用于鉴定抗原的组合物和方法技术

提供了具有处在规定位置的不连续成员的可复制的库，用于筛选病原生物的抗原。还提供的是使用这种库的方法以及特异性抗原ＣＴ７８８，其在衣原体感染期间诱导Ｔ细胞活化。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】 关于联邦政府赞助的研究的声明美国政府在本专利技术中具有已付清的许可(paid-up license)和在有限情 况下要求专利所有人根据国家卫生研究院给予的拨款AI039558和 AI055900的条款所规定的合理的条件来许可他人的权利。
技术介绍
受到对人类的新疾病威胁的出现、在西方世界早先可医治的疾病的 再度出现例如TB、生物恐怖主义的威胁，以及只要发现合适的抗原， 癌症可以通过疫苗接种来治疗的不断增多的证据的驱动，关于疫苗技术 的令人兴奋的事件在过去几年中已经更新了。传染性疾病仍然是世界范 围内发病和死亡的主要原因之一，每年杀死超过1千3百万青年和儿童。 TB本身对每年的2百万例死亡负责，而估计每年总体超过3百万个体 死于疟疾和AIDS。传染性疾病的新出现或再度出现，也形成了对全世 界健康的持续不断的威胁。许多传染性疾病，例如痴疾、TB、 AIDS、 SARS和流感由能够直接在人类细胞内生长和传播的细胞内病原体引 起。因为细胞内病原体在宿主细胞内隔离生长，在产生保护性免疫方面， 体液(抗体)免疫反应常常是无效的。当它们有作用时，疫苗是预防和治疗疾病的最有效的方式之一。不 幸的是，许多研究和临床疫苗计划具有很低的成功概率，因为在本专利技术 之前，尚没有方法来筛选所有可能的抗原或预测哪些抗原将是有效的。 因而，对于开发用于传染性疾病和癌症的治疗的有效疫苗的新策略存在 着需要。专利技术概述在第一个方面，本专利技术提供了可复制的库，其包括处在规定位置的 至少20 (例如，30、 40、 50、 60、 70、 80、 90、 100、 125、 150、 200、 300、 400、 500、 600、 700、 800、 900、 1000、 1200、 1500、 2000、 2500、 3000、 4000或5000)个不连续的成员(discrete members),其中(a)所述库的成员各自包括细胞或病毒，所述细胞或病毒包括编码多肽的至少一部分的第一多核苷酸，所述多肽由所述细胞或病毒以外的病原生物的 基因组编码，所述第一多核苦酸可操作地连接到启动子，和(b)所述 库包括多核苷酸，该多核芬酸编码由所述病原生物的基因组(即，蛋白质组)编码的多肽的至少10% (例如，20%、 30%、 40%、 50%、 60%、 70%、 80%、 90%、 95%、 98%或99%)的一部分。在相关的第二个方面，本专利技术提供了可复制的库，其包括处在规定 位置的至少10 (例如，15、 20、 30、 40、 50、 60、 70、 80、 90、 100、 125、 150、 200、 300、 400、 500、 600、 700、 800、 900、 1000、 1200、 1500、 2000、 2500、 3000、 4000或5000)个不连续的成员，其中(a) 所述库的成员各自包括细胞或病毒，所述细胞或病毒包括编码多肽的至 少一部分的第一多核普酸，所述多肽由所述细胞或病毒以外的病原生物的基因组编码，所述第一多核苷酸可操作地连接到启动子，(b)所述 成员各自包括少于24 (例如，23、 22、 21、 20、 19、 18、 17、 16、 15、14、 13、 12、 11、 10、 9、 8、 7、 6、 5、 4、 3或2)个不同的多核苷酸， 每个所述多核苦酸编码病原生物的基因组编码的多肽的至少一部分，和(c)所述库包括多核苷酸，该多核苦酸编码由所述病原生物的基因组 (即，蛋白质组)编码的多肽的至少部分的至少10% (例如，20% 、 30%、 40%、 50%、 60%、 70%、 80%、 90%、 95%、 98%或99%)。在本专利技术的前两个方面的任一个中，所述多肽的部分可以具有与所 述病原生物的基因组编码的多肽的相应部分至少50%、 60%、 70%、 80%、 90%、 93%、 95%、 98%或99%的序列同一性。