高赖氨酸蛋白基因ＳＢ４０１表达载体的构建方法及其应用技术

本发明专利技术涉及高赖氨酸蛋白基因Ｓｂ４０１表达载体的构建与应用。旨在解决将外源高赖氨酸蛋白基因导入植株中并高效并高效表达的技术难题。该方法将采用提取马铃薯的ＲＮＡ，通过反转录获得马铃薯全长ＣＤＮＡ，用ＰＣＲ方法获得ｓｂ４０１基因，并将该基因重组后克隆到植物双元表达载体中；通过农杆菌介导方法将该基因导入玉米基因组，并获得表达转基因阳性苗，并高效表达，可以提高玉米赖氨酸的含量，进而提高玉米的品质；本发明专利技术方法费用低、拷贝数低、重复性好、基因沉默现象少、同时具有转育周期短及能转化较大片段等独特优点。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种高赖氨酸蛋白基因Ｓｂ４０１植物表达载体的构建方法，包括以下步骤：（１）提取马铃薯花粉高赖氨酸基因ｓｂ４０１总ＲＮＡ，并逆转录成ｃＤＮＡ；（２）以上述ｃＤＮＡ为模板，以特异引物克隆马铃薯高赖氨酸基因ｓｂ４０１；（３）将马铃薯高赖氨酸基因ｓｂ４０１与亚克隆载体ｐＧＳＩ连接，再将连接产物转化Ｅ．Ｃｏｌｉ　ＪＭ１０９感受态细胞，构建马铃薯高赖氨酸基因ｓｂ４０１亚克隆载体质粒；（４）将上述克隆质粒构建到植物表达载体ｐＣＡＭＢＩＡ１３００，获得含高赖氨酸基因ｓｂ４０１片段重组表达载体ＣＵＢ－ｓｂ４０１。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：铁双贵，岳润清，朱卫红，齐建双，王延召，孙静，卢彩霞，柏松，
申请(专利权)人：河南省农业科学院，
类型：发明
国别省市：41[]