使用结合ＥｐｈＢ４的人源化抗体的癌症治疗制造技术

在某些实施方案中，本申请提供了结合ＥｐｈＢ４蛋白的人源化抗体以及所述抗体用于治疗目的的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】使用结合EphB4的人源化抗体的癌症治疗相关申请本申请要求2007年8月13日提交的美国临时申请号60/964，496的优先权的权 益，其全部教导以其全文引用合并入本文。
技术介绍
血管生成，新血管从预先存在的脉管系统的上皮发展，是宿主内实体瘤的生长、进 展和转移中至关重要的过程。在生理学上正常的血管生成期间，血管内皮与其周围间质组 分的自分泌、旁分泌和双重分泌(amphicrine)相互作用在空间和时间上受到紧密调节。此 外，促血管生成(proangiogenic)和抑制血管生成(angiostatic)细胞因子和生长因子的 水平和活性保持平衡。相反地，活跃的肿瘤生长所必需的病理性血管生成是持续和持久的， 代表了正常血管生成系统的失调。实体瘤和造血组织肿瘤类型特别地与高水平的异常血管 生成相关。通常认为，肿瘤的发展由连续并且相关的步骤组成，所述步骤导致具有攻击性生 长潜能的自主克隆(autonomous clone)的产生。这些步骤包括持续生长和无限的自我更 新。肿瘤中的细胞群体的特征通常在于生长信号的自足(self-sufficiency)、降低的对生 长抑制信号的敏感性以及对细胞凋亡的抗性。起始异常生长的遗传或细胞遗传事件通过阻 止细胞凋亡来支持细胞维持在延长的“稳定”状态。专利技术概述本申请除其他以外提供了结合EphB4的细胞外结构域的抗体，例如其修饰抗体或 抗原结合片段。修饰抗EphB4抗体或其抗原结合片段与它们的未修饰的亲本抗体相比较在 给定的物种例如人中免疫原性更低。抗体和抗原结合片段用于治疗性治疗以影响EphB4功 能，从而抑制血管生成和肿瘤生长。在一个实施方案中，本申请提供了结合EphB4的细胞外结构域的解除免疫的 (deimmunized)抗体或其抗原结合片段，其包括重链可变区和轻链可变区，其中各可变区与 结合EphB4的细胞外结构域的非人或亲本抗体相比较，在构架区中具有2至20个氨基酸置换。在一个实施方案中，解除免疫的抗体或其抗原结合片段具有一个或更多个来自结 合EphB4的细胞外结构域的非人或亲本抗体的互补决定区(CDR)。在一个实施方案中，互补 决定区(⑶R)中存在1至5个置换。在一个实施方案中，一个或更多个置换，与非人或亲本抗体相比较，减少了解除免 疫的抗体或其抗原结合片段中的T细胞表位的数目。在一个实施方案中，一个或更多个置 换，与非人或亲本抗体相比较，减少了解除免疫的抗体或其抗原结合片段中的B细胞表位 的数目。在一个实施方案中，一个或更多个置换，与非人或亲本抗体相比较，在解除免疫的 抗体或其抗原结合片段中导入了一个或更多个调节T细胞表位。在一个实施方案中，解除免疫的抗体或其抗原结合片段的重链可变区，与结合 EphB4的细胞外结构域的非人或亲本抗体相比较，具有20个或更少的氨基酸置换。在另一 个实施方案中，解除免疫的抗体或其抗原结合片段的重链可变区，与结合EphB4的细胞外结构域的非人或亲本抗体相比较，具有19个或更少，18个或更少，17个或更少，16个或更 少，15个或更少，14个或更少，13个或更少，12个或更少，11个或更少，10个或更少，9个或 更少，8个或更少，7个或更少的氨基酸置换。在一个实施方案中，重链可变区，与非人或亲 本抗体相比较，具有至少2个，至少3个，至少4个，至少5个，至少6个，至少7个，至少8 个，至少9个，至少10个，至少11个，至少12个，至少13个氨基酸置换。在一个实施方案中，与结合EphB4的细胞外结构域的非人或亲本抗体相比较，解 除免疫的抗体或其抗原结合片段的轻链可变区具有20个或更少的氨基酸置换。