通过差分带电荷微粒迁移率进行脂蛋白分析制造技术

本发明专利技术提供利用差分带电荷微粒迁移率分析方法，由生物样品制备用于诊断目的的脂蛋白的仪器和方法，该脂蛋白包括ＨＤＬ、ＬＤＬ、Ｌｐ（ａ）、ＩＤＬ和ＶＬＤＬ。还提供通过差分带电荷微粒迁移率分析脂蛋白的大小分布的方法，该脂蛋白通过本发明专利技术的方法制备。还提供评估脂质相关的健康风险、心血管状况、心血管疾病的风险和对治疗性介入的反应性的方法，该方法利用通过本发明专利技术的方法测定的脂蛋白大小分布。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术总体涉及利用离子迁移率测量装置和方法进行用于诊断目的的微粒大小分析和包括脂蛋白的生物微粒的分析的领域。本专利技术还提供用于纯化和分离包括但不限于 脂蛋白和含有脂蛋白的生物复合物的生物分子的方法和仪器。
技术介绍
提供以下描述仅仅帮助理解本专利技术。引用的文献或提供的信息没有一个被承认是 本专利技术的现有技术。 在美国，心血管疾病是死亡的主要原因。除了患者人口特征和当前的健康外，用于 测定将来心脏病风险的最常用和接受的方法包括测定胆固醇和脂蛋白的血清浓度水平。存 在完善确定的生化标志——包括例如但不限于胆固醇和脂蛋白水平——的截断值的推荐 值，用于测定风险。然而，胆固醇和脂蛋白测量显然不是全部情况，因为多达50%的处于早 期心脏疾病风险的人们目前没有被ATP III指南(即，由National Cholesterol Education Program and the National Heart, Lung andBlood Institute发布的Adult Treatment Panel III guidelines)所包含。 测量血液中脂蛋白和其它脂质的方法包括例如但不限于评价禁食的总胆固醇、三 酸甘油脂、HDL(高密度脂蛋白)和/或LDL(低密度脂蛋白)胆固醇浓度。当前，测量LDL 胆固醇最广泛使用的方法是间接Friedewald方法(Friedewald等，Clin. Chem. ， 1972， 18 : 499-502)。 Friedewald测定方法需要三个步骤1)测定血桨三酸甘油脂(TG)和总胆固 醇(TC)，2)沉淀VLDL(极低密度脂蛋白)和LDL(低密度脂蛋白)，和3)定量HDL胆固醇 (HDLC)。将VLDLC估算为血浆三酸甘油脂的五分之一，由公式LDLC = TC-(HDLC+VLDLC)计 算LDL胆固醇浓度(LDLC)。虽然一般是有用的，但是在某些情况下Friedewald方法的准确 度有限。例如，误差可能出现在三个步骤的任何一步中，部分因为这个方法要求在每个步骤 中使用不同的方法。而且，Friedewald方法在某种程度上为间接的，因为它假定VLDLC浓 度是血浆三酸甘油脂的五分之一。因此，当一些患者的VLDL偏离这个比例时，出现进一步 的不准确。 评价血液脂蛋白的另一种方法考虑测量脂蛋白的大小和密度。由于遗传和非遗传 的影响，脂蛋白的大小分布在个体中呈现不同。脂蛋白的直径一般为大约7nm到大约120nm 的范围。在这个直径大小范围中，存在为心血管疾病重要预测物的微粒亚组分。例如，在血 流中，VLDL运输三酸甘油脂；因此，血液中高的VLDL水平是高甘油三酯血症的指示。通过 显示物质数量为脂蛋白大小或密度的函数的分析技术，可以识别这些亚组分。 关于脂蛋白密度分析，通过在不同盐密度背景中的分析超离心，可以分析超离心 分离的脂蛋白的漂浮性质，以便测定水合LDL的密度，如在Lindgren等，Blood Lipids and Lipoproteins :QuantitationComposition and Metabolism, Ed. G丄Nelson, Wiley， 1992， p. 181-274中显示，其通过引用并入本文。例如，通过使用已知为平衡密度梯度超离心分离 的制备分离技术，基于密度或直径，LDL类别可以被进一步地分成七个亚类。已知特定LDL 亚类LDL-IIIa、IIIb、IVa和IVb的升高水平与包括动脉粥样硬化的CHD ( S卩，冠心病)增加的风险密切相关。而且，测定总血清胆固醇水平以及LDL和HDL组分中的胆固醇水平常规 地用作冠心病风险的诊断试验。