求19所述的脂质体，其中所述抗癌化合物选自多烯紫衫醇、阿霉素和 卡钼。22.根据权利要求17所述的脂质体，其包含显像剂。23.根据权利要求17所述的脂质体，其包括1，2-二硬脂酰基-sn-甘油基-3-磷酸乙 醇胺-N_[甲氧基(聚乙二醇)_2000] (DSPE-PEG2000)-LARLLT，其中所述治疗剂为卡钼。24.一种向有需要的受试者给予化合物的方法，其包括将化合物与肽结合，该肽包含选自下列的序列SEQ ID NO =USEQ IDNO :3、SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO :5、SEQ ID NO :6、SEQ ID NO 7 和 SEQID NO 8 ；以及 用结合肽的化合物接触受试者。25.根据权利要求24所述的方法，其中所述肽连接脂质，肽连接的脂质为脂质体形式。26.根据权利要求24所述的方法，其中所述肽连接的脂质包含位于所述脂质和所述肽 之间的接...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐宇虹，宋姝贤，刘丹，
申请(专利权)人：上海交通大学，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]