在另一个 实施方案中，与结合EphB4的细胞外结构的非人或亲本抗体相比较，解除免疫的抗体或其 抗原结合片段的重链可变区具19个或更少、18个或更少、17个或更少、16个或更少、15个 或更少、14个或更少、13个或更少、12个或更少、11个或更少、10个或更少、9个或更少、8个 或更少、7个或更少的氨基酸置换。在一个实施方案中、与非人或亲本抗体相比较，轻链可变 区具有至少2个、至少3个、至少4个、至少5个、至少6个、至少7个、至少8个、至少9个、 至少10个、至少11个、至少12个、至少13个氨基酸置换。在一个实施方案中，解除免疫的抗体或其抗原结合片段以与小鼠单克隆抗体 #131 (ATCC保藏号PTA-6214)相似或更大的结合亲和力结合EphB4的细胞外结构域。在一个实施方案中，解除免疫的抗体或其抗原结合片段中的置换导致抗体或抗原 结合片段的构架区和与所述构架区同源的人种系基因序列之间的序列同一性的增加。在一个实施方案中，解除免疫的抗体或其抗原结合片段抑制培养的内皮细胞形成 管。在另一个实施方案中，解除免疫的抗体或其抗原结合片段在体内抑制组织的血管化 作用(vascularization)。在另一个实施方案中，解除免疫的抗体或其抗原结合片段减少 小鼠中人肿瘤异种移植物(xenograft)的生长。在另外的实施方案中，解除免疫的抗体 或其抗原结合片段抑制植入动物的角膜中的组织的血管化作用或植入动物的基质组织栓 (Matrigel tissue plug)的血管化作用。在一个实施方案中，解除免疫的抗体或其抗原结 合片段促进细胞凋亡。在一些实施方案中，解除免疫的抗体或其抗原结合片段的效应子功能被改变。在 另一个实施方案中，解除免疫的抗体或其抗原结合片段的效应子功能得到增强。在另一个 实施方案中，解除免疫的抗体或其抗原结合片段的效应子功能被减弱。在一些实施方案中， 解除免疫的抗体或抗原结合片段包含重链恒定区。在一些实施方案中，除去Fc区域中的 N-糖基化。在一些实施方案中，Fc区域在N-糖基化识别序列中包含突变，从而抗体或多肽 的Fc区域未被N-糖基化。在一些实施方案中，将Fc区域PEG化。在一些实施方案中，重 链恒定区是包含下列残基的人重链IgGh恒定区位点330和331上的丝氨酸。在一些实 施方案中，重链恒定区是包含下列突变的人重链IgG4 位点233上的脯氨酸、位点234上的 缬氨酸和位点235上的丙氨酸。这些氨基酸位点基于Kabat编号。在一个实施方案中，解除免疫的抗体或其抗原结合片段抑制EphB4的二聚化或 多聚化。在一个实施方案中，解除免疫的抗体或其抗原结合片段抑制肝配蛋白B2刺激的 EphB4的自磷酸化作用。在一个实施方案中，解除免疫的抗体或其抗原结合片段刺激EphB4 激酶的活性。在一个实施方案中，解除免疫的抗体或其抗原结合片段结合EphB4的第一纤连蛋 白样结构域。在一个实施方案中，解除免疫的抗体或其抗原结合片段结合EphB4的第二纤连蛋白样结构域。在一个实施方案中，将解除免疫的抗体或其抗原结合片段缀合至细胞毒性剂。在 一个实施方案中，细胞毒性剂选自放射性试剂、植物、真菌或细菌来源的分子例如皂草素、 生物蛋白质、长春碱、4-去乙酰长春花碱、长春新碱、异长春碱和长春地辛(vindesine)。在 某些实施方案中，将抗体或其抗原结合片段通过稳定的连接体缀合至细胞毒性剂，其在癌 细胞内释放细胞毒素剂。在一个实施方案中，与结合细胞外结构域的非人或亲本抗体相比较，抗体或抗原 结合片段的可变区具有2至20个氨基酸置换，其中所述非人或本文档来自技高网...

【技术保护点】
结合ＥｐｈＢ４的细胞外结构域的解除免疫的抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区和轻链可变区，其中各可变区在构架区中具有２至２０个氨基酸置换。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：FJ卡尔，P吉尔，TD琼斯，SW基恩，V克拉斯诺佩罗夫，
申请(专利权)人：瓦斯基因治疗公司，
类型：发明
国别省市：US[]