含有肺炎链球菌荚膜多糖缀合物的疫苗制造技术

本发明专利技术属于肺炎链球菌荚膜糖缀合疫苗领域。具体地说，本发明专利技术提供的多价肺炎链球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ?ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）免疫原性组合物含有与２种或２种以上的不同载体蛋白缀合的、来自不同肺炎链球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型的多种缀合型荚膜糖，其中所述组合物包含缀合白喉类毒素（ＤＴ）或ＣＲＭ１９７的血清型１９Ｆ荚膜糖，任选１９Ｆ是组合物中唯一缀合白喉类毒素（ＤＴ）或ＣＲＭ１９７的糖。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】含有肺炎链球菌荚膜多糖缀合物的疫苗专利
本专利技术涉及改进的肺炎链球菌(Streptococcuspneumonia)疫苗。专利技术背景不到2岁的儿童对大多数多糖疫苗不产生免疫应答，所以一直以来必须通过与蛋白载体进行化学缀合使多糖具有免疫原性。将作为非T细胞依赖性抗原的多糖与作为T细胞依赖性抗原的蛋白偶联赋予多糖T细胞依赖性特性，包括同种型转换、亲和力成熟和记忆诱导。然而，重复给予多糖-蛋白缀合物或将多糖-蛋白缀合物联合成多价疫苗存在某些问题.例如，已有报道指出，在一定剂量范围内测试了使用破伤风类毒素(TT)作为蛋白载体的乙型流感嗜血杆菌(Haemophilusinfluenzae)多糖(PRP)疫苗，该疫苗与(游离的)TT和肺炎链球菌多糖-TT缀合疫苗按照标准婴儿(infant)免疫程序同时免疫。当肺炎链球菌疫苗的剂量增加时，对Hib缀合疫苗的PRP多糖部分的免疫应答降低，这表明很可能是通过使用相同载体蛋白引起的多糖免疫干扰(Dagan等，InfectImmun.(1998)；66：2093-2098)。还已证实载体-蛋白剂量对蛋白本身的体液免疫应答的影响是多方面的。据报道，在人类婴儿中增加四价破伤风类毒素缀合物的剂量会导致对破伤风载体的应答下降(Dagan等，出处同上)。对于联合疫苗的这些效应，传统分析一直认为是载体诱导的表位抑制，这一点还没有完全弄清楚，但一般认为是由过量的载体蛋白引起的(Fattom，vaccine17：126(1999))。这似乎导致针对载体蛋白的B细胞和针对多糖的B细胞竞争Th细胞。如果针对载体蛋白的B细胞占优势，则没有足够的Th细胞可用于为多糖特异性B细胞提供必需的辅助。然而，观察到的免疫效果一直不一致，载体蛋白的总量在某些情况下增加免疫应答，而在另一些情况下却降低免疫应答。因此，将多种多糖缀合物组合成单一有效的疫苗制剂仍有技术难度。肺炎链球菌为革兰氏阳性细菌，可导致相当高的发病率和死亡率(尤其是对年纪小的人和上年纪的人)，引起诸如肺炎、菌血症和脑膜炎等侵袭性疾病以及与定居相关的疾病，如急性中耳炎。在美国，60岁以上的人患肺炎链球菌性肺炎的比例估计为十万分之三至十万分之八。其中的20％病例会引发菌血症，其它则表现为例如脑膜炎，即便采用抗生素治疗死亡率也接近30％。肺炎链球菌被赋予血清型特异性的化学连接的多糖包裹。已知有90种肺炎链球菌血清型，荚膜是肺炎链球菌毒力的主要决定因素，因为荚膜不但保护细菌内表面不受补体影响，而且其本身是弱免疫原性的。多糖是非T细胞依赖性抗原，不能被加工或呈递到MHC分子上，从而不能与T细胞相互作用。但它们能通过一种涉及B细胞表面受体交联的替代机制来刺激免疫系统。一些实验表明，对侵袭性肺炎链球菌疾病的防护作用与荚膜特异性抗体最为相关，且该防护作用具有血清型特异性。肺炎链球菌是婴儿和儿童侵袭性细菌疾病以及中耳炎最常见的致病因素。同样，老年人对肺炎链球菌疫苗的应答较弱[Roghmann等，(1987)，J.Gerontol.42：265-270]，因此，在该人群中细菌性肺炎的发病率升高[Verghese和Berk，(1983)Medicine(Baltimore)62：271-285]。肺炎链球菌引起的主要临床症状是公知的，并在所有的标准医学教科书中有论述(FedsonDS，MuscherDM.载于：PlotkinSA，OrensteinWA编辑，Vaccines.第4版.PhiladelphiaWBSaundersCo，2004a：529-588)。例如，侵入性肺炎链球菌疾病(IPD)的定义是：可由血液或其它通常无菌的部位分离出肺炎链球菌的任何感染(MusherDM.Streptococcuspneumoniae.InMandellGL，BennettJE，DoNnR(编辑).PrinciplesandPracticeofInfectiousdiseases(第5版).NewYork，ChurchillLivingstone，2001，2128-2147页)。