来源于抗－ＶＰ６骆驼科动物抗体的单体ＶＨＨ结构域、二聚体结构域、免疫方法、轮状病毒检测方法、疫苗组合物、用于轮状病毒感染的预防和治疗方法，其中所述结构域可以是ＳＥＱ?ＩＤ?Ｎｏ．１，ＳＥＱ?ＩＤ?Ｎｏ．２，ＳＥＱ?ＩＤ?Ｎｏ．３或ＳＥＱ?ＩＤ?Ｎｏ．４中所示的任一种氨基酸序列，且其中所述结构域结合Ａ组轮状病毒的蛋白ＶＰ６。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】来源于抗-VP6骆驼科动物抗体的单体VHH结构域、二聚体 结构域、免疫方法、轮状病毒检测方法、组合物、用于轮状病 毒感染的预防和治疗方法本专利技术涉及来源于抗-VP6骆驼科动物抗体的单体VHH结构域、二聚体结构域、免 疫方法、轮状病毒检测方法、组合物、用于轮状病毒感染的预防和治疗方法。更具体地，本发 明涉及来源于骆驼科动物抗体的单体结构域(VHH)，其中所述结构域可以是SEQ ID No. 1, SEQ ID No. 2，SEQ IDNo. 3或SEQ ID No. 4中所示的任一种氨基酸序列，且其中所述结构域 结合A组轮状病毒的蛋白VP6。
技术介绍
A组轮状病毒(RV)是在儿童和许多有经济学利益的动物物种(牛、猪马、南美洲骆 驼等等)的幼崽中严重腹泻的主要原因。作为公共健康问题，在发展中国家中，RV是第三 大最常见的与严重腹泻有关的死亡的原因(每年200万例死亡)。在另一个方面，在意欲用 于消费的动物如小牛中的RV-引起的腹泻导致与预防或治疗相关的高成本。A组RV是由三联蛋白衣壳组成的颗粒。外衣壳表面由蛋白VP4和VP7组成，该 两种蛋白是高度可变的抗原；迄今为止，至少已经记述了 27种VP4(P-型)变体和16种 VP7(G-型)变体。每种G-P型组合诱导与其他G-P型具有低交叉反应性的中和抗体；因为 该原因，在疫苗中需要包括在目标物种中循环的不同毒株。中间衣壳由三聚体蛋白VP6组成，其代表51%的病毒体质量。取决于在蛋白VP6 中存在或不存在两种不同的表位(由单克隆抗体mAb255/60和631/9识别)，A组RV毒株 另外分类为I，II，I+II和非I非II亚组(Sb)。人RV通常为Sb II，而动物RV主要为Sb I。蛋白VP6是高度免疫原性的；天然感染的人和动物发展针对VP6表位的强体液应答。不 论上述亚组，VP6是所有A组RV中高度保守的蛋白(> 90%的氨基酸同一性)，并且共享 的共有抗原可以通过广泛反应性多克隆抗血清或单克隆抗体检测。因此，VP6是大部分设 计用来检测A组RV的免疫诊断测试中的靶抗原。针对该蛋白的抗体在体外不具有中和活 性。然而，在小鼠中，IgA单克隆抗体设法阻断病毒在细胞内复制。目前，预防动物中RV-引起的腹泻基于被动免疫，而在人类中使用主动免疫。在 动物中，将在肠胃外灭活的病毒疫苗应用于妊娠的雌兽，以通过由初乳和乳汁传递母体抗 体而保护新生动物。该策略在防止严重腹泻症状和减少感染的家畜的发病率(morbility) 和死亡率方面是高度有效的，但是这不能预防RV传染，因为这不显著减少由感染的动物分 泌的病毒数量(Parreno，V. C.等，Vet Immunol Immunopathol (兽医免疫学和免疫病理 学)100:7-24，2004)。只有在肠腔内持续存在高滴度的被动抗-RV抗体(天然产生的或人 工添加到乳汁中的)完全防止腹泻，且显著减少病毒分泌(Fernandez，F.M.等，Vaccine (疫 苗)16 507-16,1998 ； Saif, L.J.等，Infectlmmun (传染免疫学)41 :1118_31，1983，和 Saif, L. J.等，Adv Exp Med Biol (实验医学和生物学进展)216B 1815-23，987)。在儿童中，已经批准了两种通过遗传复性(reassociation)减毒的活病毒疫苗。 已经证明两种产品针对严重RV-引起的腹泻的良好功效。然而，鉴于与先前人类中所用的 疫苗相关的内填历史(Murphy, T. V.等，J InfectDis (传染病杂志)187 1309-13，2003)和最近在天然感染的儿童中发现RV病毒血症(Ray，P.等，J Infect Dis (传染病杂志)194 588-93，2006，和 Blutt, S. E.等，Lancet362 1445-9，2003)，所述疫苗的无害性已经引起怀 疑，特别是在早熟的(premature)、免疫抑制的和营养不良的儿童中。