对禽流感病毒的特异性快速诊断法制造技术

本发明专利技术提供一种检测禽流感病毒的方法，其利用免疫学测定法，使用对人流感Ａ型病毒Ｈ１亚型、Ｈ２亚型、Ｈ３亚型及人流感Ｂ型病毒不显示反应性，而对禽流感病毒的多种亚型显示反应性的抗流感病毒抗体，检测出禽流感病毒。本发明专利技术提供一种运用于此的免疫层析法试验用具。通过本发明专利技术，可以与人流感病毒进行区分，特异性且快速简便地检测出禽流感病毒。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种禽流感病毒检测方法及检测禽流感病毒用免疫层析试 验用具。
技术介绍
流感病毒因核蛋白质(NP)和膜蛋白质(M)的抗原性不同而分为A 型、B型和C型。其中流感A型病毒又根据血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)的 氨基酸序列或抗原性的不同，把HA分为H1 15十五种，NA分为N1 9九种， 还有其组合的多种亚型。其中，以人为宿主感染到人的亚型为H1 3、 Nl~2。 流感A型病毒(Hl~3、 Nl~2)和流感B型病毒(以下有时也称为人流感 病毒)是每年引起大范围流行的所谓流感(人流感)的原因。流感A型病毒不仅感染人，也感染大多数哺乳动物和鸟类。流感A型病 毒感染鸟类引起的鸟类的感染症就是禽流感，作为其原因的禽流感病毒 已确认有H1 15、 Nl 9的所有亚型。禽流感病毒的虽然大部分不显示出重 症，但H5和H7亚型的禽流感病毒中在感染到鸟类时有的会出现严重症状。 这些被称为高致病性禽流感病毒，对人类感染的可能性令人担忧。另外， H9亚型禽流感病毒中也有人类与感染病毒的家禽接触后被感染、发病的报 告，因此，其在人类中扩大感染范围也令人担忧。目前，在临床上，用快速检测流感病毒抗原的试剂盒对流感进行诊断。 这种快速诊断试剂盒如有以酶免疫测试法(EIA)和免疫层析法为原理使用 的试剂，有的仅检测流感A型病毒(参照如专利公开2006—67979号公报 等)、有的一揽子检测流感A型病毒和流感B型病毒，有的则分别检测流感 A型病毒和流感B型病毒等等。然而，专利文献1的快速诊断试剂盒不能区分是人流感A型病毒还是禽 流感病毒，只能检测属于流感A型病毒的这一大范围的病毒。因此，当人出4现流感征兆时，无法诊断是禽流感病毒所致还是人流感病毒所致。为此需要 研制能快速诊断出禽流感病毒的方法。
技术实现思路
本专利技术的目的是，鉴于上述情况，提供一种能区别于人流感病毒、特 异、迅速、简便地检测出禽流感病毒的方法及用于此方法的免疫层析试验用 具。本专利技术为了达到上述目的，采取了以下技术手段。本专利技术与禽流感病毒检测方法相关，其特征在于用一种只对禽流感病毒的若干亚型显示反应性而对人流感A型病毒H1亚型、H2亚型和H3亚型 以及人流感B型病毒不显示反应性的抗流感病毒抗体，通过免疫学测定方法 检测试样中的禽流感病毒。上述禽流感病毒检测方法适于上述抗流感病毒抗体显示反应性的禽流 感病毒亚型中至少有一个是选自由禽流感病毒H5亚型、H7亚型和H9亚型 构成的群体。在上述禽流感病毒检测方法中，上述抗流感病毒抗体也可以至少对 H3 15亚型禽流感病毒显示反应性。在上述禽流感病毒检测方法中，作为上述抗流感病毒抗体，可以使用 抗流感A型病毒核蛋白质的抗体，也可以使用能识别禽流感病毒核蛋白质的 氨基酸序列N端起第46位 第159位区域的表位的抗体。在上述禽流感病毒检测方法中，上述抗流感病毒抗体最好是由国际寄 存受理号FERMABP—10904 (国内寄存受理号FERMP—20822)杂交 瘤产生的单克隆抗体。在上述禽流感病毒检测方法中，最好是所述免疫学测定法包括这一步骤用抗流感病毒的第一和第二抗体形成含有被标记的上述第一抗体、固定 在固相上的上述第二抗体及流感病毒的复合物，且至少上述第二抗体最好是对人流感A型病毒H1亚型、H2亚型和H3亚型以及人流感B型病毒不显示反 应性、而对禽流感病毒的若干亚型显示反应性的抗流感病毒抗体。上述第一和第二抗体最好是对人流感A型病毒H1亚型、H2亚型和H3 亚型以及人流感B型病毒不显示反应性、而对禽流感病毒的若干亚型显示反 应性的抗流感病毒抗体。所述免疫学测定法最好是免疫层析法。所述免疫层析法最好包括在固定有上述第二抗体的层析膜担体上形成 包含该第二抗体、被标记的上述第一抗体和流感病毒的复合物的步骤，且上 述第二抗体最好是对人流感A型病毒H1亚型、H2亚型和H3亚型以及人流感 B型病毒不显示反应性、而对禽流感病毒的若干亚型显示反应性的抗流感病 毒抗体。本项关于免疫层析试验用具的专利技术是利用抗流感病毒的第一和第二抗体检测试样中所含流感病毒的免疫层析试验用具，其特征在于具有添加上 述试样的试样添加部件、放置被标记物标记的第一抗体的标记物固定部件和 配置了固定有第二抗体的判断区的层析膜担体，上述第一抗体对禽流感病毒显示反应性，上述第二抗体是对人流感A型病毒H1亚型、H2亚型和H3亚型 以及人流感B型病毒不显示反应性、而对禽流感病毒的若干亚型显示反应性 的抗流感病毒抗体。