在此我们将ＭＭＧ及其α－和酮分枝菌酸衍生物鉴定为衍生自牛分枝杆菌ＢＣＧ（哥本哈根），能以极低剂量刺激和活化人类ＤＣ的高生物活性的脂质。除了其作为人类ＤＣ的免疫刺激剂的直接作用之外，我们证明了其在开发适合于人类施用的新一代佐剂中的应用。此外，我们鉴定了在癌症治疗中具有巨大潜力并用于针对传染性疾病和比如阿尔茨海默病的病症的疫苗佐剂的许多高度活性的合成的ＭＭＧ类似物。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术公开了单分枝酰基甘油(monomycolyl glycerol,匪G)、其合成同系物、类似物或修饰形式用于制备免疫调谐剂、佐剂、该佐剂和包含该佐剂的疫苗或递送系统的应用。 —般背景 第一疫苗由活体、减毒的病原体组成。该减毒形式是自然存在的密切相关的有机体或通过培养物中的连续传代而获得。例如，许多年来一直在用牛分枝杆菌(Mycobacterium bovis)的减毒株接种疫苗(80多年前开发的牛分枝杆菌BCG疫苗)与人类的结核病(TB)斗争。然而，尽管已施用了超过30亿剂量的BCG(超过任何其他疫苗)，其不总是在每个群体中提供令人满意的对人类TB的抗性。 现在，更新的方法是使用高度纯化的物质，例如纯化的重组蛋白或肽。这些疫苗是定义明确的，并且副反应被最小化。遗憾地，许多高度纯化的物质不是非常免疫原性的，并且不诱导足以赋予保护的免疫应答。为了达到这一目的，该抗原需要来自称为佐剂的免疫应答增强剂的一些帮助。取决于病原体，保护可能需要体液或细胞介导的应答占优势。可由免疫血清转移的免疫反应称为体液免疫，并且指的是由结合与传染剂相关的抗原物质并且因此触发针对它的免疫应答的抗体介导的抗性。细胞介导的免疫(CMI)依赖于装载免疫应答的免疫系统的细胞。CMI或T辅助细胞(Th) 1免疫应答一般与胞内病原体(包括利什曼原虫和结核菌)的斗争相关，但还在与其他类型的感染(例如酵母感染念珠菌)的斗争中发挥作用。针对胞外病原体(例如蠕虫感染)的防御需要体液或Th2免疫应答。 在取决于感染阶段的许多病例中，例如流感病毒、丙型肝炎病毒(HCV)、人类免疫缺陷病毒(HIV)、衣原体和疟疾，可能需要混合的Thl/Th2应答(Mosmann和Sad 1996)。这些需要Thl和Th2 二者，因为其生命周期的一部分在胞内，但是它们也经过胞外时期，例如细胞间的传输。 特定种类免疫应答(体液或细胞介导的)的发展可通过佐剂的选择来确定。例如，针对比如结核分枝杆菌(M. tuberculosis)的胞内病原体的保护性免疫需要细胞介导的免疫应答，并且针对TB的亚基疫苗的适合的佐剂应增强Thl应答(Lindblad等1997)。 存在许多佐剂，但这些的大多数经受阻止其在人类中使用的多种问题。只有少数佐剂被接受用于人类使用，例如基于铝的佐剂(A10H-盐)和MF-59，但是它们二者都诱导偏向Th2的应答，这使其不适合用于TB疫苗和需要Thl应答的其他疫苗(Lindblad等1997)。 在过去20-30年间，鉴定了许多新的佐剂系统，并且其中一些目前处于开发阶段。尽管如此，仍旧公认对新的佐剂系统的需要(Moingeon等2001)，并且在可用于临床应用的少数选择中该需要是明显的。 佐剂(来自拉丁文adjuvare，意为帮助)可定义为当在疫苗中施用时用来指引、加速、延长和/或增强特定免疫应答的任何物质。佐剂被分为两个主要的类别即递送系统或免疫调谐剂/免疫剌激剂。递送系统可以是例如乳剂、聚苯乙烯颗粒、囊泡(niosome)、ISC0MS、病毒体、微球体或为由脂双层组成的小泡的表面活性剂样脂质体。脂质体作为抗原3的载体(在小泡内或附着到表面上)起作用，并可在接种位点形成贮库，以允许抗原缓慢、连续的释放。注射和吞噬后一段时间，脂质体呈递确保特定量的抗原可用于单个抗原呈递细胞(Gluck 1995)。免疫调谐剂靶向特定的细胞或受体，例如APC表面上的toll样受体。递送系统和免疫调谐剂可一起使用，例如在Glaxo系列佐剂中。因此，除了递送疫苗外，抗原递送系统还可用于递送免疫调谐剂。 除了是疫苗中的组分外，免疫调谐剂可不与抗原一起施用。通过这种方法，可能局部激活免疫系统，例如可见于抗原呈递细胞的成熟、对抗肿瘤和抗病毒活性重要的细胞因子的产生。因此，免疫调谐剂的施用可支持例如癌症和皮肤疾病的根除。可局部施用的免疫调谐剂的实例为紫杉烷(例如紫杉醇)、toll样受体7/8配体雷西莫特、咪喹莫特、Gardiquimod。 二甲基双十八烷基铵-溴化物、-氯化物、-磷酸盐、_乙酸盐或其他有机或无机盐(DDA)是亲脂的季铵化合物，在高于4(TC的温度下其在水溶液中形成阳离子脂质体。DDA是增强APC对疫苗抗原吸收的非常有效的递送系统。已描述了 DDA和免疫调谐剂的组合。在人类中施用包含DDA的Arquad 2HT是有希望的，并且不诱导明显的副作用(Stanfield，1973) 。 DDA和TDB或DDA和MPL的组合显示递送介质(DDA)和免疫调谐剂(TDB或MPL)之间非常明显的协同，与任一单独组分获得的应答相比具有高度升高水平的CMI应答。