因此，对于RV-引起的 腹泻的预防和治疗需要备选的补充策略。被动免疫策略，如哺乳，施用由牛初乳或蛋类纯化的抗-RV抗体(人和牛抗-RV IgG和鸡蛋蛋黄IgY)显示出减少人和动物中的腹泻疾病。但是以低成本方式且具有可重现 的特性生产大量抗体的可能性很低。因此，需要生产设计用于动物和人类中的被动抗-RV 免疫的抗体，特别是可以以工业规模生产的抗体，所述抗体不引起免疫学反应，所述抗体充 分小足以有效到达保守的内在蛋白的表位，且所述抗体能够识别和抑制来自不同基因型的 毒株的复制(多反应性的)。骆驼科动物抗体重链的VHH结构域，具有15kDa的重量，是具有完全的抗原-结合 能力的最小的已知天然结构域，其对于产生关于具有天然抗原识别能力的单链片段的编码 DNA文库是理想的。此外，免疫美洲驼(llamas)的策略可以用来使VHH文库富含针对目的 抗原的那些。由于其特别的特性，来源于美洲驼抗体重链的VHH结构域是用于开发诊断试 剂和设计用于预防或治疗RV-引起的腹泻的产品的非常通用的工具。例如，在酵母中产生 的针对G3G-型RV毒株的VHH，最近已经报道在体外表现出中和活性，且纯化的VHH能够减 少泌乳小鼠中的RV-引起的腹泻的发生和持续时间(Pant，N.等，J Infect Dis(传染病 杂志)194 1580-8，2006，和 van der Vaart J. M.等，Vaccine (疫苗)，5 月 8 日，24 (19) 4130-7,2006)。然而，这些作者尚不能鉴定获得的VHH针对何种病毒蛋白，且他们假定它们 可能针对外在蛋白的构象表位。专利文献W0 2006/056306公开了 VHH结构域或其片段的生产和作为关于由致肠 病微生物如RV产生的传染病的治疗的应用。其表明了所述VHH的生产或其在特定位点释放 系统中的应用。例如，其公开了特定的VHH在胃肠系统中通过包封在藻酸盐中的释放。此 外，作为一种释放方法，其提议使用转基因益生菌(probiotic)微生物，其释放特定的VHH 抗体且其中所述微生物可以在人肠道中集群。其提议使用由益生菌微生物包封或表达的 VHH抗体制备药物或食品的不同方法。所生产的VHH不与VP6结合，应该不是中和性的，且 还不被自身利用，但是在受控释放系统内。Muyldermans Serge的专利文献US 20050054001，公开重链抗体，重链抗体的功能 结构域，功能VH结构域或其片段，其包括特定修饰的或突变的氨基酸序列的。其没有公开 与结合RV VP6的VHH结构域相对应的序列。专利文献W0 00/65057公开了包括单可变结构域的单价蛋白，其结合病毒抗原， 特别是乳球菌属(Lactococcus)的噬菌体P2。其仅公开了抑制所述噬菌体的VHH序列。Hamers等的专利文献US 2007/0009512,以及相同专利技术人的早先的文献公开了免 疫球蛋白的重链片段及其用于兽医用治疗如被动免疫治疗或血清治疗的应用。所述的VHH 仅是被破伤风毒素。用来获得所述VHH的方法来自免疫的骆驼科动物的mRNA。专利技术简述本专利技术的一个目的是提供来源于骆驼科动物抗体的单体结构域(VHH本文档来自技高网...
【技术保护点】
来源于骆驼科动物抗体的单体ＶＨＨ结构域，其特征在于，其包括选自由ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１，ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２，ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３和ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．４形成的组的序列，其中所述结构域结合Ａ组轮状病毒（ＲＶ）的蛋白ＶＰ６。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：托马斯萨里，奥雷利安奥利西翁，洛雷纳劳里亚加赖科亚查，吉塞拉阿里亚娜马尔科皮多，格拉迪丝比维安娜帕雷尼奥，西尔维亚戈麦斯塞巴斯蒂安，何塞安赫尔马丁内斯埃斯克里瓦诺，安德烈斯威格多罗维兹，
申请(专利权)人：交替基因表达有限公司艾尔基尼克斯，国家农业技术研究院INTA，
类型：发明
国别省市：ES[西班牙]
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