进一步的，所述库的每个 成员可以包括由所述病原生物的基因组编码的单个多核苷酸。最后，所 述病原生物可以是细菌、病毒或真菌。在第三个方面，本专利技术提供了可复制的库，其包括至少10(例如，15、 20、 30、 40、 50、 60、 70、 80、 90、 100、 125、 150、 200、 300、 400、 500、 600、 700、 800、 900、 1000、 1200、 1500、 2000、 2500、 3000、 4000或5000)个不连续的成员，其中所述成员各自包括第一细胞或病 毒，所述第一细胞或病毒包括编码多肽或其部分或片段的多核苦酸，与 相应的正常细胞相比在赘生性细胞内所述多肽是差异表达的，所述多核 苦酸可操作地连接到启动子，和所述库包括多核苷酸，该多核苦酸编码 与所述相应的正常细胞相比在赘生性细胞内差异表达的多肽的至少5 %(例如，10°/。、 20%、 30%、 40%、 50%、 60%、 70%、 80%、 90%、 95%、98%或99%)的部分。所述多肽的部分可以具有与在赘生性细胞中表达 的多肽的相应部分至少50%、 60%、 70%、 80%、卯％、 93%、 95%、 98% 或99%的序列同一性。所述库的每个成员可以含有少于50、 40、 30、 20、 15、 14、 13、 12、 11、 10、 9、 8、 7、 6、 5、 4、 3或2个多核苦酸，每 个多核苷酸编码在所述赘生性细胞中差异表达的不同多肽的 一部分。在上述三个方面的任一个中，所述病毒可以是噬菌体。所述细胞或 第一细胞可以是细菌(例如，E.co/纟)。所述细菌或病毒可以进一步包 括编码在细菌中不天然地表达的多肽，例如孔洞形成蛋白(例如，LLO) 的第二多核苷酸。做为选择，所述第一多核苷酸可以进一步编码第二多 肽，例如孔洞形成蛋白(例如，LLO)。第一多核普酸的每一个可以进 一步包括第 一标签序列，其中每个所述多核苦酸编码包括第 一标签和所 述多肽的部分的融合蛋白。每个多核苷酸可以进一步包括第二标签序 列。所述启动子可以是可诱导启动子(例如，T7启动子)。在第四个方面，本专利技术提供了测定多肽是否是免疫原性的方法，其 包括步骤(a)用第二细胞(例如，巨噬细胞)分别地接触以上方面的 任一个的库的每个成员，所述第二细胞能够(i)内吞每个成员中的所述 细胞或病毒，和(ii)通过I类MHC途径在它的表面展示肽，其中所述 库的每个成员包括由所述多核苷酸编码的多肽，(b)用CTL细胞(例 如，多种CTL细胞)分别地接触步骤(a)的每个成员，所述CTL细胞(neoplasm)的哺乳动物；和(c )检测所述CTL细胞是否被活化，其中所 述CTL细胞的活化确定了所述成员中含有的多肽是否是免疫原性的。所 述库的每个成员可以包括编码孔洞形成蛋白(例如，LLO)的多核菩酸。 所述库的每个成员可以在所述接触步骤(a)之前被杀死。在接触步骤 (b)之前，所述第二细胞可以;波杀死。所述方法可以进一步包括步骤 (d)从所述库的复制拷贝(replica c叩y)中回收编码步骤(c)中鉴定的 多肽的多核苷酸，或者在接触步骤(a)之前包括步骤，产生所述库的 复制品。所述方法可以进一步包括使用所述库进行方法步骤本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种可复制的库，包含处在规定位置的至少２０个不连续的成员，其中　（ａ）所述库的所述成员各自包含细胞或病毒，所述细胞或病毒包含编码多肽的至少一部分的第一多核苷酸，所述多肽由病原生物的基因组编码，所述第一多核苷酸可操作地连接到启动子，和　 　（ｂ）所述库包含编码所述多肽的至少５０％的部分的多核苷酸，所述多肽由所述病原生物的基因组编码。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：DE希金斯，MN斯塔恩巴赫，T吉拉恩，NR罗恩，
申请(专利权)人：哈佛大学校长及研究员协会，
类型：发明
国别省市：US[美国]