慢性阻塞性肺病(COPD)被认为包括几种常常同时存在的病症(气管阻塞、慢性支气管炎、细支气管炎或小气道病变和肺气肿)。COPD恶化或加重时，患者常常出现呼吸困难加重，咳嗽增多现象并伴有粘液痰或脓痰(Wilson，EurRespirJ200117：995-1007)。COPD在生理学上被定义为在患有慢性支气管炎和/或肺气肿的患者中存在不可逆的或部分可逆的气道阻塞(Standardsforthediagnosisandcareofpatientswithchronicobstructivepulmonarydiseases.AmericanThoracicSociety.AmJRespirCritCareMed.1995年11月；152(5Pt2)：S77-121)。COPD的恶化经常由细菌(例如肺炎链球菌)感染引起(SethiS，MurphyTF.Bacterialinfectioninchronicobstructivepulmonarydiseasesin2000：astate-of-the-artreview.ClinMicrobiolRev.2001年4月；14(2)：336-63)。因此，本专利技术的目的是开发一种多血清型肺炎链球菌多糖缀合疫苗的改良制剂。附图简述图1在老年猕猴(Rhesusmonkeys)中的缀合物免疫原性(post-II抗PSIgG水平)。显示老年猕猴(Rhesusmonkeys)中的11价缀合物免疫原性的条形图。浅色条代表用在磷酸铝佐剂中的11价缀合物2次接种后的GMC。深色条代表用在佐剂C中的11价缀合物2次接种后的GMC。图2缀合物在老年猕猴中的免疫原性(post-II抗PS3记忆B细胞频率)。显示用在佐剂C或磷酸铝佐剂中的11价缀合物接种后针对PS3的记忆B细胞的条形图。图3在Balb/c小鼠中的PS19F免疫原性(post-IIIIgG水平)。显示Balb/C小鼠中4价非缀合型多糖和4价dPly缀合物的抗多糖19F免疫原性的条形图。图4在Balb/c小鼠中的PS22F免疫原性(post-IIIIgG水平)。显示Balb/C小鼠中4价非缀合型多糖和4价PhtD缀合物的抗多糖22F免疫原性的条形图。图5血清抗-PSIgG水平。显示Balb/C小鼠中的抗22FIgG应答的条形图。图6在Balb/c小鼠中的抗-22F调理吞噬效价。显示Balb/C小鼠中的抗22F调理吞噬效价的条形图。图7在幼龄C57B1小鼠中用新佐剂或AlPD4免疫3次后诱导的IgG应答的比较。比较在C57B1幼龄小鼠中用以不同佐剂配制的13价缀合疫苗免疫后诱导的IgG应答的条形图。条棒与右栏中所示的顺序相同。图8在猕猴中PhtD和dPly蛋白组合对19F型肺定居的保护效力。显示不同疫苗组合在猴肺炎模型中的保护效力的条形图。归类为“死亡”的猴子包括若不给予抗生素治疗会死亡的猴子。图9血清抗-PhtDIgG应答。显示Balb/c小鼠中用22F-PhtD或22F-AH-PhtD缀合物免疫后的抗PhtDIgG应答的条形图。图10在小鼠中抗4型肺炎链球菌挑战的保护作用。在小鼠中用22F-PhtD或22本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种含有来自不同肺炎链球菌血清型的９种或９种以上、１０种或１０种以上、１１种或１１种以上、１３种或１３种以上或者１４种或１４种以上荚膜糖的肺炎链球菌免疫原性组合物，所述荚膜糖缀合２种或２种以上的不同载体蛋白，其中所述组合物包含缀合白喉类毒素（ＤＴ）或ＣＲＭ１９７的血清型１９Ｆ荚膜糖和２－９种选自不同血清型的缀合Ｄ蛋白的荚膜糖。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】GB 2007-6-26 0712420.9;GB 2007-6-26 0712435.7;GB 21.一种含有来自不同肺炎链球菌血清型的13种以上荚膜糖的肺炎链球菌免疫原性组合物，所述荚膜糖缀合到4种不同的载体蛋白，其中所述载体蛋白是流感嗜血杆菌D蛋白、TT、白喉类毒素(DT)和CRM197，其中所述组合物包含缀合到白喉类毒素(DT)的血清型19F荚膜糖并且19F是所述组合物中唯一缀合到DT的糖，其中来自血清型1、4、5、6B、7F、9V、14和23F的8种荚膜糖缀合到...

【专利技术属性】
技术研发人员：RL比曼斯，PV赫尔曼，J普尔曼，
申请(专利权)人：葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司，
类型：发明
国别省市：BE[比利时]