在上述免疫层析试验用具中，所述标记物最好是非溶性粒状标记物。 其中尤以显色合成高分子粒子或胶体金属粒子为宜。附图说明为本专利技术一实施方式所涉及的免疫层析试验用具的截面图。为特定单克隆抗体4E3和1C10所识别抗原的试验结果的显示图。 [图3]为r一人流感NP、 r一禽流感NP、 r一Chl流感NP、 r一Ch2流感NP、 r一Ch3流感NP和r一Ch4流感NP的氨基酸序列的示意图。 [图4]为r一人流感NP和r一禽流感NP以及来源于12种人流感病毒株的NP和来源于12种禽流感病毒株的NP的氨基酸序列第1位到第50位的显示图。为相同氨基酸序列第51位到第100位的显示图。 [图6]为相同氨基酸序列第101位到第150位的显示图。[图7]为相同氨基酸序列第151位到第200位的显示图。为相同氨基酸序列第201位到第250位的显示图。为相同氨基酸序列第251位到第300位的显示图。为相同氨基酸序列第301位到第350位的显示图。为相同氨基酸序列第351位到第400位的显示图。为相同氨基酸序列第401位到第450位的显示图。为相同氨基酸序列第451位到第504位的显示图。为4E3和抗His-Tag抗体对各种基因重组NP的反应性的比较图。具体实施例方式禽流感病毒检测方法是一种用只对禽流感病毒的若干种亚型显示反应性而不对人流感A型病毒H1亚型、H2亚型和H3亚型以及人流感B型病毒显 示反应性的抗流感病毒抗体、通过免疫学测定方法检测试样中的禽流感病毒 的方法。此检测方法使用上述抗体，因此比起迄今不能区分是来源于人类的流 感病毒还是来源于禽类的流感病毒、只能作为A型流感病毒检测的方法，能 够区分人流感病毒和禽流感病毒，检测出数种亚型禽流感病毒。用于禽流感病毒检测方法的抗体是一种不对人流感A型病毒H1亚型、 H2亚型和H3亚型以及人流感B型病毒显示反应性、而对禽流感病毒的多种 亚型显示反应性的抗流感病毒抗体。此抗流感病毒抗体和人流感病毒(A型 (H1 H3亚型)和B型)不反应，对禽流感病毒的多种亚型起反应，因此， 能够一反过去不区分来源于人类还是禽类地检测流感A型病毒的状况，先区 分来源于人类还是禽类，然后检测出来源于禽类的流感A型病毒。抗流感病毒抗体显示反应性的禽流感病毒亚型中，最好至少有一种是 选自由禽流感病毒H5亚型、H7亚型和H9亚型构成的病毒群。因为禽流感 病毒H5亚型、H7亚型或H9亚型是已确认能感染人类的禽流感病毒，有可 能在人类中引起大面积感染。抗流感病毒抗体也可以是至少对H3 15亚型禽流感病毒显示反应性的 抗体。此时，禽流感病毒只要属H3 15亚型就能检测出来。抗流感病毒抗体最好是针对流感A型病毒核蛋白质的抗体。作为抗流感 病毒抗体也可以使用识别禽流感本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种禽流感病毒检测方法，其特征在于：用一种对禽流感病毒的多种亚型显示反性应而不对人流感Ａ型病毒Ｈ１亚型、Ｈ２亚型和Ｈ３亚型以及人流感Ｂ型病毒显示反应性的抗流感病毒抗体，通过免疫学测定方法检测试样中的禽流感病毒。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】JP 2006-8-31 235356/2006;JP 2007-1-29 018400/20071.一种禽流感病毒检测方法，其特征在于用一种对禽流感病毒的多种亚型显示反性应而不对人流感A型病毒H1亚型、H2亚型和H3亚型以及人流感B型病毒显示反应性的抗流感病毒抗体，通过免疫学测定方法检测试样中的禽流感病毒。2. 权利要求l所述方法，其特征在于所述抗流感病毒抗体显示反应 性的禽流感病毒亚型中至少有一种是选自由禽流感病毒H5亚型、H7亚型和 H9亚型构成的群体。3. 权利要求l所述方法，其特征在于所述抗流感病毒抗体至少对 H3 15亚型禽流感病毒显示反应性。4. 权利要求l所述方法，其特征在于所述抗流感病毒抗体是抗流感 A型病毒的核蛋白质的抗体。5. 权利要求l所述方法，其特征在于所述抗流感病毒抗体是识别禽流感病毒的核蛋白质的氨基酸序列N端起第46位~第159位区域内的表位 的抗体。6. 权利要求l所述方法，其特征在于所述抗流感病毒抗体是由国际 寄存受理号FERMABP—10904 (国内寄存受理号FERMP—20822)杂交瘤产生的单克隆抗体。7. 权利要求l所述方法，其特征在于所述免疫学测定法包括这一步 骤用抗流感病毒的第一和第二抗体形成含有被标记的所述第一抗体、固定 在固相上的所述第二抗体及流感病毒的复合物，且至少所述第二抗体是对人流感A型病毒H...

【专利技术属性】
技术研发人员：高桥和郎，奥野良信，西村公志，一口毅，齐藤纪幸，谷口友邦，
申请(专利权)人：大阪府，希森美康株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]