一种通过层析法分离和纯化靶蛋白的方法，其中，该层析法旨在除去或贫化朊病毒（ＰｒＰｓｃ），该方法包括如下步骤：使一种可能受ＰｒＰｓｃ污染的、包括靶蛋白的样品与多元（ｍｕｌｔｉｍｏｄａｌ）层析材料接触；设定缓冲剂条件，使得该靶蛋白与该多元层析材料结合，而ＰｒＰｓｃ不与该多元层析材料结合；随后洗脱该靶蛋白。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种用于分离和纯化靶蛋白的方法,使该靶蛋白不含与疾病关联的蛋白形式PrPsc。
技术介绍
近来，在血浆衍生药物的纯化方法中，使PrPse失活并去除已经得到越来越多 的关注。其原因显然是由于疯牛病等的爆发。即使在生物制药法的药物生产中使用重 组细胞株，由于朊蛋白的出现，也认为是不完全安全的(Vorberg et al. , The Journal ofinfectious diseases 2004 ； 189 :431 9.Susceptibility of common fibroblast cell lines totransmissible spongiform encephalopathy agents)。在定义生物帝[j 药蛋白的纯化方法时，以可能除去朊蛋白的步骤来针对不同纯化步骤作出评估(Foster PR，et al ；Distributionof a bovine spongiform encephalopathy—derived agent over ion—exchange chroraat ο graphyu s e d in the preparation of concentrates of fibrinogen and factor VIII ；Vox Sang. 2004Feb ；86 (2) :92_9 ；Trejo SR, et al, Evaluation of virus and prion reduction in a newintravenous immunoglobulin manufacturing process.Vox Sang.2003 Apr ；84 (3) 176-87 ；ZeiIer B，et al， Concentration and removal of prion proteins from biological solutions ； Biotechnol Appl Biochem. 2003 Apr 37(Pt 2) 173-82 ；Foster et al. Studies on the removalof abnormal prion protein by processes used in the manufacture of human blood plasmaproducts，Vox Sang. 2000,78 :86—95 ；Burnouf et al. , Transfus Cl in Biol. 2006 Nov; 13 (5) :320-8. Epub 2007 Jan 23 Current strategies to prevent transmission of prions by humanplasma derivatives)。业已证明层析树脂在纯化法中能够除去PrPse(参考2-4，6-7)。然而，有报道指 出，使用具有不同化学结构和取代基的层析树脂以及不同缓冲剂体系的方法中，发现稳定 的PrPse清除因子这一事实,支持了该感染性病原体在层析载体表面非特异性结合这一观 点。虽然PrPse的去除表现出是可再生的,但不完全理解其去除机理引起了很多问题,例如 (a)如何确定层析载体结合TSE试剂的最大容量，(b)如何确保再循环凝胶的有效消毒程 序，以及(c)如何保证在生产循环中稳定地除去PrPse (Thyer J, Prion-removal capacity of chromatographic and ethanol precipitation steps used in the productionof albumin and immunoglobulins ；Vox Sang. 2006Nov ；91 (4) :292_300)。W0-A-98/0041披露了通过离子交换层析法从其他蛋白例如血红蛋白中除去朊病 毒。离子交换层析介质的制备揭示了用(g 环氧丙氧丙基)三甲氧基硅烷和二甲醇胺衍生 化硅胶以获得(均匀的)季铵基团的表面。W0-A-03/105911披露了通过常规离子交换层析法进行人体血浆清洁的方法,该离 子交换层析法采用盐梯度液进行洗脱。W0-A-94/08686披露了，在液体层析柱中利用单一分离介质进行连续式不同标记的层析分离法。D. B. Brimacombe 等人在 Biochem. J. (1999) 342，605-613 中披露了通过两个连续层析步骤进行的recPrP的纯化。第一步是在S-琼脂糖(S-S印harose)上进行阳离子交换 层析(150-650 NaC:[-梯度)。将所需要的洗脱液合并，进行第二个层析步骤(充填锌的螯 合琼脂糖；O-IOOmM咪唑梯度液)。P. R. Foster等人Vox Sanguinis 2000 ；78 86-95披露了通过许多步骤进行的血 浆产物的制造中朊蛋白的去除法。此方法包括在不同的层析凝胶、不同的柱中进行的4次 离子交换层析(步骤2、11、13和15)以及一次亲和层析(琼脂糖-FF上固定的肝素；步骤 12)。T. Burnouf 等人在 Tranfusion Clinique et Biologique 13(2006)320-328 中发表了有关在血浆衍生的凝血因子的不同层析步骤中去除TSE试剂的程度。该文献的 关注点在于生产 FV11:1 (DEAE-Toyopear 1 650M)、vWF (DEAE-Toyopear 1 650M)、纤维蛋白 原(DEAE-Toyopearl 650M)、凝血酶原复合物 /'FIX (DEAE-纤维素)、PCC (DEAE-琼脂糖)、 FIX (DEAE-琼脂糖或肝素-琼脂糖)以及凝血酶(S-琼脂糖)的各种(主要的)离子交换 层析步骤。分别考察了所有这些体系。J. Thyer 等人在 Vox Sanguinis (2006) 91, 292-300 中报道了在 DEAE-琼月旨 糖、CM-琼脂糖、以及强阴离子交换介质(Macro-Prep High Q)层析柱中的PrP的减 少(“Materialsand Methods “ ；Fig. 1，page 294 ；Tablel 1)。披露 了在另一个实 验中依次使用一个DEAE 琼脂糖-柱(DEAE Sepharose column)以及一个CM 琼脂 糖-(CM-Sepharose-)柱或离子交换介质-柱(Macro-Prep-column)。
技术实现思路
本专利技术的一个目的在于提供一种层析法，该方法是在对可能被PrPse污染的原料 (例如源自生物学衍生的原料)的分级分离过程中除去PrPsc^该方法将避免现有技术的缺 点。另--个目的在于设计--种方法，该方法将可靠地进行该纯化方法,并使层析载体再生。本专利技术的又一个目的在于提供使朊病毒贫化的蛋白成分。根据本专利技术,提供了一种通过层析法分离和纯化靶蛋白的方法,其中，该层析法去 除或贫化朊病毒(PrPsc;),包括如下步骤-使含有靶蛋白的、可能受PrPse污染的样品与多元层析材料接触；-设定缓冲剂条件，使得该靶蛋白与该多元层析材料结合，而PrPse则不与该多元 层析材料结合；-随后本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种通过层析法分离和纯化靶蛋白的方法，其中该层析法旨在除去或贫化朊病毒（ＰｒＰ↑［Ｓｃ］），包括如下步骤：－使可能受ＰｒＰ↑［ｓｃ］污染的、含有靶蛋白的样品与多元层析材料接触；－设定缓冲剂条件，使得该靶蛋白与该多元层析材料相结合，而ＰｒＰ↑［ｓｃ］则不与该多元层析材料结合；－随后洗脱该靶蛋白。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：古斯塔夫伊尔亚姆，马茨耶恩贝里，斯特凡温厄，安德烈奈塞尔塞韦，
申请(专利权)人：奥克塔法马有限公司，
类型：发明
国别省市：CH[瑞士]
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。