因此DDA是有希望的疫苗抗原和免疫调谐剂的递送介质，例如在用于针对TB和其他胞内病原体的疫苗的佐剂系统的开发中。 已经报道，来自分枝杆菌的各种化合物是免疫调谐的。当使用从牛分枝杆菌BCG提取的脂质作为佐剂时，在豚鼠中获得对卵清蛋白的皮肤测试应答(Hiu 1975)。在升高温度下从牛分枝杆菌BCG的总极性脂质形成的脂质体能够产生对卵清蛋白的体液应答，并且从这些极性脂质制备的疫苗在用肿瘤细胞攻击的小鼠中产生保护(WO 03/011336)。(Dascher等2003)研究了在豚鼠的实验TB疫苗中来自结核分枝杆菌H37Rv的总脂质作为抗原的影响。此研究中，基于胆固醇和1，2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DSPC)的脂质体与结核分枝杆菌H37Rv总脂质提取物混合。去除溶剂之后，用二甲基双十八烷基铵(DDA)作为于PBS缓冲液中的佐剂重构脂质。用该疫苗免疫接种的豚鼠未显示细菌的明显减少，表明与DDA混合的脂质体的该制剂缺少强抗原，或者分枝杆菌脂质与胆固醇DSPC的制剂阻止了 DDA的佐剂效应。可选地，当施用各种脂质的混合物时，有效的脂质可构成总脂质中非常有限的比例。 还研究了从分枝杆菌纯化的各种组分的佐剂活性。纯化的蛋白衍生物(PPD)本身不诱导延迟类型的超敏反应，但是当加入Wax D (分枝杆菌细胞壁肽聚糖片段_阿拉伯半乳聚糖-分枝菌酸复合体)作为佐剂时，观察到强反应(Yamazaki S 1969)。免疫调谐剂SSM或Z-100，即一种从结核分枝杆菌提取的脂质阿拉伯甘露聚糖，具有抗肿瘤活性(Suzuki F1986)。另一种分枝杆菌细胞衍生的化合物是海藻糖6， 6' - 二分枝菌酸酯(TDM)(索状因子；含有分枝菌酸的糖脂)(Saito等，1976) 。 TDM(或合成类似物)还具有免疫剌激效应，并且已被包括于各种佐剂制剂中(McBride等1998) (Koike等1998)。 在Silva等(1985)的论文中，从牛分枝杆菌BCG纯化的5个组分作为脂质包被的炭颗粒被静脉内注射，并在小鼠的肺中产生炎性反应。这5个组分包括TDM、海藻糖单分枝菌酸酯(匪T)、葡萄糖单分枝菌酸酯(匪Glc)、阿拉伯糖单分枝菌酸酯(MMAr)和甘油单分枝菌酸酯(匪Glyc)。文章描述了单分枝酰基甘油头基，而分枝菌酸组合物定义不明确，并且没有提供结构数据。另外，仅将施用脂质之后的反应描述为肺中的炎性活性，而没有描述增强已知作为佐剂效应的特定免疫应答的能力。 尽管通过几十年来不断扩展的有关能剌激动物(鼠)模型中的免疫应答的脂质的文献已本文档来自技高网...
【技术保护点】
单分枝酰基甘油（ＭＭＧ）或其合成的同系物、类似物和修饰形式用于制备佐剂或免疫调谐剂的应用。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】DK 2007-6-29 PA200700965单分枝酰基甘油(MMG)或其合成的同系物、类似物和修饰形式用于制备佐剂或免疫调谐剂的应用。2. 如权利要求1所述的合成的匪G同系物、类似物或修饰形式的应用，所述合成的MMG同系物、类似物或修饰形式基于具有8-36个碳的烃基链，最优选地具有8-16个碳的烃基链，该烃基链任选地具有脂质尾，每个脂质尾上含0-3个双键。3. 如权利要求2所述的合成的MMG同系物、类似物或修饰形式的应用，所述合成的MMG同系物、类似物或修饰形式基于如图9所示的具有8至36个碳的烃基链。4. 一种佐剂或免疫调谐剂，其根据权利要求1-3制备。5. 如权利要求4所述的佐剂或免疫调谐剂，其还包括表面活性剂。6. 如权利要求5所述的佐剂或免疫调谐剂，其中所述表面活性剂为DDA-B、 DDA-C、DDA-X、 D0DA-B、 D0DA-C、 D0DA-X、 D0TAP、 D0DAP、 D0TMA、 DXPC、 DXPE、 DXPG或其组合。7. 如权利要求4-6所述的佐剂或免疫调谐剂，其包括其他免疫调谐剂，其中所述免疫调谐剂是例如TDB和MDP的非TLR配体或例如Poly I: C的TLR配体和/或其任何类似物。8. —种合成的匪G同系物、类似物或修饰形式，其基于具有8-36个碳的烃基链，该烃基链任选地具有脂质尾，每个脂质尾上含0-3个双键。9. 如权利要求8所述的合成的匪G类似物，其具有8-16个碳或如图9所示多达36个碳。10. —种疫苗，其包括如权利要求4-7所述的佐剂或免疫调谐剂，其用于肠胃外、口服、黏膜施用、舌下、透皮、体表、吸入、鼻内、气溶胶、眼内、气管内、直肠内、阴道、通过基因枪、皮肤贴片或以滴眼剂或漱口剂的形式。...
【专利技术属性】
技术研发人员：艾尔沙玛丽阿格尔，克莱尔安德森，彼得安德森，古尔戴尔伯斯拉，大卫米尼金，
申请(专利权)人：国立血清研究所，
类型：发明
国别省市：DK[丹麦]
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