脂蛋白类和亚类分布是更具预测性的试验，然而，由于它昂 贵和费时，因此医生一般安排它仅用于有限数量的患者。 关于脂蛋白大小的测量，目前没有单一的接受方法。在临床环境中测量脂蛋白大 小的已知方法包括垂直自动方案(vertical autoprofile) (VAP)(参见，例如Kulkarni等， J. Lip. Res. ，1994,35 :159-168)，其中使用流式分析仪(flow analyzer)对脂蛋白类中胆 固醇进行酶法分析，随后进行分光光度测定并分析得到的数据，所述脂蛋白类是通过短暂 方定转单垂直超离心(short spin single vertical ultracentrifugation)进行分离的。 另一种方法(参见例如Jeyarajah，E. J.等，Clin Lab Med. ，2006,26 :847-70)使 用核磁共振(NMR)测定脂蛋白亚类的浓度。在这个方法中，获得血浆或血清样品的NMR化 学位移谱。观察到的整个血浆样品的谱随后通过计算机方法与先前获得的脂蛋白亚类NMR 谱的已知加权和进行匹配。给出样品谱和计算谱之间最佳拟合的加权因子随后用于估算血 液样品中组成脂蛋白亚类的浓度。 另一种方法，梯度凝胶电泳分离(参见例如美国专利5， 925， 229 ;通过在此引用并 入)是分离LDL亚类的梯度凝胶电泳方法。通过梯度凝胶电泳分离LDL组分，产生了与通 过超离心分离获得的结果相当的结果。这种方法产生了 LDL亚类的高分辨率，并且主要由 研究工作实验室使用这种方法。然而，凝胶分离方法——其依赖于随后被光学测量的所有 成分的均匀染色——受制于非均匀的显色性。也就是，不是所有的脂蛋白同等地良好染色。 因此，有差别的染色吸收可能产生错误的定量结果。另外，不均匀的显色性可能产生错误的 定性结果，因为测量的峰可以被扭曲到足够的程度以致引起脂蛋白的一类或一个亚类与另 一类或亚类混淆。而且，梯度凝胶电泳可能花费许多小时才完成。 实际上，定量和定性测定来自生物样品的脂蛋白的更近方法已经由Be皿er等(美 国专利7， 259， 018 ;通过在此引用并入)描述，该方法使用微粒大小和/或离子迁移率装置。 专利技术概述 通过本专利技术提供用于对脂蛋白进行差分带电荷微粒迁移率分析(differential charged-particle mobility analysis)(在本文也称为"离子迁移率分析")的样品的制 备方法，和可用于对脂蛋白进行差分带电荷微粒迁移率分析的仪器，所述对脂蛋白进行差 分带电荷微粒迁移率分析利用气相电泳迁移分子分析仪。 在第一方面，本专利技术提供脂蛋白的纯化方法，该脂蛋白适合于脂蛋白类和亚类的 差分带电荷微粒迁移率分析，该方法包括以下步骤(a)制备含有在样品下面的第一溶液 的离心管，该样品具有一种或多种脂蛋白和非脂蛋白成分，该第一溶液具有大于1.00g/mL 和小于或等于大约1. 21g/mL的第一密度；和(b)使离心管受到足以使非脂蛋白成分向离心 管底部迁移并且远离脂蛋白的离心，由此提供纯化的脂蛋白。在一些实施方式中，第一密度 的范围为大约1. 15g/mL到大约1. 21g/mL。在一些实施方式中，第一溶液优选地为水溶液， 更优选地为水或其氖化形式。 在本专利技术的这个方面的情况下，通过处理哺乳动物的血液标本，获得含有脂蛋白 的样品，如本文所述，该处理任选地包括通过加入包括例如但不限制于Na、 K和/或Cs的 Cl、Br和/或I盐的盐调整密度。 本专利技术的这个方面进一本文档来自技高网...

【技术保护点】
纯化脂蛋白的方法，所述脂蛋白适合于脂蛋白类和亚类的差分带电荷微粒迁移率分析，所述方法包括：（ａ）制备含有在样品下面的第一溶液的离心管，所述样品包括一种或多种脂蛋白和非脂蛋白成分，所述第一溶液具有大于１．００ｇ／ｍＬ并小于或等于大约１．２１ｇ／ｍＬ的第一密度；和（ｂ）使所述离心管受到足以使所述非脂蛋白成分向所述试管的底部迁移并且远离所述脂蛋白的离心。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：MP考菲尔德，RE赖茨，S李，GK李，R克劳斯，PJ布兰奇，WH班纳，E考奈尔，
申请(专利权)人：奎斯特诊断投资公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]